摘? 要：采用血凝抑制試驗方法對采自河南信陽、濟源、焦作和周口4個地區(qū)的6438份血液樣品檢測新城疫抗體，采用熒光PCR方法對178份雙拭子樣品進行新城疫病毒檢測。結果表明：4個地市新城疫抗體合格率遠超過國家規(guī)定的70%合格率標準，不同規(guī)模雞場新城疫抗體水平有差異，所有雙拭子樣品均未檢到新城疫病毒存在。

關鍵詞：新城疫;血凝抑制;熒光PCR;抗體水平;合格率

中圖分類號：S858.312.4? ? ?文獻標識碼：B? ? ?文章編號：1673-1085（2019）04-0047-03

新城疫（Newcastie disease，ND）是由新城疫病毒引起的雞和多種禽類的急性高度接觸性傳染病，主要引起禽類呼吸困難、下痢、神經(jīng)紊亂、粘膜和漿膜出血。ND傳播迅速，發(fā)病率和死亡率均較高，是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的重要疾病之一，給養(yǎng)殖場帶來較大的經(jīng)濟損失， 是我國的一類動物疫病[1-3]。近年來，非典型新城疫多發(fā)，且較難防治，給雞場生產(chǎn)帶來較大損失。新城疫作為病毒性疾病，無特效藥物治療，主要是靠疫苗免疫，因此抗體水平的高低對該病的防控起到?jīng)Q定性作用。筆者組織人員對2018年河南省部分地區(qū)的新城疫免疫抗體情況開展調查，以期對該病的防控提供參考資料。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 樣品來源? 檢測所用血液樣品、拭子樣品由當?shù)匾呖貦C構人員在各地免疫過新城疫疫苗的雞場采集，血液樣品采自雞翅靜脈，3000r/min，離心10min后裝于1.5ml離心管中;取無菌棉拭子在雞口腔和泄殖腔采集后裝于含有PBS的離心管中，共采集178份;血清及拭子樣品均冷凍保存?zhèn)錂z。

1.1.2? 檢測試劑和設備耗材? 新城疫血凝抑制試驗抗原、陽性血清及陰性血清（青島立見診斷技術發(fā)展中心）;新城疫病毒核酸測定試劑盒（熒光PCR法）（上海之江生物科技股份有限公司）;熒光PCR儀、核酸提取儀（西安天隆科技有限公司）;離心機（湖南湘儀離心機儀器有限公司）;移液器（德國eppendorf），一次性聚丙乙烯反應板等。

1.2? 方法

1.2.1? 新城疫抗體檢測? 采用血凝抑制試驗（HI）方法進行，按照國家標準GB/16550-2008進行。

反應板中每孔加入0.025ml PBS;第1孔中加入0.025ml血清;在反應板上將血清做橫向0.025ml的對倍稀釋，至第10孔;在第1孔至第11孔中，每孔加入0.025ml的4HAU抗原，室溫下（20～25℃）靜置30min或2～8℃ 45～60min;每孔加入0.025ml 1%（V/V）的雞紅細胞懸液，輕晃混勻后，室溫（20～25℃）靜置20～40min或2～8℃ 45～60min，當對照孔紅細胞呈顯著紐扣狀時判定結果。

結果判定：以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀釋倍數(shù)判為該血清的HI效價。當陽性血清的HI效價與已知效價誤差不超過1個滴度，陰性血清效價不高于1：4時，試驗方可成立。被檢樣品HI效價≤1：4判為陰性;等于1：8判為可疑（可疑樣品應重檢，重檢效價≥1：8判為陽性，<1：8判為陰性）;≥1：16判為陽性。

1.2.2? 新城疫病原學檢測? 采用新城疫病毒核酸測定試劑盒檢測采集的雙拭子樣品中是否含有新城疫病毒，具體操作參照試劑盒說明書進行。

1.2.3? 檢測結果分析? 根據(jù)ND抗體檢測結果，分析不同地區(qū)、不同規(guī)模雞場新城疫抗體水平;根據(jù)ND病原學檢測結果分析各地是否有新城疫病毒感染。

2? 檢測結果與分析

2.1? 不同地區(qū)雞場新城疫抗體檢測情況? 從表1可以看出，4個地市共檢測219個雞場、樣品6438份，合格率為91.64%，遠超過國家規(guī)定的70%的合格率標準;4個地市抗體合格率均在80%以上，其中信陽地區(qū)最高為99.78%，最低的濟源為83.53%。

