杜楊，李彬，朱貴冠

（河南省安陽市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心，河南 安陽 455000）

喹乙醇是一種化學(xué)合成的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，可促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)合成代謝，提高飼料能量利用率，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育[1]，同時(shí)具有較強(qiáng)的抑制或殺滅細(xì)菌的作用[2]。在飼料加工工業(yè)中常與淀粉或麥麩、磷酸氫鈣、碳酸鈣配制成飼料預(yù)混劑。在畜牧和水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)，為了盲目追求經(jīng)濟(jì)價(jià)值[3]，曾被養(yǎng)殖戶廣泛添加于飼料中。有研究發(fā)現(xiàn)，大劑量喹乙醇對(duì)動(dòng)物有毒性作用，而且喹乙醇在體內(nèi)有蓄積性，在動(dòng)物體內(nèi)蓄積到一定程度時(shí)，會(huì)對(duì)動(dòng)物和人產(chǎn)生致畸、致癌、致突變的“三致”作用[4]。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2638號(hào)公告規(guī)定：自2018年5月1日起，停止生產(chǎn)喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3種獸藥的原料藥及各種制劑，相關(guān)企業(yè)的獸藥產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào)同時(shí)注銷；自2019年5月1日起，停止經(jīng)營(yíng)、使用喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3種獸藥的原料藥及各種制劑。

目前，我們多采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法——高效液相色譜法（GB/T 8381.7-2009）對(duì)飼料中的喹乙醇進(jìn)行測(cè)定，但該方法前處理過程中，離心后 的上清液要經(jīng)濾紙過濾，過濾過程可能對(duì)目標(biāo)檢測(cè)物質(zhì)產(chǎn)生一定的吸附，同時(shí)增加檢測(cè)成本，延長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間。本試驗(yàn)對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)法進(jìn)行了改良，通過提高離心機(jī)轉(zhuǎn)速并縮短離心時(shí)間來替代濾紙過濾這一環(huán)節(jié)，在保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性較好的情況下，提高了工作效率，降低了檢測(cè)成本。

1 材料

1.1 試劑 甲醇，超純水，鹽酸；提取液：甲醇+水，其比例為5∶95。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 準(zhǔn)確稱取喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品50mg于50mL棕色容量瓶中，加30mL水超聲溶解，冷卻至室溫，定容至刻度，搖勻，即得1 mg/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。4℃保存，有效期為1個(gè)月。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)工作液 精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1mL于100 mL容量瓶中，以水定容至刻度。混勻，制成濃度為10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.4 空白添加樣品 分別按照10、50、100 mg/kg的比例在空白樣品中添加喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品，混勻。

1.5 儀器與設(shè)備 離心機(jī)，超聲波清洗器，固相萃取裝置，恒溫振蕩器。

2 測(cè)定方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)方法 稱取5 g試樣于具塞錐形瓶中，加入50mL提取液，具塞置入搖床中，室溫下恒溫避光振蕩45min（振蕩速度為110r/min）。提取液在3500r/min下離心10min，上清液經(jīng)濾紙過濾，濾液作為SPE小柱凈化使用?；罨玫腟PE小柱分別用2mL淋洗液1、淋洗液2和淋洗液3淋洗，然后將小柱吹干。最后用2 mL洗脫液洗脫。洗脫液過0.22μm有機(jī)相濾膜，濾液上機(jī)測(cè)定。

2.2 改良方法 稱取2 g試樣于具塞錐形瓶中，加入20 mL提取液，具塞置入搖床中，室溫下恒溫避光振蕩45min（振蕩速度為110r/min）。提取液在5000r/min下離心6min，上清液作為SPE小柱凈化使用。其余步驟同上。

2.3 液相色譜條件 柱溫25℃，進(jìn)樣體積10μL，檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

3 結(jié)果

用標(biāo)準(zhǔn)法和改良方法在空白樣品中分別添加不同濃度（10、50、100 mg/kg）喹乙醇進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)添加濃度進(jìn)行5次重復(fù)測(cè)定，求相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。分別按2.1和2.2步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2和表3。從表2和表3可以看出，添加量在10、50、100 mg/kg時(shí)，改良方法的回收率在95%～110%之間，重復(fù)性好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于1%。

表2 標(biāo)準(zhǔn)方法添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）

表3 改良方法添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）

4 結(jié)果比較

改良方法的回收率為95%～110%，精密度（RSD）＜1%，符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求（RSD＜10%）。與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)HPLC法相比，改良的方法不采用濾紙過濾，節(jié)省約25 min的處理時(shí)間。綜合比較認(rèn)為，改良法具有速度快、成本低、靈敏度高、精密度好等特點(diǎn)，尤其適用于大批量配合、濃縮飼料樣品中的喹乙醇檢測(cè)。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，檢測(cè)配合飼料、濃縮飼料中喹乙醇的含量時(shí)，可以通過提高離心機(jī)轉(zhuǎn)速，適當(dāng)縮短離心時(shí)間來替代濾紙過濾這一步驟，在不影響樣品的回收率和重復(fù)性的前提下，可以減少實(shí)驗(yàn)步驟，節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間，增加樣品前處理批次，提高工作效率。

5 效益分析

在檢測(cè)限相同的條件下，改良法對(duì)樣品前處理的時(shí)間可降為70～80 min，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)樣品前處理的時(shí)間約為100 min。按照一年做400批次樣品算，樣品前處理批次可以擴(kuò)大1～1.5倍，降低了檢測(cè)成本，為加大監(jiān)管力度和保障畜產(chǎn)品質(zhì)量安全帶來了極大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。