胡澤兵
摘? ?要:對某鴨場采樣進行細菌分離鑒定、熒光PCR檢測、藥敏試驗。發(fā)現(xiàn)鴨群感染多殺性巴氏桿菌,該分離菌對恩諾沙星、新霉素高度敏感,而對慶大霉素、氟苯尼考不敏感。
關鍵詞:鴨;巴氏桿菌;細菌分離鑒定;熒光PCR
中圖分類號:S858.32? ? ?文獻標識碼:C? ? ?文章編號:1673-1085(2019)04-0038-03
河南信陽地區(qū)氣候濕潤、河網(wǎng)密布,適合鴨鵝等水禽的養(yǎng)殖,鴨養(yǎng)殖量位居全省第一,是當?shù)剞r(nóng)民致富增收的重要途徑。
2018年11月,轄區(qū)內(nèi)某鴨場鴨群突然發(fā)病, 2d內(nèi)死亡300多只,養(yǎng)殖戶使用氟苯尼考、慶大霉素等藥物治療,效果不佳,病情有繼續(xù)擴散的跡象。
接到報告后,本人迅速趕到現(xiàn)場,觀察癥狀并剖檢,采集樣品并檢測,現(xiàn)將情況報告如下:
1? 發(fā)病情況
該養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)麻鴨3000只,45日齡,在7日齡、21日齡已經(jīng)免疫2次高致病性禽流感疫苗;現(xiàn)場除死亡300多只外,眼觀還有500多只發(fā)病。 癥狀表現(xiàn)為:張口呼吸、癱瘓、跛行、不愿下水,個別鴨只關節(jié)腫脹,排銅綠色腥臭糞便。
剖檢后發(fā)現(xiàn):病死鴨腹膜、皮下組織有小出血點,心包增厚、心包內(nèi)有不透明液體、心冠脂肪出血,肺臟充血、有出血點,肝腫大、質(zhì)脆、呈棕黃色、肝表面有針尖狀壞死點,見圖1、圖2、圖3。
2? 樣品采集及檢測
2.1? 材料
2.1.1? 病料收集? 無菌取病死鴨的肺臟、脾臟、肝臟及分泌物、雙拭子(棉簽采集口腔及泄殖腔后,存放在含有PBS的離心管中)等樣品送達本實驗室,低溫保存?zhèn)錂z。
2.1.2? 主要檢測試劑? 禽流感病毒通用型(H5+H7)實時熒光RT-PCR檢測試劑盒(北京世紀元亨動物防疫技術(shù)有限公司)、血瓊脂平板、麥康凱平板、胎牛血清、LB培養(yǎng)基、細菌生化鑒定管、藥敏片(以自制為主)等購自鄭州博賽生物工程有限責任公司;革蘭氏染色試劑實驗室自行配置。
2.1.3? 主要檢測儀器? 生物顯微鏡(日本Olympus公司);核酸提取儀、實時熒光PCR儀(西安天?。?SPX-150B智能型生化培養(yǎng)箱(上?,樮帉嶒炘O備有限公司);HH數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇金壇晶玻實驗儀器廠)。
2.2? 方法
2.2.1? 細菌的分離? 無菌采集病變明顯部位,劃線接種于麥康凱平板、鮮血瓊脂平板上,37℃溫箱中培養(yǎng)24h以上,仔細觀察培養(yǎng)菌落的形態(tài),選擇生長較好菌落繼續(xù)培養(yǎng);取病料和病死鴨分泌物、挑取培養(yǎng)基菌落直接涂片進行革蘭氏染色鏡檢。
2.2.2? 生化鑒定? 向LB液體培養(yǎng)基中添加5%胎牛血清,隨后接種純培養(yǎng)物,取少量培養(yǎng)物加入生化鑒定管中,37℃溫箱中培養(yǎng)24h后,觀察、記錄結(jié)果。
2.2.3? 熒光PCR檢測? 取雙拭子樣品,采用禽流感病毒通用型實時熒光RT-PCR檢測試劑盒檢測樣品中是否含有禽流感病毒,參照試劑盒說明書進行操作。
2.2.4? 藥敏試驗? 參考文獻[1-3],利用紙片法測定分離的細菌對慶大霉素、硫酸新霉素、諾氟沙星、恩諾沙星、泰樂菌素、頭孢曲松、硫酸粘桿菌素、氟苯尼考等8種藥物的敏感性,通過測定抑菌圈的直徑(Φ)判定藥物對波氏桿菌的敏感性:Φ≥20 mm為高度敏感,15mm≤Φ<20mm為中度敏感,Φ<15mm為耐藥。