2.2? 不同規(guī)模雞場新城疫抗體檢測情況? 從表2可以看出，4個地市規(guī)模雞場平均合格率為94.32%，高于散養(yǎng)戶（82.04%）12個百分點;其中，規(guī)模場的抗體合格率中，信陽和焦作的最高，為為100%，濟源最低為87.62%;散養(yǎng)戶抗體合格率，信陽最高為99.16%，最低的濟源僅為70.19%。

2.3? 新城疫病毒檢測情況? 由圖1和表3可以看出，采集的178份雙拭子樣品中未檢出新城疫病毒。

3? 討論與分析

現(xiàn)階段，新城疫不是國家強制免疫疫病，但由于該病的危害性較大，國家十分重視該病的防控工作，部分省市也將該病納入強制免疫范圍，由政府免費為養(yǎng)殖戶提供疫苗，各級畜牧獸醫(yī)部門檢查評估時新城疫抗體水平也是必須檢測的。從本次調查結果看，4個地市的新城疫抗體水平均在80%的以上，超過國家要求的70%的合格率標準，其中信陽、周口、焦作3個地市的抗體合格率均在90%以上，只有濟源市的為83.53%。國內其他地區(qū)新城疫抗體水平調查情況：張登基調查2016～2017年甘肅金昌金川區(qū)的抗體水平為97.07%[4]、謝偉調查2015～2017年四川樂山的抗體合格率為89.15%[5]、蘇琪調查西安市抗體合格率為93%[6]。從表2可以看出不同規(guī)模雞場的抗體合格率有差異，從調查結果來看，規(guī)模場的抗體合格率高于散養(yǎng)戶的抗體合格率，分析原因：一是規(guī)模場制定免疫程序合理，新城疫免疫次數(shù)較多，散養(yǎng)戶免疫意識淡薄，免疫次數(shù)少或免疫劑量不足;二是規(guī)模場定期檢測，根據(jù)檢測的抗體水平開展補免補防，散養(yǎng)戶較少進行檢測。

做好新城疫的防控，要采取綜合性的防控措施[7-8]：一是加強疫苗免疫。制定科學合理的免疫程序，雛雞要在7日齡、21日齡滴鼻免疫，以后每隔2～3個月，加強免疫一次;二是實時檢測雞群新城疫抗體水平，如果抗體合格率低于70%或者抗體滴度低于5log時，盡快補免補防;三是做好飼養(yǎng)管理，提高雞群的抵抗力。雞舍及活動場地要定期清糞、消毒，消滅病原體;天氣驟變或者有應激因素時，要給予雞群電解質，提高其抗應激能力;四是定期給雞群投喂保健性藥物，特別是雞群發(fā)生細菌性或者呼吸道疾病時，避免新城疫的發(fā)生。

參考文獻：

[1]? Jia YQ， Wang XL， Wang XW， et al. Common microRNA-mRNA Interactions in Different Newcastle Disease Virus-Infected Chicken Embryonic Visceral Tissues[J].Int J Mol Sci. 2018;19（5）：1291.

[2]? 陳溥言.獸醫(yī)傳染病學（第六版）[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2015：367-372.

[3]? 李悅，劉思當.雞新城疫的流行現(xiàn)狀及防控[J].家禽科學，2018（05）：33-34.

[4]? 張登基，李曉霞，賈寧.金昌市金川區(qū)2016年-2017年雞新城疫的檢測與分析[J].國外畜牧學（豬與禽），2018，38（12）：53-55.

[5]? 謝偉，唐眉，趙國芝，等.2015-2017年四川樂山市家禽禽流感（H5）和新城疫免疫抗體檢測與分析[J].養(yǎng)殖與飼料，2018（12）：14-16.

[6]? 蘇琪，李小麗.西安市雞新城疫免疫抗體水平調查與分析[J].動物醫(yī)學進展，2017，38（06）：102-106.

[7]? 于瑞菊，張春平，劉玉山，等.山東省新城疫流行概況及綜合預防[J].家禽科學，2012（09）：30-32.

[8]? 費強.禽流感與新城疫的綜合防控措施[J].家禽科學，2012（11）：30-32.

收稿日期：2019-03-17

作者簡介：胡從勝（1975-），男，河南光山人，獸醫(yī)師，大專，主要從事動物疾病診斷與檢測。