溫海燕，董寶霞，孔 娜，葛仕豪，姜莉莉

（菏澤學(xué)院藥學(xué)院，山東菏澤 274015）

濟(jì)寧青山羊以性成熟早、常年發(fā)情、繁殖率高、毛色花型獨特、羔皮優(yōu)質(zhì)而著稱，是我國優(yōu)良的皮肉兼用山羊品種，也是國家級畜禽遺傳資源保護(hù)品種。在我國地方山羊品種中，濟(jì)寧青山羊繁殖力最高，年產(chǎn)兩窩或兩年三窩[1]，另外吃草少、耐粗飼、易飼養(yǎng)、成本低，具有極高的飼養(yǎng)價值[2]。然而濟(jì)寧青山羊在散養(yǎng)過程中易發(fā)生腸道寄生蟲感染，由此引起消化道紊亂、腹瀉、消瘦、貧血、發(fā)育不良、生長緩慢、抵抗力下降等癥狀，同時可誘發(fā)其他疾病，嚴(yán)重時甚至死亡，給濟(jì)寧青山羊養(yǎng)殖帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失[3-4]。

為了解山東省菏澤市散養(yǎng)濟(jì)寧青山羊腸道寄生蟲感染情況，2019年3月，采集3家濟(jì)寧青山羊散養(yǎng)戶的32份新鮮糞便進(jìn)行蟲卵檢測，以期為散養(yǎng)濟(jì)寧青山羊腸道寄生蟲的診斷及防制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 糞便樣品

從菏澤市鄆城縣楊莊集鎮(zhèn)孫莊村、劉莊村、馮莊村3家濟(jì)寧青山羊散養(yǎng)戶（編號為1、2、3）采集32份樣品（表1）。把每份糞便樣品分別裝入干凈的封口袋中，并做好編號和記錄，帶回實驗室，放在4 ℃冰箱中保存待檢。3家散養(yǎng)戶衛(wèi)生條件良好，主要以放養(yǎng)為主，在家中飼喂玉米秸稈、花生秧、玉米面、小麥麩皮等。

表1 3家散養(yǎng)戶的濟(jì)寧青山羊飼養(yǎng)數(shù)量及糞樣采集數(shù)量

1.2 方法

1.2.1 目鏡測微尺標(biāo)定 按照《微生物學(xué)實驗教程》中的顯微鏡測微尺的使用方法[5]，分別對10×物鏡、40×物鏡下的尺狀、方格狀目鏡測微尺進(jìn)行標(biāo)定，并記錄結(jié)果。

1.2.2 離心沉淀法檢測 由于吸蟲、棘頭蟲蟲卵比重比水大，即使用自然沉淀法也可檢測，而用離心沉淀法則可以提高工作效率。根據(jù)《動物寄生蟲病學(xué)實驗教程》中離心沉淀法的操作方法[6]，取新鮮糞便2 g，置于小燒杯中，加入20 mL清水，攪拌均勻，然后用兩層紗布過濾；將濾液分裝至離心管中，500 r/min離心3 min；倒去大部分上清液，留約1/2沉淀物的溶液量；用膠頭吸管吹打均勻后，取1滴糞液于載玻片上，加蓋玻片，在光學(xué)顯微鏡下觀察；參照《動物寄生蟲病學(xué)實驗教程》中的羊寄生蟲蟲卵形態(tài)圖片[6]和《獸醫(yī)寄生蟲病學(xué)》中的各種寄生蟲蟲卵大小[3]進(jìn)行判定。

1.2.3 飽和鹽水漂浮法檢測 該方法根據(jù)比重不同，使比飽和鹽水輕的蟲卵漂于液體表面，以達(dá)到富集蟲卵的目的，主要用于線蟲卵、絳蟲卵和球蟲卵囊檢測。根據(jù)《動物寄生蟲病學(xué)實驗教程》中飽和鹽水漂浮法操作方法[6]，取新鮮糞便2 g，置于小燒杯中，加入20 mL飽和鹽水，用玻璃棒攪拌均勻，然后用兩層紗布過濾；將濾液分裝至青霉素小瓶中，至瓶口稍隆起，但不要溢出，放上蓋玻片，靜置30 min；將蓋玻片置于滴有甘油水的載玻片上，在光學(xué)顯微鏡下觀察；參照《動物寄生蟲病學(xué)實驗教程》中的羊寄生蟲蟲卵形態(tài)圖片[6]和《獸醫(yī)寄生蟲病學(xué)》中各種寄生蟲蟲卵大小[3]進(jìn)行判定。

2 結(jié)果

2.1 目鏡測微尺標(biāo)定

10×物鏡、40×物鏡下，尺狀、方格狀目鏡測微尺的標(biāo)定結(jié)果見表2。

表2 目鏡測微尺每個小格長度 單位：μm

2.2 離心沉淀法檢測

利用離心沉淀法檢測32份糞樣，檢出6份陽性糞樣，檢測到2種吸蟲蟲卵（圖1）。根據(jù)蟲卵形態(tài)和大小初步判定：前后盤吸蟲卵，呈長橢圓形、灰色，內(nèi)含大量卵黃細(xì)胞，大小為87.5 μm×52.5 μm；歧腔吸蟲卵，呈卵圓形、褐色，有卵蓋，大小為 27.5 μm×18.8 μm。

