張啟龍，沈光年，鄭雪瑩，周德剛，張 瑋，劉?，?，劉愛玲，張 躍，傅彩霞，劉曉冬

（1. 北京市動物疫病預防控制中心，北京 102629；2. 中國動物衛(wèi)生與流行病學中心，山東青島 266032）

北京市從2015年開始全面落實中央決策部署， 有序推進“非首都核心功能”的疏解，不斷加強農(nóng)業(yè)面源污染防治，進行了相關畜禽養(yǎng)殖清退工作，奶牛存欄量由當時的16萬頭左右減至目前的8萬頭左右，同時加強了奶牛疫病防控和奶產(chǎn)品質量監(jiān)管，尤其是奶牛結核病等人獸共患病的控制與凈化，以保障公共衛(wèi)生安全。近幾年，北京市奶牛結核病得到了有效控制，奶牛結核病血漿陽性率穩(wěn)定控制在1.0%左右。2017年5月21日，北京市密云區(qū)某奶牛場送檢奶牛新鮮血漿173份，依據(jù)檢測標準《結核分枝桿菌γ-干擾素體外檢測方法》（SN/T 3312—2012），進行牛結核病檢測，檢出51份陽性，樣品陽性率高達29.5%。為查明原因，及時處置和防控疫病，前往現(xiàn)場進行了流行病學調查。

1 方法

1.1 病例定義

1.1.1 疑似病例 按照《結核分枝桿菌γ-干擾素體外檢測方法》（SN/T 3312—2012）診斷為陽性的病例。

1.1.2 確診病例 經(jīng)《動物結核病診斷技術》（GB/T 18645—2002），采用牛型結核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應試驗，局部炎性反應皮厚差≥2.0 mm的疑似病例。

1.2 調查方式及內(nèi)容

以實地勘察方式，了解奶牛場周邊養(yǎng)殖情況、內(nèi)部布局；與密云區(qū)動物疫病預防控制中心工作人員、奶牛場飼養(yǎng)管理人員進行訪談，獲取本場及周圍養(yǎng)殖場情況；查閱相關檔案記錄，獲取牛場免疫、飼料購入、調運、檢疫、人員車輛進出等信息。

1.3 檢測方法

依據(jù)《動物傳染病學》[1]和《動物結核病 診 斷 技 術》（GB/T18645—2002）， 采 用Mycobacterium bovisGamma Interferon Test Kit for Cattle（批號BG170212Z，Prionics AG公司產(chǎn)品）和牛型結核分枝桿菌PPD（批號201610，哈藥集團產(chǎn)品），進行實驗室診斷和臨場皮試診斷。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用Excel 2016整理采集到的數(shù)據(jù)，運用SPSS 23.0進行統(tǒng)計學分析。

2 結果

2.1 發(fā)病牛場概況

該奶牛場位于北緯 40.518 47°、東經(jīng) 117.167 45°，毗鄰一條公路，坐落于一座小山的半山坡上，周邊3 km范圍內(nèi)沒有奶牛場（圖1），場門前有一小池塘。該奶牛場建于2012年，共存欄奶牛173頭，其中犢牛28頭、青年牛47頭、泌乳期牛61頭、干奶期牛37頭。該場每年檢測結核病1次，每次檢測均能達到全覆蓋。該場養(yǎng)殖、消毒檔案較健全。據(jù)場主介紹：該場員工比較固定，沒有串場行為；入口消毒池能做到每周更換1次；由于密云區(qū)正在進行養(yǎng)殖清退行動，2016年7月后，該場未引入新的牛只；2016年9月，送檢樣品的結核分枝桿菌γ-干擾素試驗結果均為陰性；2016年11月，考慮成本問題，從內(nèi)蒙古赤峰市購入一批飼草，之前一直飼喂進口飼草。

圖1 牛場地理位置（紅色標注）

該牛場設有辦公區(qū)、儲料間、擠奶廳、產(chǎn)房、犢牛舍、青年牛舍、干奶期牛舍、泌乳牛舍，具體分布見圖2。

2.2 疫病與處置情況

2017年5月21日通過干擾素試驗檢出51頭可疑病例，6月12日經(jīng)現(xiàn)場皮試確診36頭。疑似病例和確診病例主要集中在青年牛、泌乳牛和干奶期牛（表1）。對確診的陽性牛，依據(jù)《牛結核病防治技術規(guī)范》和《北京市奶牛布病凈化實施方案》進行全部撲殺，并作無害化處理，同時對牛場進行消毒，密切觀察和監(jiān)測剩余牛只。

