胡澤兵

摘? ?要：對(duì)某鴨場(chǎng)采樣進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定、熒光PCR檢測(cè)、藥敏試驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)鴨群感染多殺性巴氏桿菌，該分離菌對(duì)恩諾沙星、新霉素高度敏感，而對(duì)慶大霉素、氟苯尼考不敏感。

關(guān)鍵詞：鴨;巴氏桿菌;細(xì)菌分離鑒定;熒光PCR

中圖分類號(hào)：S858.32? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：C? ? ?文章編號(hào)：1673-1085（2019）04-0038-03

河南信陽(yáng)地區(qū)氣候濕潤(rùn)、河網(wǎng)密布，適合鴨鵝等水禽的養(yǎng)殖，鴨養(yǎng)殖量位居全省第一，是當(dāng)?shù)剞r(nóng)民致富增收的重要途徑。

2018年11月，轄區(qū)內(nèi)某鴨場(chǎng)鴨群突然發(fā)病， 2d內(nèi)死亡300多只，養(yǎng)殖戶使用氟苯尼考、慶大霉素等藥物治療，效果不佳，病情有繼續(xù)擴(kuò)散的跡象。

接到報(bào)告后，本人迅速趕到現(xiàn)場(chǎng)，觀察癥狀并剖檢，采集樣品并檢測(cè)，現(xiàn)將情況報(bào)告如下：

1? 發(fā)病情況

該養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)麻鴨3000只，45日齡，在7日齡、21日齡已經(jīng)免疫2次高致病性禽流感疫苗;現(xiàn)場(chǎng)除死亡300多只外，眼觀還有500多只發(fā)病。 癥狀表現(xiàn)為：張口呼吸、癱瘓、跛行、不愿下水，個(gè)別鴨只關(guān)節(jié)腫脹，排銅綠色腥臭糞便。

剖檢后發(fā)現(xiàn)：病死鴨腹膜、皮下組織有小出血點(diǎn)，心包增厚、心包內(nèi)有不透明液體、心冠脂肪出血，肺臟充血、有出血點(diǎn)，肝腫大、質(zhì)脆、呈棕黃色、肝表面有針尖狀壞死點(diǎn)，見(jiàn)圖1、圖2、圖3。

2? 樣品采集及檢測(cè)

2.1? 材料

2.1.1? 病料收集? 無(wú)菌取病死鴨的肺臟、脾臟、肝臟及分泌物、雙拭子（棉簽采集口腔及泄殖腔后，存放在含有PBS的離心管中）等樣品送達(dá)本實(shí)驗(yàn)室，低溫保存?zhèn)錂z。

2.1.2? 主要檢測(cè)試劑? 禽流感病毒通用型（H5+H7）實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒（北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司）、血瓊脂平板、麥康凱平板、胎牛血清、LB培養(yǎng)基、細(xì)菌生化鑒定管、藥敏片（以自制為主）等購(gòu)自鄭州博賽生物工程有限責(zé)任公司;革蘭氏染色試劑實(shí)驗(yàn)室自行配置。

2.1.3? 主要檢測(cè)儀器? 生物顯微鏡（日本Olympus公司）;核酸提取儀、實(shí)時(shí)熒光PCR儀（西安天?。?SPX-150B智能型生化培養(yǎng)箱（上海瑯軒實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）;HH數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇金壇晶玻實(shí)驗(yàn)儀器廠）。

2.2? 方法

2.2.1? 細(xì)菌的分離? 無(wú)菌采集病變明顯部位，劃線接種于麥康凱平板、鮮血瓊脂平板上，37℃溫箱中培養(yǎng)24h以上，仔細(xì)觀察培養(yǎng)菌落的形態(tài)，選擇生長(zhǎng)較好菌落繼續(xù)培養(yǎng);取病料和病死鴨分泌物、挑取培養(yǎng)基菌落直接涂片進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。

2.2.2? 生化鑒定? 向LB液體培養(yǎng)基中添加5%胎牛血清，隨后接種純培養(yǎng)物，取少量培養(yǎng)物加入生化鑒定管中，37℃溫箱中培養(yǎng)24h后，觀察、記錄結(jié)果。

2.2.3? 熒光PCR檢測(cè)? 取雙拭子樣品，采用禽流感病毒通用型實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)樣品中是否含有禽流感病毒，參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2.2.4? 藥敏試驗(yàn)? 參考文獻(xiàn)[1-3]，利用紙片法測(cè)定分離的細(xì)菌對(duì)慶大霉素、硫酸新霉素、諾氟沙星、恩諾沙星、泰樂(lè)菌素、頭孢曲松、硫酸粘桿菌素、氟苯尼考等8種藥物的敏感性，通過(guò)測(cè)定抑菌圈的直徑（Φ）判定藥物對(duì)波氏桿菌的敏感性：Φ≥20 mm為高度敏感，15mm≤Φ<20mm為中度敏感，Φ<15mm為耐藥。