2.3 飽和鹽水漂浮法檢測

在32份糞樣中，通過飽和鹽水漂浮法，檢出31份陽性糞樣，檢出8種蟲卵或卵囊。根據(jù)形態(tài)和大小初步判定結(jié)果見表3、圖2。

圖1 離心沉淀法檢測蟲卵結(jié)果（400×）

表3 根據(jù)形態(tài)和大小初步判定的蟲卵種類

2.4 總體感染情況

3個散養(yǎng)戶的32份糞便樣品中，均有蟲卵被檢出，感染率為100%。其中：線蟲感染率最高，為90.6%；其次是球蟲，感染率為81.3%；吸蟲感染率最低，為18.8%（表4）。

表4 散養(yǎng)濟(jì)寧青山羊不同腸道寄生蟲感染情況

圖2 飽和鹽水漂浮法檢測蟲卵結(jié)果（400×）

2.5 混合感染情況

32份糞樣品中，28份為混合感染，混合感染率為87.5%（28/32）。其中：2種寄生蟲混合感染19份，占混合感染的67.9%（19/28）；3種混合感染5份，占混合感染的17.9%（5/28）；4種和5種混合感染各2份，均占混合感染的7.1%（2/28），見表5。

表5 散養(yǎng)濟(jì)寧青山羊腸道寄生蟲混合感染情況

3 討論

糞便中的寄生蟲檢測應(yīng)用最多的是飽和鹽水漂浮法和離心沉淀法。飽和鹽水漂浮法可用于線蟲蟲卵、絳蟲蟲卵、球蟲卵囊的檢測。該方法應(yīng)用廣，檢出率高，易于操作。離心沉淀法可用于吸蟲、棘頭蟲蟲卵檢測。該方法應(yīng)用廣，但檢出率低，盡管沉淀時糞液已經(jīng)過濾處理，但在沉淀蟲卵的同時會同時伴有大量糞渣沉淀下來，因而增加了檢出蟲卵的難度。根據(jù)蟲卵形態(tài)可以初步判定寄生蟲種類，從而可以采取針對性藥物進(jìn)行驅(qū)蟲。但是許多寄生蟲的蟲卵或卵囊形態(tài)相似，因而僅借助蟲卵形態(tài)往往無法確定具體種類。本試驗在根據(jù)蟲卵形態(tài)鑒定的基礎(chǔ)上，首次應(yīng)用顯微鏡測微尺，對檢測到的蟲卵進(jìn)行大小測定，摸清了不同種類寄生蟲蟲卵的大小特性，為寄生蟲蟲卵種類診斷提供了一種有效的方法，并為下一步蟲卵的分子生物學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查奠定了基礎(chǔ)。

本調(diào)查從散養(yǎng)濟(jì)寧青山羊糞便中檢測到10種腸道寄生蟲，寄生蟲感染率高達(dá)100%，主要以線蟲和球蟲感染，感染率分別為90.6%和81.3%，并且2種寄生蟲的混合感染最為普遍。朱丹等[7]報道河南省大尾寒羊中的腸道寄生蟲有10種，總感染率為98.8%，其中球蟲、圓線蟲和鞭蟲為主要感染蟲種，并且混合感染也較普遍。睢攀博等[8]報道河南安陽市羊腸道寄生蟲有7種，總感染率為66.93%，其中球蟲等腸道原蟲的感染率為57.16%，線蟲、吸蟲、絳蟲等腸道蠕蟲感染率為26.14%，并且2種腸道寄生蟲的混合感染率最高。張文麗等[9]報道四川省涼山彝族自治州會理黑山羊腸道寄生蟲有13種，其中線蟲10種，感染率高達(dá)89.29%，其次為球蟲，感染率為83.93%。閆曉菲等[10]報道新疆烏魯木齊市羊腸道寄生蟲有25種，其中球蟲感染率最高，為71.38%，其次是線蟲，感染率為36.53%。本檢測結(jié)果與以上地區(qū)羊腸道寄生蟲感染的種類及感染率有一定差異，但總體一致，這可能與本次檢測的采樣范圍和數(shù)量偏少有關(guān)。不同研究發(fā)現(xiàn)的羊腸道寄生蟲種類與感染率不同，其原因可能與羊的個體差異以及飼養(yǎng)管理情況以及地域和檢測季節(jié)不同有關(guān)，需進(jìn)一步開展研究。但上述研究均顯示，羊腸道寄生蟲感染普遍存在，因而需要加大羊腸道寄生蟲防治力度，積極做好羊腸道寄生蟲驅(qū)蟲工作，保障羊養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)利益。

4 結(jié)論

經(jīng)對山東省菏澤市3家濟(jì)寧青山羊散養(yǎng)戶的32份糞樣進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)該地的散養(yǎng)濟(jì)寧青山羊腸道寄生蟲感染較為普遍，以線蟲感染為主，其次為球蟲，且多呈混合感染，因而該地散養(yǎng)戶需要積極開展羊群驅(qū)蟲工作，同時加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，防止寄生蟲感染。