3? 檢測結(jié)果與分析
3.1? 細菌分離? 組織分離物在麥康凱平板上無菌落生長,在血液瓊脂平板培養(yǎng)24h后,形成中等大小菌落,菌落呈光滑、圓整、半透明狀,未出現(xiàn)溶血現(xiàn)象;將分離物和培養(yǎng)菌落直接涂片,革蘭氏染色后在顯微鏡下觀察,可見兩端鈍圓的短桿狀的球桿菌,革蘭氏陰性(見圖4)。
3.2? 生化鑒定結(jié)果? 本試驗分離的細菌可以發(fā)酵葡萄糖、不發(fā)酵乳糖,氧化酶和觸酶陽性,產(chǎn)生硫化氫,VP試驗陰性,吲哚試驗陽性。
3.3? 熒光PCR檢測結(jié)果? 采集樣品經(jīng)熒光PCR檢測,H5亞型和H7亞型禽流感病毒均為陰性。
3.4? 藥敏試驗結(jié)果? 分離菌株藥敏試驗結(jié)果,見表1,分離菌株對硫酸新霉素、恩諾沙星2種藥物高敏,對泰樂菌素、硫酸粘桿菌素、頭孢曲松、諾氟沙星4種藥物中敏,對氟苯尼考、慶大霉素不敏感。
4? 防治
巴氏桿菌病是由多殺性巴氏桿菌(Pasteurella multocida)引起的以畜禽敗血癥和炎性出血為特征的疾病,多種動物均可患病,急性可造成畜禽死亡,給養(yǎng)殖場戶帶來較大損失。鴨群感染本菌后,不同階段發(fā)生不同疾病,幼齡鴨為漿膜炎,中青年鴨為鴨霍亂,可以造成鴨只大量死亡。該病菌通常存在于患病動物的全身各組織、分泌物和排泄物中,不良因素刺激、抵抗力下降、病菌侵入機體均可引起發(fā)病,氣候突變極易暴發(fā),給鴨飼養(yǎng)場帶來很大的經(jīng)濟損失[4-6]。本研究采用細菌培養(yǎng)、鏡檢、生化及熒光PCR鑒定等手段在本地發(fā)生疾病的鴨群中分離到多殺性巴氏桿菌;鴨霍亂是本地區(qū)鴨群常見多發(fā)病,養(yǎng)殖戶用藥較多,引發(fā)耐藥,為防治該病,筆者又采用藥敏試驗篩選出恩諾沙星、硫酸新霉素等2種高敏藥物,為該疫病防治提供重要參考。全場鴨群采用恩諾沙星和荊防敗毒散拌料,連續(xù)用藥7d后,很快控制住病情,未再發(fā)現(xiàn)死亡病例。
鴨霍亂是常見、多發(fā)的傳染病,病原菌可經(jīng)患病動物的排泄物、分泌物等污染的飼料、飲水、用具和內(nèi)外環(huán)境傳播,也可經(jīng)消化道傳給健康動物,飛沫、咳嗽排出的帶病菌也可傳播本病。為防控該病,建議鴨場采取綜合性防控措施來防治該?。阂皇区喨罕M量做到全進全出,防止外來病菌進入本場;二是加強飼養(yǎng)管理,改善鴨群生長環(huán)境,給予鴨群營養(yǎng)合理的飼料,定期在飼料中添加保健性藥物和抗應激藥物,提高抵抗力;三是要做好鴨舍的清潔衛(wèi)生,定期滅鼠、驅(qū)蟲、驅(qū)鳥,保持鴨舍的清潔衛(wèi)生,減少各種傳播因素;四是為減少抗生素的使用,定期可以選擇針對本場流行菌株的疫苗對鴨群進行預防接種,提高特異性免疫力。
參考文獻:
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[3]? 李崇斌,覃珍姣,嚴斯剛.櫻桃谷肉鴨巴氏桿菌病的診治[J].中國家禽,2003(07):19.
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[5]? 惠慶亮,杜成波,牛書玉.一例鴨巴氏桿菌病的防治[J].水禽世界,2014(05):30.
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收稿日期:2019-03-20