3? 檢測(cè)結(jié)果與分析

3.1? 細(xì)菌分離? 組織分離物在麥康凱平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)，在血液瓊脂平板培養(yǎng)24h后，形成中等大小菌落，菌落呈光滑、圓整、半透明狀，未出現(xiàn)溶血現(xiàn)象;將分離物和培養(yǎng)菌落直接涂片，革蘭氏染色后在顯微鏡下觀察，可見(jiàn)兩端鈍圓的短桿狀的球桿菌，革蘭氏陰性（見(jiàn)圖4）。

3.2? 生化鑒定結(jié)果? 本試驗(yàn)分離的細(xì)菌可以發(fā)酵葡萄糖、不發(fā)酵乳糖，氧化酶和觸酶陽(yáng)性，產(chǎn)生硫化氫，VP試驗(yàn)陰性，吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性。

3.3? 熒光PCR檢測(cè)結(jié)果? 采集樣品經(jīng)熒光PCR檢測(cè)，H5亞型和H7亞型禽流感病毒均為陰性。

3.4? 藥敏試驗(yàn)結(jié)果? 分離菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表1，分離菌株對(duì)硫酸新霉素、恩諾沙星2種藥物高敏，對(duì)泰樂(lè)菌素、硫酸粘桿菌素、頭孢曲松、諾氟沙星4種藥物中敏，對(duì)氟苯尼考、慶大霉素不敏感。

4? 防治

巴氏桿菌病是由多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida）引起的以畜禽敗血癥和炎性出血為特征的疾病，多種動(dòng)物均可患病，急性可造成畜禽死亡，給養(yǎng)殖場(chǎng)戶帶來(lái)較大損失。鴨群感染本菌后，不同階段發(fā)生不同疾病，幼齡鴨為漿膜炎，中青年鴨為鴨霍亂，可以造成鴨只大量死亡。該病菌通常存在于患病動(dòng)物的全身各組織、分泌物和排泄物中，不良因素刺激、抵抗力下降、病菌侵入機(jī)體均可引起發(fā)病，氣候突變極易暴發(fā)，給鴨飼養(yǎng)場(chǎng)帶來(lái)很大的經(jīng)濟(jì)損失[4-6]。本研究采用細(xì)菌培養(yǎng)、鏡檢、生化及熒光PCR鑒定等手段在本地發(fā)生疾病的鴨群中分離到多殺性巴氏桿菌;鴨霍亂是本地區(qū)鴨群常見(jiàn)多發(fā)病，養(yǎng)殖戶用藥較多，引發(fā)耐藥，為防治該病，筆者又采用藥敏試驗(yàn)篩選出恩諾沙星、硫酸新霉素等2種高敏藥物，為該疫病防治提供重要參考。全場(chǎng)鴨群采用恩諾沙星和荊防敗毒散拌料，連續(xù)用藥7d后，很快控制住病情，未再發(fā)現(xiàn)死亡病例。

鴨霍亂是常見(jiàn)、多發(fā)的傳染病，病原菌可經(jīng)患病動(dòng)物的排泄物、分泌物等污染的飼料、飲水、用具和內(nèi)外環(huán)境傳播，也可經(jīng)消化道傳給健康動(dòng)物，飛沫、咳嗽排出的帶病菌也可傳播本病。為防控該病，建議鴨場(chǎng)采取綜合性防控措施來(lái)防治該?。阂皇区喨罕M量做到全進(jìn)全出，防止外來(lái)病菌進(jìn)入本場(chǎng);二是加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善鴨群生長(zhǎng)環(huán)境，給予鴨群營(yíng)養(yǎng)合理的飼料，定期在飼料中添加保健性藥物和抗應(yīng)激藥物，提高抵抗力;三是要做好鴨舍的清潔衛(wèi)生，定期滅鼠、驅(qū)蟲(chóng)、驅(qū)鳥(niǎo)，保持鴨舍的清潔衛(wèi)生，減少各種傳播因素;四是為減少抗生素的使用，定期可以選擇針對(duì)本場(chǎng)流行菌株的疫苗對(duì)鴨群進(jìn)行預(yù)防接種，提高特異性免疫力。

參考文獻(xiàn)：

[1]? 李琦，祁從春.高郵鴨巴氏桿菌病的診斷與防治[J].中國(guó)家禽，2011，33（05）：60.

[2]? 許英民.雉雞多殺性巴氏桿菌的分離及其藥敏試驗(yàn)[J].家禽科學(xué)，2017（02）：47-49.

[3]? 李崇斌，覃珍姣，嚴(yán)斯剛.櫻桃谷肉鴨巴氏桿菌病的診治[J].中國(guó)家禽，2003（07）：19.

[4]? Annika S，Sokhoun Y，Phalla Y，et al.Detection of Low Pathogenicity Influenza A（H7N3） Virus during Duck Mortality Event， Cambodia， 2017[J].Emerging Infectious Diseases，2018，24（6）：1103-1107.

[5]? 惠慶亮，杜成波，牛書(shū)玉.一例鴨巴氏桿菌病的防治[J].水禽世界，2014（05）：30.

[6]? 張新丹，葛鋒銳，張?zhí)炻?鴨巴氏桿菌和大腸桿菌混合感染的診治[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2004（04）：38.

收稿日期：2019-03-20