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        復(fù)合微生物肥對茶樹生長的促進作用初探

        2019-07-07 01:12:22肖開興肖析蒙楊瑤君易志飛
        四川林業(yè)科技 2019年6期
        關(guān)鍵詞:銨態(tài)氮蒸餾水茶多酚

        肖開興,肖析蒙,楊瑤君,易志飛,唐 雪

        (1.樂山師范學(xué)院 竹類病蟲防控與資源開發(fā)四川省重點實驗室,樂山 614000;2.樂山師范學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院,樂山 614000;3.西華大學(xué), 食品與生物工程學(xué)院,成都 610039)

        農(nóng)藥化肥對茶樹品質(zhì)造成嚴重破壞,急需要生態(tài)環(huán)保的新技術(shù)。近年來,微生物菌肥對植物的促生、抗病等領(lǐng)域的研究速度迅猛,已發(fā)現(xiàn)其對谷類和豆科等植物的增產(chǎn)、增收效果顯著[1],根際促生菌有助于增加植物鹽脅迫能力,增強植株耐受性[2],為滿足農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的需要,使用菌肥代替部分化肥已經(jīng)受到了研究人員的關(guān)注[3],復(fù)合微生物肥是一種經(jīng)過特殊的加工工藝制成的、含有活菌的生物肥料,可通過解磷、固氮、解鉀來提升土壤中營養(yǎng)元素的效果[4],在本實驗中,以植株的生長狀態(tài),葉片中茶多酚、葉綠素的含量,土壤中氮磷鉀的含量作為體現(xiàn)復(fù)合微生物肥促生、抗病效果的主要檢測指標。

        茶葉源自中國,早期是作為祭品使用,茶葉飲品也被譽為“世界三大飲品之一”,茶多酚(tea polyphenols, TPs)是茶葉中多類物質(zhì)的總稱。研究表明,飲茶對人體健康具有重要的保護作用,且其藥理作用和安全性已經(jīng)得到證實[5~6]

        葉綠素(chlorophyll)是植物光合作用最重要的色素之一,也是評價葉片光合能力的主要指標之一[7],植物先通過葉綠素利用光能來進行光合作用從而為植物提供營養(yǎng),經(jīng)研究表明,對植物使用菌肥后植株葉片中葉綠素含量的提高[8]。

        土壤中的營養(yǎng)元素的存在狀態(tài)對植物來說至關(guān)重要,其含量也是影響植物生長發(fā)育的重要條件,氮、磷、鉀作為大量元素,對植物的生長尤為重要,本實驗分析了復(fù)合微生物肥對茶樹土壤中的銨態(tài)氮、速效磷、有效鉀的影響,以期研究復(fù)合微生物肥對增加茶葉產(chǎn)量和改善茶葉品質(zhì)的作用。

        1 材料與方法

        1.1 材料與儀器

        1.1.1 材料

        1.1.1.1 試驗材料

        1.1.1.1.1 茶樹株高測試材料 該實驗所有測試項目實驗材料由樂山市夾江縣迎江鄉(xiāng)郭坪村(經(jīng)度:103.50緯度:29.78)茶樹種植基地提供,測量初次選取長勢大致相同的植株,共測試樣品60株,其中1~30號樣品為處理組(生長期間施加復(fù)合微生物肥); 31~60號樣品為對照組(生長期間施加普通化肥),處理組用地和對照組用地之間相隔7 m,處于同一水平面上,初次測量時間為2018年3月,二次測量時間為2018年12月。

        1.1.1.1.2 茶多酚測試材料 在以下3個測試項目中,實驗材料的選取與上述茶樹株高測試材料選取的地區(qū)一致,海拔相同,茶樹長勢以及前期施肥情況相同。本項目測試樣品共30組,其中1~15號樣品為處理組(生長期間施加復(fù)合微生物肥);16~30號樣品為對照組(生長期間施加普通化肥)。茶葉樣品的采制參考《茶樹種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標準》[9]。2019年1月12—15日進行樣品茶多酚含量測定[10]。

        1.1.1.1.3 葉綠素測試材料 該項目共測試樣品30組,其中1~15號樣品為處理組(生長期間施加復(fù)合微生物肥);16~30號樣品為對照組(生長期間施加普通化肥)。樣品在采制時選取頂部成熟葉片,避免采摘的葉片出現(xiàn)破損、蟲病等情況,采摘的大小要求基本一致2019年1月21—24日進行樣品葉綠素含量測定[11]。

