吳建國(guó)，羅建飛，李士軍，彭志洋，王旭鋒，肖喆

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院普外科，湖北 武漢430060)

胰腺癌是消化系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，其起病隱匿，缺乏早期特異性檢測(cè)手段，侵襲性強(qiáng)，惡性程度高，手術(shù)根治率低，預(yù)后極差，5年生存率僅5%。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)EMS1基因與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)[1]，EMS1基因是位于人類染色體11q13上與人乳腺癌、鱗癌相關(guān)的基因[2]，EMS1蛋白主要參與細(xì)胞外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞骨架系統(tǒng)的調(diào)控和細(xì)胞黏附等過(guò)程[3]，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、收縮、黏附和極化等功能[4-5]。本研究應(yīng)用免疫組化SP法，檢測(cè)EMS1蛋白在胰腺癌中的表達(dá)，以探討EMS1蛋白表達(dá)與胰腺癌的臨床病理因素的關(guān)系。

資料與方法

一、臨床資料

選自2015年4月至2017年5月武漢大學(xué)人民醫(yī)院病理科65例經(jīng)臨床和病理診斷確診為胰腺癌的手術(shù)標(biāo)本，選取其手術(shù)標(biāo)本包含胰腺癌組織65例，癌旁組織60例(為切除胰腺癌組織的同時(shí)，取距腫瘤邊緣2 cm處的組織為癌旁組織且病檢證實(shí)無(wú)癌浸潤(rùn))。65例胰腺癌術(shù)前均未經(jīng)抗腫瘤治療，其中男性38例，女性27例，年齡35～80歲(平均年齡58.8歲)，按國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)制定的TNM分期進(jìn)行臨床病理分期。

二、免疫組化試劑

EMS1蛋白單克隆抗體(1∶100稀釋)購(gòu)于Santa Cruz公司，SP試劑盒購(gòu)自福州邁新生物有限公司。實(shí)驗(yàn)步驟按使用說(shuō)明書進(jìn)行。基因公司提供的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗作陰性對(duì)照。

三、免疫組化染色結(jié)果判斷

EMS1蛋白表達(dá)位于胞質(zhì)內(nèi)，呈淺棕色或棕褐色。參考Hattori標(biāo)準(zhǔn)，按染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)判，未見(jiàn)陽(yáng)性著色細(xì)胞或僅有胞膜著色為“-”，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤25%為“+”，26%～50%為“++”，≥50 為“+++”)

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

EMS1表達(dá)的組間差異采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法檢驗(yàn)。所有數(shù)據(jù)均通過(guò)SPSS(17.0版)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、EMS1的表達(dá)

EMS1在胰腺癌、癌旁組織中的表達(dá)見(jiàn)表1、圖1。EMS1蛋白在60例癌旁組織中陽(yáng)性表達(dá)21例(占35.0%)，陰性表達(dá)39例(占65.0%)。而在65例胰腺癌組織中，EMS1表達(dá)陽(yáng)性51例(占78.5%)，陰性14例(占21.5%)。在癌組織與癌旁組織中EMS1蛋白的表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 EMS1在胰腺癌、癌旁組織中的表達(dá)(例)

二、胰腺癌EMS1蛋白表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

EMS1在胰腺癌組織高、中、低分化陽(yáng)性表達(dá)率分別為56.3%、77.8%、90.3%，胰腺癌TNM分期中Ⅲ+Ⅳ 期EMS1的陽(yáng)性表達(dá)率(90.2%)明顯高于Ⅰ+Ⅱ期(62.5%)，胰腺癌中有淋巴轉(zhuǎn)移者EMS1的陽(yáng)性表達(dá)率(92.5%)明顯高于無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者(58.3%)，以上各組經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，說(shuō)明EMS1蛋白的表達(dá)與胰腺癌的組織分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而與性別、年齡、腫瘤大小無(wú)明顯相關(guān)。詳見(jiàn)表2。

圖1 免疫組化法檢測(cè)EMS1在胰腺癌組織和癌旁組織中的表達(dá)(SP，×200) A.EMS1蛋白在癌旁組織中表達(dá)；B.EMS1蛋白在高分化(Ⅰ～Ⅱ級(jí))胰腺癌中陽(yáng)性表達(dá)； C.EMS1蛋白在中分化(Ⅱ級(jí))胰腺癌陽(yáng)性表達(dá)；D.EMS1蛋白在低分化(Ⅲ級(jí))胰腺癌中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)

臨床病理因素例數(shù)EMS1陽(yáng)性數(shù)(例)百分比(%)χ2值P值年齡 ≥65歲362877.80.0330.855 <65歲292275.8性別 男382976.30.0190.890 女272177.7腫瘤直徑 ≥5 cm211676.20.0950.758 <5 cm443579.5分化程度 高分化16956.37.2520.027 中分化181477.8 低分化312890.3淋巴轉(zhuǎn)移 (-)12758.39.5490.002 (+)534992.5TNM分期 Ⅰ+Ⅱ241562.57.2830.007 Ⅲ+Ⅳ413790.2

