賈修歧，楊新宇，金志民

（牡丹江師范學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，黑龍江牡丹江 157011）

黑線姬鼠（Apodemus agrarius）屬嚙齒目、鼠科、姬鼠屬，廣泛分布于我國(guó)各地農(nóng)林區(qū)，不僅是主要害鼠之一，也是某些傳染疾病的主要宿主和傳染媒介，被列為我國(guó)衛(wèi)生防疫和植物保護(hù)的重點(diǎn)監(jiān)控對(duì)象[1]。

關(guān)于黑線姬鼠相關(guān)的文獻(xiàn)已有許多[2-4]，但關(guān)于黑線姬鼠雌雄個(gè)體間血清蛋白電泳圖譜比較分析還未見(jiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)采用PAGE的方法對(duì)黑線姬鼠的血清蛋白進(jìn)行比較分析，并建立黑線姬鼠血清蛋白圖譜，為黑線姬鼠的深入研究和鼠類傳染病防治提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

黑線姬鼠，于2018年10月用鼠籠捕自黑龍江省牡丹江市三道關(guān)林區(qū)（海拔329～386 m）的健康成年個(gè)體，雌雄個(gè)體各4只。

1.1.2 血清蛋白的制備

血清的制備:從黑線姬鼠心臟采血，室內(nèi)靜置20 min 后于 4 000 r/min，4 ℃，離心 20 min，上清液即為血清。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

DYY-III2穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀、HWS28型電熱恒溫水浴鍋（北京市六一儀器廠生產(chǎn)）、高速冷凍離心機(jī)（BECRMANTMCOULTERTM64R Centrifuge）、微量移液槍（Eppendorf）、AlphaImager Mini）型凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)Alpha公司，。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)藥品

Tris、HCl、TEMED、過(guò)硫酸銨、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、甘氨酸、溴酚藍(lán)、蔗糖、考馬斯亮藍(lán)R-250、丙三醇、冰乙酸等，均為天津市永大化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)的分析純或生化試劑。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采用PAGE和垂直板電泳的方法[5]，對(duì)黑線姬鼠的血清蛋白和組織蛋白進(jìn)行分離、分析。為避免電泳處的譜帶具偶然誤差，分別在與每個(gè)樣本相鄰的點(diǎn)樣孔進(jìn)行3次重復(fù)點(diǎn)樣。血清蛋白染色方法分別參照文獻(xiàn)[6]。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

（1）制備聚丙烯酰胺凝膠:將凝膠緩沖液、凝膠貯存液、超純水、過(guò)硫酸銨按照1:3:2:1的比例混合均勻后灌至已經(jīng)制備好的玻璃板模型中，插入點(diǎn)樣梳，待膠聚合后緩慢拔出點(diǎn)樣梳，用超純水沖洗干凈后安裝在電泳槽中備用；

（2）進(jìn)行預(yù)電泳40min；

（3）進(jìn)行點(diǎn)樣和電泳；

（4）待電泳結(jié)束后拆下玻璃板，取出聚丙烯酰胺凝膠放入染色液中染色30min后放入洗脫液中進(jìn)行洗脫至出現(xiàn)清晰的血清蛋白譜帶后迅速傾倒染色液，放入保存液中保存。

2 結(jié)果與分析

電泳分離黑線姬鼠血清蛋白的電泳圖譜如圖1所示，譜帶分布和電泳遷移率見(jiàn)表1。

如圖1、表1所示，黑線姬鼠雌、雄個(gè)體分別分離出12、19條譜帶，遷移率為0.026～0.944，其中14、18、20號(hào)譜帶為雌性黑線姬鼠所特有；4、7、9、10、12、15、16、19、21、22號(hào)帶為雄性黑線姬鼠特有帶；其余9條帶為雌、雄黑線姬鼠共有帶。按電泳遷移率的不同將電泳圖譜劃分為4個(gè)區(qū)域:Ⅰ區(qū)為清蛋白區(qū)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ區(qū)為球蛋白區(qū)。

在Ⅰ區(qū)內(nèi)，黑線姬鼠雌、雄個(gè)體共分離出1、2、3號(hào)譜帶，遷移率0.700～0.944，活性:3號(hào)＞2號(hào)＞1號(hào)。Ⅱ區(qū)分離出4、5、6號(hào)3條譜帶，遷移率0.649～0.545，其中，4號(hào)帶為雄性黑線姬鼠特有帶，5、6號(hào)帶為雌雄共有帶，活性:5號(hào)＞6號(hào)。Ⅲ區(qū)共分離出7～14號(hào)的8條共有譜帶，遷移率0.321～0.522，其中8、14號(hào)帶為雌性黑線姬鼠特有帶，活性:14號(hào)＞8號(hào)；7、9、10、12號(hào)帶為雄性黑線姬鼠所特有，活性:10號(hào)＞9號(hào)＞12號(hào)＞7號(hào)；8、11、13號(hào)帶雌雄黑線姬鼠共有帶，且活性13號(hào)＞11號(hào)＞8號(hào)。Ⅳ區(qū)共有15～22號(hào)的8條譜帶，遷移率0.026～0.246，其中18、20號(hào)帶為雌性黑線姬鼠特有帶，活性:18號(hào)＞20號(hào)；15、16、19、21、22號(hào)帶雄性黑線姬鼠特有帶，活性:15號(hào)=16號(hào)＞19號(hào)＞21號(hào)＞22號(hào)；17號(hào)帶為雌雄黑線姬鼠共有帶，活性:雌性＞雄性。

圖1 黑線姬鼠血清蛋白質(zhì)電泳圖譜

3 結(jié)論

黑線姬鼠雌雄個(gè)體血清蛋白分別分離出12、19條譜帶，通過(guò)電泳圖譜可以看出黑線姬鼠血清蛋白譜帶活性和分布有著明顯差異。這與物種間基因的選擇性表達(dá)以及雌雄激素分泌水平密切相關(guān)。球蛋白與機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)[7]，黑線姬鼠雌雄個(gè)體在球蛋白區(qū)分別分離出12和19條譜帶，由此可見(jiàn)雄性黑線姬鼠在自然環(huán)境中的抗逆性強(qiáng)于雌性黑線姬鼠。

表1 黑線姬鼠血清蛋白質(zhì)譜帶分布及電泳遷移率