        1.1.1.1.4 土壤中主要營養(yǎng)元素測量材料 該項目共測試樣品30組,其中1~15號樣品為處理組(生長期間施加復(fù)合微生物肥);16~30號樣品為對照組(生長期間施加普通化肥)。選取植株根系附近土壤作為實驗樣品,為避免土壤物質(zhì)理化性質(zhì)遭到破壞,將樣品于通風(fēng)處自然風(fēng)干約10 d,所得干燥樣品便于實驗后續(xù)操作。

        1.1.1.2 化學(xué)試劑 茶多酚純品、酒石酸鉀鈉、氯化亞鐵、丙酮、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉(以上試劑均為AR級)、土壤養(yǎng)分測定相關(guān)試劑(由托普云農(nóng)科技股份有限公司提供)。

        復(fù)合微生物肥 由四川鑫鑫驕揚生物科技有限公司提供,產(chǎn)品含枯草芽孢桿菌等有效菌5億CFU/克,有機質(zhì)70%,蓄水倍數(shù)60倍。

        酒石酸亞鐵溶液 準確稱取硫酸亞鐵樣品1g,酒石酸鉀鈉樣品5 g,加水溶解后定容至1L(可加少量鐵粉防止配置好的溶液發(fā)生氧化)。

        pH7.5磷酸緩沖溶液 準確稱取磷酸二氫鉀9.08 g(經(jīng)過100 ℃、2.5h烘干處理),加水溶解后定容至1L;準確稱取磷酸氫二鈉23.9 g,加水溶解后定容至1L,需用時取上述兩種溶液按照KH2PO4∶Na2HPO4=17∶3的比例均勻混合使用。

        1.1.2 實驗儀器

        分光光度計、土壤測定儀(本項目測定使用土壤測定儀由托普云農(nóng)科技股份有限公司研發(fā))、搖床、烘箱、水浴鍋、電子天平。

        1.2 方法

        1.2.1株高測量方法

        測量植株基部至主莖頂部記為主莖生長點之間的距離。根據(jù)實際情況,本實驗采用軟皮尺進行數(shù)據(jù)測量。

        1.2.2 葉片樣品處理方法

        樣品采集后,將樣品放至0 ℃冰箱保存,實驗時,取大小大致相同葉片,在其同一部位,避開比較粗大的葉脈,選取約1 cm2,均勻切成1 mm寬、5 mm長的細絲狀,切成20份。

        1.2.3 土壤樣品處理方法

        將土壤放置于通風(fēng)口,均勻鋪在干凈的紙板上,風(fēng)干10 d,待風(fēng)干后,將樣品碾磨處理,過80目篩,去除土壤中植物根莖等雜質(zhì)。收集處理好的樣品(完成每項測量指標需處理好的土壤樣品4~5 g)。

        1.2.4 樣品中茶多酚的檢測

        1.2.4.1 制作茶多酚標準曲線 茶多酚類的物質(zhì)能夠和亞鐵離子結(jié)合,形成藍色的絡(luò)合物,并且在一定波長有最大的吸收度,茶多酚在溶液中的含量與形成的絡(luò)合物的吸光度在一定范圍內(nèi)成正比,因此可用分光光度法測量茶多酚在溶液中的含量。本實驗需準確稱取0.5 g茶多酚純品,用水定容至100 mL,用移液槍量取0.00 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.30 mL、0.40 mL、0.50 mL,加水至10 mL,再向其加入酒石酸亞鐵溶液5 mL[12],混合均勻加入磷酸緩沖液至刻度,搖勻,靜置10 min。在550 nm處用空白溶液作為參比,測定其吸光度,從而繪制茶多酚標準曲線。

        1.2.4.2 樣品中茶多酚含量的測定 每組取茶葉樣品0.5 g倒入裝有20 mL水的玻璃管中,放置于水浴鍋中,水浴溫度為60 ℃,浸提時間為120 min[13]。水浴完成后,用移液槍吸取茶葉樣品浸提液2 mL,同時,加入配制好的酒石酸亞鐵溶液5 mL,再加入蒸餾水8 mL,搖勻,加入磷酸緩沖液至容量瓶刻度線,搖勻,靜置10 min。在550 nm處用空白溶液作為參比,測定其吸光度,根據(jù)繪制好的茶多酚標準曲線(見圖1)計算得出樣品中的茶多酚濃度。