2.3 風險因素

現(xiàn)場調查發(fā)現(xiàn)，場主因考慮成本問題，僅對泌乳期奶牛飼喂進口飼草，而對青年牛和干奶期牛飼喂產(chǎn)自內(nèi)蒙古赤峰市的國產(chǎn)飼草，暫未對犢牛飼喂飼草，因此存在“不同生長時期”和“飼喂國產(chǎn)飼草”兩個風險因素。分析結果（表2）顯示，不同生長時期奶牛間的檢測結果差異不顯著（P＞0.05），飼喂產(chǎn)自內(nèi)蒙古赤峰市國產(chǎn)飼草的奶牛陽性率顯著高于未飼喂的（P＜0.05）。

圖2 牛場布局

表1 不同奶牛群病例分布 單位：頭

表2 不同風險因素分析結果

4 討論

牛結核病是一種由牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis）引起的一種慢性細菌性人獸共患傳染病[1]，除主要經(jīng)呼吸道感染外，消化道傳播是牛分枝桿菌的第二常見傳播途徑[2]。王華等[3]提到，牛結核分枝桿菌在環(huán)境中具有較高的耐受性。O'Reilly等[4]和Daborn等[5]闡述了牛結核病可以通過墊料或者污染的干草等間接傳播給牛。李智勇等[6]報道，內(nèi)蒙古地區(qū)奶牛結核病陽性率為5.6%（0～22.9%），該地區(qū)的牛養(yǎng)殖主要以放牧為主。本研究通過現(xiàn)場調查以及相關統(tǒng)計分析，排除其他可能風險因素后，推斷引起該奶牛場發(fā)病的風險因素可能為飼喂從內(nèi)蒙古赤峰市購入的飼草。

牛結核菌素（PPD）皮內(nèi)變態(tài)反應試驗（TST）是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）推薦的唯一國際貿(mào)易指定檢測方法，也是我國目前確診牛結核病的標準方法。牛結核病ELISA γ-干擾素檢測試驗（IFN-γ-ELISA）被廣泛用于動物結核病的初篩[7]。本調查中的兩種檢測方法符合率較低，可能與人員操作、不同的刺激抗原及人員實際測量誤差等有關。我國現(xiàn)行的牛結核病檢測標準PPD皮內(nèi)變態(tài)反應試驗操作繁瑣，易產(chǎn)生應激，而IFN-γ測定法的優(yōu)點是操作簡便、快速、通量高[8]。IFN-γ測定法已經(jīng)在澳大利亞、愛爾蘭、新西蘭、阿根廷、美國等完成了田間試驗，證明該方法的敏感性為77.0%～93.6%，高于結核菌素試驗的敏感性（65.6%～84.4%），目前在澳大利亞和新西蘭已被認可為正式的檢測方法[9]，并應用于法國斗牛群結核病凈化檢測[10]。2018年上海市也將IFN-γ測定方法推廣應用到奶牛結核病凈化場驗收中。因此，建議相關管理部門將IFN-γ測定法進行大范圍推廣應用，以節(jié)省成本，減少對牛群生產(chǎn)性能的影響。

北京市自2010年實施奶牛結核病凈化后，牛結核病陽性率有所下降[11]，但近年來又出現(xiàn)波動，因此相關方應進一步重視牛結核病凈化工作。養(yǎng)殖場應當加強飼養(yǎng)管理，識別和控制相應風險因素；監(jiān)管部門應加強風險因素的來源控制，提高檢測方法的敏感性，推進簡捷、敏感檢測方法的推廣應用，探究高品質牛奶市場準入機制，從而有效凈化奶牛結核病，切實保障公共衛(wèi)生安全。

5 結論

本次調查采用臨場皮試、詢問場主、查看現(xiàn)場和實驗室檢測等方法，確認了北京市密云區(qū)某奶牛場的36頭牛結核病陽性病例；通過風險分析，推測飼喂從內(nèi)蒙古赤峰市購入的飼草是主要的風險因素。因此，北京市應慎重從牛結核病流行地區(qū)購入飼草，同時要加強牛結核病檢測和牛場消毒，及時淘汰陽性奶牛，盡快使奶牛場達到結核病凈化標準。