劉禮杰，盛 敏，李 蛟，冉曉龍，李靖寧，王新衛(wèi)

（1. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南鄭州 450002；2. 河南省動物疫病預(yù)防控制中心，河南鄭州 471000；3. 寧夏回族自治區(qū)動物疾病預(yù)防控制中心，寧夏銀川 750000）

布魯菌氏?。╞rucellosis，以下簡稱布?。┦怯刹剪斒暇˙rucella）引起的人獸共患傳染病。該病主要傳染源是發(fā)病及帶菌的牛、羊等家畜。布魯氏菌主要侵害感染動物的生殖系統(tǒng)，導(dǎo)致懷孕母畜胎膜發(fā)炎，引起不孕、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎等，從而降低家畜的繁殖成活率，使產(chǎn)肉和產(chǎn)奶量下降，嚴(yán)重影響畜牧業(yè)發(fā)展[1]。該病還具有重要的公共衛(wèi)生意義，人可通過接觸病畜流產(chǎn)物等而感染，導(dǎo)致感染者出現(xiàn)骨關(guān)節(jié)、神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)等的損害[2]。而家畜，特別是牛、羊、豬等，是導(dǎo)致人患病的主要傳染源。國內(nèi)布病總體上表現(xiàn)為以羊種布魯氏菌為主的混合感染，但隨著時間和地域的改變，其流行特點也有所變化[3-4]。為此，本研究以河南省某縣所有養(yǎng)羊場和散養(yǎng)村為研究對象，通過血清學(xué)檢測，掌握該縣羊群布病感染狀況，找出布病感染陽性場，通過問卷調(diào)查，探尋該縣羊養(yǎng)殖場布病發(fā)生的相關(guān)風(fēng)險因素，為羊布病的綜合防控提供技術(shù)支持，也為人布病防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究設(shè)計

采用橫斷面研究方法[5]，通過抽樣采樣、實驗室檢測和問卷調(diào)查相結(jié)合的方式，獲得該縣羊布病的場群血清流行率及相關(guān)風(fēng)險因素。

1.1.1 研究區(qū)域和群體 據(jù)2016年底調(diào)查數(shù)據(jù)，該縣共有323個養(yǎng)羊場和散養(yǎng)村，存欄羊18 500只，其中養(yǎng)殖場（存欄≥30只）54個，存欄10 307只，占總存欄的 55.71%。目標(biāo)群是全縣所有羊養(yǎng)殖場和散養(yǎng)村，以場（群）為研究單元，即以1個養(yǎng)殖場的所有羊或1個村的散養(yǎng)羊為1個研究單元。該縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)羊養(yǎng)殖情況見表1。

表1 某縣不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)的羊養(yǎng)殖情況

1.1.2 病例定義 對該縣羊養(yǎng)殖場和散養(yǎng)村采集的羊血清樣本，經(jīng)虎紅平板凝集試驗初篩和試管凝集試驗確診為陽性的羊定義為陽性羊；至少有1只陽性羊的養(yǎng)殖場（群）定義為陽性場（群），未檢測到陽性羊的場（群）為陰性場（群）。

1.1.3 實驗室檢測 采用虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗的垂直聯(lián)合試驗方法。據(jù)相關(guān)資料[6]，所用試驗的敏感性和特異性如下：虎紅平板凝集試驗敏感性為95%、特異性為80%；試管凝集試驗敏感性為85%、特異性為90%；垂直聯(lián)合試驗敏感性為81%、特異性為98%。依據(jù)文獻(xiàn)[5]所述方法，計算真實流行率和置信區(qū)間。

1.1.4 抽樣策略 采用分層兩階段隨機抽樣，即養(yǎng)殖場和散養(yǎng)村分層抽樣。第1階段：在全縣范圍內(nèi)隨機抽取養(yǎng)殖場和散養(yǎng)村，按估計流行率方法抽取[7]，采用WinEpi軟件，按照95%的置信水平，50%的預(yù)期群流行率和5%的可接受誤差抽樣，計算出從全縣269個村中，需抽取159個村；采取隨機抽樣方式確定最終采樣村，全縣54個養(yǎng)殖場全部抽取。第2階段：在所抽取的場群內(nèi)，按發(fā)現(xiàn)疫病方法進(jìn)行隨機抽樣，以95%的置信水平、15%的預(yù)期流行率，計算出每個場群內(nèi)需抽取20只羊（少于20只的全抽）；以基于風(fēng)險的方式采樣，優(yōu)先抽取種公羊、有流產(chǎn)史的母羊、年齡超過6個月的羊以及從外地新引進(jìn)的羊。

1.1.5 調(diào)查問卷設(shè)計 依據(jù)生產(chǎn)實際，從飼養(yǎng)管理、生物安全等方面，設(shè)計“羊群布魯菌病感染風(fēng)險因素調(diào)查表”，在采樣的同時開展問卷調(diào)查。

1.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

對血清學(xué)檢測結(jié)果和調(diào)查數(shù)據(jù)，用Excel進(jìn)行匯總和描述性分析，用IBM SPSS 22統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素分析，保留P＜0.2的風(fēng)險因素，然后對保留的風(fēng)險因素進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，得到回歸模型；對建立的Logistic模型制作ROC曲線，評估模型的擬合度。