        圖1 茶多酚標準曲線

        1.2.5 樣品中葉綠素含量的測定

        1949年經(jīng)Arnon解釋和推導(dǎo)以來[14],丙酮法作為Arnon法在國際上被廣泛應(yīng)用至今[15]。將處理好的葉片樣品倒入20 mL、80%丙酮溶液中,在黑暗條件下提取24 h。根據(jù)Lambert-Beer定律,在645 nm和663 nm處用80%丙酮溶液作為參比,測定其吸光度,根據(jù)以下公式計算得出樣品中葉綠素的含量:

        C=Ca+Cb=8.04A663+20.29A645[16]

        (1)

        1.2.6 土壤樣品中銨態(tài)氮、速效磷、有效鉀含量的測定

        本項目測定使用托普云農(nóng)科技股份有限公司研發(fā)的土壤養(yǎng)分測試儀。

        1.2.6.1 銨態(tài)氮含量的測定 每組準確稱取土壤樣品4 g,放入容量為100 mL三角瓶中,加入20 mL蒸餾水以及1號粉末1 g,在搖床中搖勻10 min,160 r·min-1,過濾,所得濾液用移液槍吸取 1 000μL于比色皿中,此為待測液;用移液槍吸取900 μL蒸餾水,再加入100 μL氮標準溶液,混勻,所得溶液為標準液;用移液槍吸取2 mL蒸餾水于比色皿中,此為空白液。向標準液和待測液中各加入100 μL氮1號試劑,混勻,再加入100 μL氮2號試劑,混勻。停放20 min,再加入800 μL蒸餾水,立即上機操作,記錄數(shù)據(jù)。

        1.2.6.2 速效磷含量的測定 每組準確稱取土壤樣品4 g,放入容量為100 mL三角瓶中,加入20 mL蒸餾水以及2號粉末0.5 g(用精確pH試紙測定土壤為弱堿性),在搖床中搖勻10 min,160 r·min-1,過濾,所得濾液用移液槍吸取200 μL于比色皿中,再加入800 μL蒸餾水,此為待測液;用移液槍吸取900 μL蒸餾水,再加入100 μL磷標準溶液,混勻,所得溶液為標準液;用移液槍吸取 2 000 μL蒸餾水于比色皿中,此為空白液。向標準液和待測液中各加入100 μL磷1號試劑和800 μL蒸餾水,混勻,再加入50 μL磷2號試劑,混勻。立即上機操作,記錄數(shù)據(jù)。

        1.2.6.3 有效鉀含量的測定 每組準確稱取土壤樣品4 g,放入容量為100 mL三角瓶中,加入20 mL蒸餾水以及1號粉末1 g,在搖床中搖勻10 min,160 r·min-1,過濾,所得濾液用移液槍吸取 1 000 μL于比色皿中,此為待測液;用移液槍吸取900 μL蒸餾水,再加入100 μL鉀標準溶液,混勻,所得溶液為標準液;用移液槍吸取2mL蒸餾水于比色皿中,此為空白液。向標準液和待測液中各加入100 μL鉀1號試劑,混勻,再加入100 μL鉀2號試劑,混勻。停放5 min,再加入800 μL蒸餾水,立即上機操作,記錄數(shù)據(jù)。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 株高測量結(jié)果與分析

        從圖2可以看出,在經(jīng)過施肥處理的茶樹處理組中,在第二次記錄數(shù)據(jù)時,第7組的長速最快,增長達到了56 cm,第30組的生長速度較慢,增長了11 cm,在經(jīng)過復(fù)合微生物肥施肥處理的30株樣品植株中,其平均株高達到了102.73 cm,初次測量時平均株高為74.67 cm,植株平均增高達到了28.06 cm,增幅達37.58%。

        從圖3中可以看出,沒有經(jīng)過施肥處理的對照組,在進行第二次測量的時候,第47組的長速最快,增長達到了30 cm,第35組的生長速度較慢,僅生長了2 cm,在未經(jīng)過復(fù)合微生物肥施肥處理的30株樣品植株中,其平均株高為89.90 cm, 初次測量時平均株高為73.87 cm,植株平均增高達到了16.03 cm,增幅為21.66%。

        圖2 實驗組株高測量結(jié)果

        圖3 對照組株高測量結(jié)果

        圖4 實驗組與對照組株高平均值比較結(jié)果

        結(jié)合實驗組和對照組的數(shù)據(jù)來看,在初次測量時,為保證實驗的科學(xué)性、準確性,在選擇實驗對象時,選取的實驗組樣本即施肥處理的30株茶樹比選取的對照組即未施肥處理的30株茶樹在平均株高上僅高出0.8 cm,在第二次測量時,實驗組即施肥處理的茶樹比對照組即未施肥處理的茶樹僅高達12.83 cm,在實驗組的30組樣本中,有29組的增長高度高于對照組的平均水平,有1組的增長高度略低于對照組的平均水平。經(jīng)Excel的顯著性分析結(jié)果顯示,復(fù)合微生物肥對茶樹的生長具有促進作用,且效果明顯。

