楊先霞

摘 要：在我國(guó)科學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展的社會(huì)背景下，獸醫(yī)的抗體檢測(cè)工作也得到了很大的進(jìn)展，而獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室作為動(dòng)物疫病預(yù)防和控制的關(guān)鍵部門(mén)，必須要引起相關(guān)部門(mén)的重視。因?yàn)椴煌膭?dòng)物抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)需要不一樣的檢測(cè)環(huán)境，而獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室則會(huì)直接影響到抗體檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，本文從當(dāng)前獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室存在的問(wèn)題入手，對(duì)其影響抗體檢測(cè)結(jié)果的因素及對(duì)策進(jìn)行了深入的研究和探討。

關(guān)鍵詞：影響;獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室;抗體;檢測(cè)結(jié)果;因素;對(duì)策

一、獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室存在的問(wèn)題分析

1.缺乏實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員

通過(guò)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，各區(qū)縣的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的工作人員大多數(shù)都是以兼職的身份工作的，這些工作人員的流動(dòng)性大，缺乏專(zhuān)業(yè)性和技術(shù)性，在這種獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室工作人員嚴(yán)重短缺的情況下，一些動(dòng)物的抗體檢測(cè)工作根本無(wú)法有效的開(kāi)展，有的實(shí)驗(yàn)室只有2名工作人員，并且還身兼數(shù)職，不以實(shí)驗(yàn)室的工作為主，也有一些區(qū)縣的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室只有一名工作人員，這樣更無(wú)法承擔(dān)起相應(yīng)的動(dòng)物抗體檢測(cè)工作。再加上這些工作人員不但能力有限，而且缺乏學(xué)習(xí)和進(jìn)修的機(jī)會(huì)，專(zhuān)業(yè)能力不能滿足新時(shí)期獸醫(yī)工作的需要。

2.缺乏獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)經(jīng)費(fèi)

在我國(guó)經(jīng)濟(jì)建設(shè)飛速發(fā)展的今天，動(dòng)物的抗體檢測(cè)工作雖然得到了重視，但在獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)費(fèi)投入上卻存在著嚴(yán)重的不足，一些區(qū)縣表面上將動(dòng)物的抗體檢測(cè)及各種疫病監(jiān)測(cè)工作列入經(jīng)費(fèi)支持的范疇，但實(shí)際撥下來(lái)用于獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的經(jīng)費(fèi)卻非常的少，這就使獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室因?yàn)槿狈ο鄳?yīng)的儀器設(shè)備和試劑等等不能進(jìn)行相應(yīng)的抗體檢測(cè)工作，同時(shí)也會(huì)使一些抗體檢測(cè)的結(jié)果缺乏準(zhǔn)確性和可信性，嚴(yán)重制約著獸醫(yī)抗體檢測(cè)工作的開(kāi)展。

3.缺乏相應(yīng)的儀器設(shè)備

上面已經(jīng)提到，因?yàn)槿狈Ρ匾馁Y金支持，使獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)缺乏先進(jìn)的儀器設(shè)備的現(xiàn)象。但在現(xiàn)實(shí)情況下，許多獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室雖然已經(jīng)配備了相應(yīng)的儀器，但因?yàn)檫@些設(shè)備采購(gòu)年限過(guò)長(zhǎng)，在工作中會(huì)出現(xiàn)各種各樣的故障和問(wèn)題，這種設(shè)備老化及缺乏維護(hù)保養(yǎng)的現(xiàn)狀，也成為影響獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室抗體檢測(cè)結(jié)果的一個(gè)重要因素。

4.缺乏嚴(yán)格的管理制度

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的抗體檢測(cè)是一項(xiàng)非常嚴(yán)肅工作，只有建立健全相應(yīng)的管理制度，才能保證其檢測(cè)結(jié)果的可信度，所以作為管理者必須要從當(dāng)?shù)孬F醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的現(xiàn)狀出發(fā)，制定相應(yīng)的管理制度，提高工作人員的責(zé)任心和使命感，提高大家的工作能力，同時(shí)開(kāi)展全面的學(xué)習(xí)與培養(yǎng)工作，只有這樣才能保證獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室工作的順利進(jìn)行，提高抗體檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率。

二、影響獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室抗體檢測(cè)結(jié)果因素及對(duì)策研究

通過(guò)對(duì)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室中存在的問(wèn)題分析發(fā)現(xiàn)，要想保證動(dòng)物抗體檢測(cè)工作的高效發(fā)展，就必須要從影響其檢測(cè)的各項(xiàng)因素進(jìn)行分析，并找出相應(yīng)的解決辦法與對(duì)策。