討 論

EMS1基因編碼的蛋白稱為Cortactin/EMS1蛋白，Cortactin為細(xì)胞皮質(zhì)區(qū)肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。EMS1蛋白含550個(gè)氨基酸殘基，包括P80和P85兩種亞型，該蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)包括四個(gè)區(qū)域：①NTA區(qū)(N-terminal acidic region)是由酸性氨基酸組成的區(qū)域；②由1個(gè)23 氨基酸序列和6個(gè)相同的37氨基酸序列串聯(lián)而成的一個(gè)重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域；③一個(gè)富含絲氨酸、脯氨酸、蘇氨酸和一個(gè)α螺旋結(jié)構(gòu)組成的區(qū)域；④SH3區(qū)(Srchomology 3 domain)為羧基端含一個(gè)Src癌基因家族同源結(jié)構(gòu)域。EMS1蛋白羧基末端參與肌動(dòng)蛋白多聚化過(guò)程，顯著增強(qiáng)上皮細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)遷移能力，與腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)[6]。EMS1蛋白通過(guò)氨基末端結(jié)合并活化肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白(Arp2/3)復(fù)合體，參與細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)形成并調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白的運(yùn)動(dòng)，從而調(diào)控細(xì)胞的動(dòng)力生物學(xué)過(guò)程[7]。

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，EMS1蛋白在人類一些正常上皮組織中低表達(dá)，而在頭頸部鱗癌、乳腺癌、胃癌、肝癌等多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)[8-10]，是臨床上判斷腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)之一。目前EMS1蛋白表達(dá)與胰腺癌的關(guān)系研究較少，本研究發(fā)現(xiàn)EMS1蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織(χ2=24.131，P=0.000)，說(shuō)明EMS1蛋白表達(dá)上調(diào)與胰腺癌發(fā)生有關(guān)。EMS1蛋白能增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲力和轉(zhuǎn)移的機(jī)制目前尚不完全清楚，目前研究發(fā)現(xiàn)EMS1蛋白主要的功能是促進(jìn)肌動(dòng)蛋白纖維(F-action)的聚合交聯(lián)，產(chǎn)生側(cè)枝形成偽足和突觸，促進(jìn)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和黏附[11]。EMS1蛋白能夠穩(wěn)定纖狀肌動(dòng)蛋白網(wǎng)架結(jié)構(gòu)和促進(jìn)肌動(dòng)蛋白聚合作用，EMS1蛋白高表達(dá)能增強(qiáng)此進(jìn)程從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移[12-13]。Cortactin能促進(jìn)侵襲偽足錨定吸附于細(xì)胞外基質(zhì)，調(diào)控侵襲偽足釋放侵襲蛋白酶降解細(xì)胞外基質(zhì)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的移行侵襲能力[14]。E-鈣連接素是一種與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系密切相關(guān)的黏附分子，EMS1蛋白通過(guò)促進(jìn)E-鈣連接素介導(dǎo)的細(xì)胞間黏附連接的形成和細(xì)胞骨架的重組[15]，可能是Cortactin促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。Rodrigo等[16]研究發(fā)現(xiàn)，EMS1的表達(dá)與頭頸部鱗癌病人的病程、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度以及預(yù)后等具有明顯的相關(guān)性。本研究也發(fā)現(xiàn)，在高、中、低分化胰腺癌中EMS1陽(yáng)性表達(dá)率分別為56.3%、77.8%、90.3%，隨著胰腺癌組織分級(jí)的增高EMS1陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高，胰腺癌中EMS1陽(yáng)性表達(dá)率與組織學(xué)類型相關(guān)。Ⅰ、Ⅱ期胰腺癌組織中EMS1 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于Ⅲ、Ⅳ期胰腺癌 (P<0.05)。無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胰腺癌中EMS1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胰腺癌，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表明EMS1蛋白與胰腺癌的組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤臨床TNM分期密切相關(guān)。Li等[17]通過(guò)將高表達(dá)EMS1的乳腺癌細(xì)胞移植到裸鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)EMS1蛋白能增強(qiáng)與骨髓內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)黏附力和穿透上皮的能力，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的骨轉(zhuǎn)移。在動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)水平也證實(shí)了EMS1能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。以上研究均提示，EMS1蛋白在胰腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用，可能成為一個(gè)胰腺癌有價(jià)值的生物標(biāo)志物，提示腫瘤的發(fā)展進(jìn)程及評(píng)估臨床預(yù)后。

綜上所述，EMS1蛋白在腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)移灶附著過(guò)程中都起著重要的作用。EMS1蛋白與胰腺癌的組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤臨床TNM分期密切相關(guān)，筆者認(rèn)為EMS1蛋白有可能作為胰腺癌預(yù)后評(píng)估新的依據(jù)和指標(biāo)，具有臨床應(yīng)用價(jià)值。