        2.2 茶多酚含量測量結(jié)果與分析

        由表1可以看出,經(jīng)過施肥處理的15組茶樹樣品中,其茶葉中的茶多酚含量最高可達411.43 g·kg-1,最低為309.49 g·kg-1,極差為101.94 g·kg-1,平均含量為374.86 g·kg-1;未經(jīng)過處理的15株茶樹樣品中,其茶葉中的茶多酚最高為406.58 g·kg-1,最低為293.31 g·kg-1,極差為113.27 g·kg-1,平均含量為334.99 g·kg-1;經(jīng)過施肥處理的15株茶樹的茶葉的平均茶多酚含量比未經(jīng)過處理的15株茶樹樣品中茶葉的平均茶多酚含量高出36.87g·kg-1。在實驗組的15組樣本中,有13組的增長高度高于對照組的平均水平,有2組的增長高度略低于對照組的平均水平,增長率達86.7%,且實驗組和對照組的差異性極顯著(P=0.002832<0.01)。經(jīng)實驗測量結(jié)果表明,復(fù)合微生物肥對茶樹的生長具有促進作用,且效果明顯。實驗結(jié)果顯示,該復(fù)合微生物肥有助于提高茶樹中茶多酚含量,進一步提升茶葉的品質(zhì)。

        表1 茶葉中茶多酚含量的測量數(shù)據(jù)

        Tab.1 The measurement data of contents of tea polyphenols

        處理組對照組平均值371.86334.99最大值411.43406.58最小值309.49293.31變異系數(shù)%(CV)0.07380.1092

        2.3 葉綠素含量測量結(jié)果與分析

        由表2我們可以知道經(jīng)過施肥處理的15組茶樹樣品中,其茶葉中的葉綠素含量最高可達1.04 mg·g-1,最低為0.98 mg·g-1,極差為0.06 mg·g-1,平均含量為1.00 mg·g-1;未經(jīng)過處理的15株茶樹樣品中,其茶葉中的茶多酚最高為1.01 mg·g-1,最低為0.96 mg·g-1,極差為0.05 mg·g-1,平均含量為0.986 mg·g-1;經(jīng)過施肥處理的15株茶樹的茶葉的平均茶多酚含量比未經(jīng)過處理的15株茶樹樣品中茶葉的平均茶多酚含量高出0.02 mg·g-1。在實驗組的15組樣本中,有13組的增長高度高于對照組的平均水平,有2組的增長高度略低于對照組的平均水平,且實驗組和對照組的差異極顯著(P=0.000253<0.01),實驗結(jié)果顯示,該復(fù)合微生物肥有助于茶樹中葉綠素含量的提高。

        表2 茶葉中葉綠素含量的測量數(shù)據(jù)

        Tab.2 The measurement data of contents of chlorophyll

        處理組/(mg·g-1)對照組/(mg·g-1)平均值1.004320.98563最大值1.03537 1.01085 最小值0.98560 0.96176 變異系數(shù)%(CV)0.0125710.012715

        2.4 土壤中銨態(tài)氮、速效磷、有效鉀含量測量結(jié)果與分析

        2.4.1 銨態(tài)氮含量測量結(jié)果與分析

        銨態(tài)氮是氮元素的一種自然存在狀態(tài),它可以與其他形式的氮元素在某些條件下相互轉(zhuǎn)化,易溶解,因此能夠被植物快速吸收,同時也容易被水分帶走。從表3可以看出在經(jīng)過施用復(fù)合微生物肥處理的15個樣品中,銨態(tài)氮平均值達到了122.134 mg·kg-1,最大值為297.62 mg·kg-1,而未經(jīng)過施用復(fù)合微生物肥處理的15個樣品中,銨態(tài)氮的平均值為40.571 mg·kg-1,最大值為129.63 mg·kg-1,在平均值上增長了81.563 mg·kg-1,增幅達49.74%。增長態(tài)勢穩(wěn)定、良好,且實驗組和對照組差異性極顯著(P=0.000772<0.01)。經(jīng)過試驗結(jié)果證明,復(fù)合微生物肥有助于土壤中的銨態(tài)氮的固定,增加土壤中銨態(tài)氮的含量,有利于植物的生長。