1.抗體檢測(cè)試劑的影響

試劑選擇是保證抗體檢測(cè)質(zhì)量的關(guān)鍵要素，但不同廠家的試劑在使用效果上仍存在差異， 在購(gòu)買(mǎi)與ELISA 檢測(cè)相關(guān)試劑時(shí)應(yīng)引起注意，盡量購(gòu)買(mǎi)與 ELISA 檢測(cè)試劑盒相配套的化學(xué)試劑，注意 ELISA 檢測(cè)試劑盒相配套的化學(xué)試劑生產(chǎn)日期及保存環(huán)境溫度。保存方式不對(duì)均會(huì)影響 ELISA 檢測(cè)結(jié)果，過(guò)期的試劑也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。

2.抗體檢測(cè)樣本的影響

被檢測(cè)的樣本應(yīng)該是新鮮的，尤其是血清樣本，在采集過(guò)程中，應(yīng)使用無(wú)菌采集管和采集針，分離血清后要分裝到無(wú)菌 EP 管中，由于被檢樣品的污染可以導(dǎo)致 ELISA 敏感性和準(zhǔn)確性降低。因此，采集樣品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，減少被檢驗(yàn)品的污染。被檢樣品的保存溫度要適宜。尤其是抗體檢測(cè)，樣品要進(jìn)行分裝若干份，嚴(yán)禁反復(fù)凍融樣品，被檢樣品在反復(fù)凍融過(guò)程中會(huì)破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，在檢測(cè)過(guò)程中易形成假陽(yáng)性。因此，被檢樣品在嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

3.抗體檢測(cè)中人為因素的影響

人為因素也是影響獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室抗體檢測(cè)結(jié)果的主要因素，人為因素主要表現(xiàn)在加樣、 溫育、洗板、顯色、結(jié)果判定等眾多因素均可以影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

（1）加樣操作因素。不同類(lèi)型抗體檢測(cè)技術(shù)被應(yīng)用于動(dòng)物傳染性疾病抗體效價(jià)檢測(cè)中，在檢測(cè)過(guò)程中加樣成為影響動(dòng)物傳染性疾病抗體效價(jià)主要因素。 尤其在添加樣品過(guò)程中，一定要注意加樣過(guò)程中不能出現(xiàn)氣泡，加樣要均勻，加樣過(guò)程中一定要定量，一般為 50μl 樣品， 輕輕加到被檢樣品孔。另外，要注意樣品在檢測(cè)前一定要解凍完全，樣品在使用之前提前拿出來(lái)，在室溫解凍后，混合均勻后，再進(jìn)行檢測(cè)。

（2）孵育時(shí)間與溫度。ELISA 檢測(cè)相關(guān)抗體時(shí)，被檢樣品在加完后，一般進(jìn)行孵育，使被檢樣品和所包被抗原或者抗體更好的結(jié)合，在被檢樣品和所包被抗原或者抗體更好的結(jié)合時(shí)需要合適溫度與時(shí)間。 不同類(lèi)型抗體檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)參照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行孵育，孵育時(shí)間和溫度嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)推薦 進(jìn)行操作。使ELISA 包被的抗原或者抗體失活后，使被檢樣品不能與抗體或者抗原結(jié)合形成抗原復(fù)合物，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

（3）洗板次數(shù)因素。ELISA 檢測(cè)相關(guān)抗體時(shí)，加完二抗進(jìn)行孵育后需進(jìn)行洗板，一般情況性有手工洗板和機(jī)器洗板兩種方式。尤其在洗板過(guò)程中，洗滌次數(shù)應(yīng)該合理，洗滌次數(shù)過(guò)多容易洗掉反應(yīng)結(jié)合的復(fù)合物，洗板次數(shù)過(guò)少導(dǎo)致洗滌不干凈，容易造成二抗稀釋液的殘留，影響反應(yīng)結(jié)果。在洗滌完后注意拍板，把多余洗滌液甩出去，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

（4）結(jié)果判定因素。在檢測(cè)過(guò)程中，顯色反應(yīng)結(jié)束，加終止液，將酶標(biāo)板放在酶標(biāo)儀上讀取結(jié)果要在 15min 內(nèi)完成，設(shè)定的波長(zhǎng)要與試劑說(shuō)明書(shū)保持一致，酶標(biāo)儀使用前先預(yù)熱 15～30min 后，空白板自檢 1～2 次再進(jìn)行樣品測(cè)試。

4.抗體檢測(cè)環(huán)境的影響

溫度、濕度等外界的環(huán)境對(duì) ELISA 檢測(cè)結(jié)果影響極大。實(shí)驗(yàn)室溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響試劑的穩(wěn)定性、 敏感性和樣品與試劑的有效結(jié)合， 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)時(shí)適宜的溫度是 20～25℃ 。

三、結(jié)語(yǔ)

總而言之，獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室是進(jìn)行動(dòng)物疫病檢測(cè)、預(yù)防和控制的主要機(jī)構(gòu)之一，承擔(dān)著重要的學(xué)術(shù)調(diào)查研究以及動(dòng)物疫病的科學(xué)防控工作，只有進(jìn)一步提高獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)支撐，才能保證其在抗體檢測(cè)實(shí)踐操作過(guò)程中減少誤差，提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和高效性，使獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的功能發(fā)揮到最大化。

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