2 結(jié)果

2.1 血清流行率

2.1.1 總體情況 共采集159個散養(yǎng)村、54個養(yǎng)殖場的3 528份血清樣品。經(jīng)實驗室檢測，檢出26個陽性散養(yǎng)村、12個陽性養(yǎng)殖場，散養(yǎng)村表觀群體流行率為16.35%，真實群流行率為18.17%（95%CI：12.14%～24.20%），養(yǎng)殖場表觀群體流行率為22.22%，真實群流行率為25.60%（95%CI：13.87%～37.33%）。

2.1.2 不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)情況 不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)的群體流行率差別很大，在0～33.63%之間不等（表2），其中4個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的群體真實血清流行率在20%以下。

2.2 感染風(fēng)險因素分析

針對12個陽性養(yǎng)殖場、38個陰性養(yǎng)殖場，發(fā)放調(diào)查問卷54份，回收有效問卷50份，回收有效率為92.59%。對調(diào)查問卷涉及的潛在風(fēng)險因素進(jìn)行二分類變量轉(zhuǎn)換并進(jìn)行分析。

2.2.1 單因素分析 針對問卷中的12個可能風(fēng)險因素進(jìn)行分析，篩選到2個有統(tǒng)計學(xué)意義的風(fēng)險因素（P＜0.05），分別是“羊販隨意進(jìn)出養(yǎng)殖場”和“共用種公羊”（表3）。

2.2.2 多因素Logistic回歸模型建立 將單因素分析中P＜0.2的變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果見表4。針對Logistic回歸模型建立了ROC曲線見圖 1，曲線下面積為0.809（95%CI：0.670～0.949）。

表2 某縣不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)散養(yǎng)村羊群布病血清學(xué)檢測結(jié)果

3 討論

本研究顯示，該縣散養(yǎng)村的羊布病表觀群體流行率為16.35%，真實群流行率為18.17%，養(yǎng)殖場的表觀群體流行率為22.22%，真實群流行率為25.60%。26個陽性場（村）分布在全縣11個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)的流行率差別較大。本研究以羊群內(nèi)個體預(yù)期流行率15%計算抽樣量，可能對結(jié)果造成一定影響。實際上，每個養(yǎng)羊場戶的群內(nèi)流行率也不同，若使用同一預(yù)期流行率計算個體抽樣量，可能導(dǎo)致

場村內(nèi)個體流行率低于15%的養(yǎng)羊場戶難以被發(fā)現(xiàn)，從而出現(xiàn)假陰性群的情況。羊種布魯氏菌致病力強、群內(nèi)傳播速度快，因此對陰性場戶的鑒別影響不大。本研究優(yōu)先抽取風(fēng)險動物群體，且陽性場群定義為至少有1只羊經(jīng)虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗的垂直試驗檢測為陽性，這樣可以降低假陰性群出現(xiàn)的概率，減少低特異性對陽性場戶判斷的影響。

表3 羊養(yǎng)殖場布病傳播風(fēng)險因素單變量分析

表4 某縣布病傳播風(fēng)險因素多因素Logistics回歸分析結(jié)果

圖1 Logistic回歸模型的ROC曲線

風(fēng)險因素單因素分析顯示，“存欄量、是否有技術(shù)人員和近1年來是否有流產(chǎn)、羊販隨意進(jìn)出養(yǎng)殖場、共用種公羊等”是可能的風(fēng)險因素，但僅有“羊販隨意進(jìn)出養(yǎng)殖場、共用種公羊”2個因素存在顯著差異，提示其為該地羊患布病的高風(fēng)險因子。Logistic 回歸結(jié)果進(jìn)一步證實了兩因素的高風(fēng)險性。但也應(yīng)該看到，本調(diào)查依據(jù)橫斷面問卷和現(xiàn)場調(diào)查獲得的信息，結(jié)合采樣獲得的血清學(xué)結(jié)果，設(shè)計了病例對照研究，以此來進(jìn)行羊群或者羊只感染布病的風(fēng)險因素分析研究。此研究中，因為血清學(xué)檢測方法自身的敏感性和特異性具有客觀不足的問題，而且采用的抽樣方法盡管經(jīng)過嚴(yán)密設(shè)計，但在實際執(zhí)行中可能受到養(yǎng)殖戶不接受和不配合等因素影響，因而不能排除存在假陰性或假陽性場戶的可能。在收集信息過程中，少部分調(diào)查者不愿意參與答題，導(dǎo)致調(diào)查沒有回應(yīng)，使結(jié)果可能存在一定偏倚，尤其對“是否共用種公羊、羊羔出生地是否清洗和消毒、公羊來源”等敏感問題。此外，由于問卷調(diào)查中的小規(guī)模飼養(yǎng)場戶居多，飼養(yǎng)管理情況比較相似，因而導(dǎo)致“發(fā)病羊是否隔離、是否有專用產(chǎn)房”等因素在分析中差異不顯著。

此外，研究中把存欄量≥30只定義為羊養(yǎng)殖場，但僅依靠存欄量來劃分，而不依據(jù)生物安全水平、養(yǎng)殖場建設(shè)等其他情況來取舍，這會導(dǎo)致一定的選擇偏倚。但該調(diào)查結(jié)果能基本反映該縣的羊布病實際流行情況，當(dāng)然也需要進(jìn)一步的隊列研究。

4 結(jié)論

本研究表明，該縣羊布病流行較為嚴(yán)重，“羊販隨意進(jìn)出養(yǎng)殖場、共用種公羊”是該縣羊養(yǎng)殖場感染布病高危風(fēng)險因素。研究提示，該縣需要加強布病防控，提高養(yǎng)羊場戶的生物安全管理水平，加強散養(yǎng)村內(nèi)種公羊的監(jiān)測與凈化，及時淘汰陽性羊。