        2.4.2 速效磷含量測量結(jié)果與分析

        速效磷指的是在土壤中容易被植株吸收的磷成分,也是評價土壤提供磷水平的一個重要指標,當(dāng)速效磷的含量達到25 mg·kg-1時,即被稱為含磷較高的土壤[17]。由測量數(shù)據(jù)可以得出,復(fù)合微生物肥對速效磷在土壤中的固定并無顯著性差異(P=0.374855>0.05),從表3可以看出,施用復(fù)合微生物肥的土壤速效磷的平均含量為58.169 mg·kg-1,降幅為6.09%,屬于含磷較高的土壤,未使用菌肥的土壤速效磷的含量為61.941 mg·kg-1,同屬于含磷較高的土壤。研究表明,施用枯草芽孢桿菌后,植物中的全氮、全磷、全鉀含量均增加[18],即植物吸收的礦質(zhì)元素增加,有利于植物的生長。

        2.4.3 有效鉀含量測量結(jié)果與分析

        有效鉀含量是土壤提供鉀水平的一個重要指標,據(jù)表3可以看出,經(jīng)過施肥處理的土壤,有效鉀的含量被控制在了 1 048.442 mg·kg-1,而未經(jīng)過施用復(fù)合微生物肥處理的土壤,有效鉀的含量達到了 1 566.292 mg·kg-1,施用菌肥后土壤中的有效鉀含量降低了約33%,且實驗組和對照組具顯著性差異(0.01

        表3 土壤中銨態(tài)氮、速效磷、有效鉀含量測量結(jié)果與分析

        Tab.3 The contents measurements data and analysis of ammonium nitrogen、quick-impact phosphorus and effective potassium of chlorophyll

        平均值(mg·kg-1)最大值(mg·kg-1)最小值(mg·kg-1)變異系數(shù)/%(CV)銨態(tài)氮(處理組)122.134 297.620 23.020 0.843752銨態(tài)氮(對照組)40.571 129.630 8.440 0.60022速效磷(處理組)58.169 163.040 10.940 0.375622速效磷(對照組)61.941 118.540 19.730 0.636471有效鉀(處理組)1 048.442 2 128.900 311.300 0.587958有效鉀(對照組)1 566.292 3 244.560 332.700 0.550017

        3 討論

        本實驗所使用的復(fù)合微生物肥有助于茶樹的生長,促生長率達96%以上,選取樣本在9個月的時間里,普遍生長28 cm以上,增幅達37.58%;該菌肥對茶葉中茶多酚含量增加也很明顯,平均含量比未經(jīng)過施肥處理的植株增長了36.87g·kg-1,相較于未施肥處理的植株,茶多酚含量增長約11%;葉片中的葉綠素含量在經(jīng)過施肥處理后也有所提高,有利于植株進行光合作用積累有機物,有利于植株的生長;同時,菌肥的使用對土壤中的營養(yǎng)物質(zhì)有所影響,尤其是對銨態(tài)氮的作用,平均增長了81.563 mg·kg-1,極大地提高了土壤中的氮成分含量,也對肥力不均的現(xiàn)象有所改善,有效控制了土壤中高鉀含量的現(xiàn)象。

        近幾年來,在農(nóng)民的種植方面,施肥是一個十分普遍的現(xiàn)象,種植和施肥已經(jīng)緊密地聯(lián)系在了一起,但是根據(jù)大量的實驗證明,土地中作物對肥料的利用率不斷下降,由此可知,施用化肥不能保證土地常年增產(chǎn),且大量施用化肥還會造成土壤污染、水污染等一系列問題。微生物菌肥的出現(xiàn)極大地改善了這一情況,菌肥中的枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌在活化后產(chǎn)生的分解酶,能有效的將土壤中的有機質(zhì)分解為小分子,釋放出無機鹽[20]。在植物發(fā)育的早期, 植物根際促生菌的使用會直接影響芽和植物根系的生長,從而提高植物吸收營養(yǎng)的能力以達到提高作物產(chǎn)量的作用[21]。將有機肥和復(fù)合微生物肥搭配使用,將會減少施肥用量,緩解土壤中肥力不均的問題[22]。除此之外,有研究證明,根際促生菌也有利于提高植物在干旱脅迫條件下造成的極端環(huán)境的存活率[23],將菌肥與改性吸水性竹纖維搭配使用,還可以運用到干旱土壤的種植,解決土壤板結(jié),具有有效涵養(yǎng)水源,穩(wěn)定供給營養(yǎng)成分的作用。

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