孟偉芳 汪健 張家勛

摘要：以‘黃金甲帶芽莖段作為外植體，用WPM固體培養(yǎng)基添加不同種類、濃度的激素，經(jīng)過初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)I、繼代培養(yǎng)Ⅱ、生根培養(yǎng)、煉苗，約6個(gè)月時(shí)間，使每個(gè)單芽成苗10～15個(gè)完整植株，并能在自然環(huán)境下生長。

關(guān)鍵詞：‘黃金甲;WPM培養(yǎng)基;激素;組培

‘黃金甲為衛(wèi)矛屬北海道黃楊（Euonymus japoni-CUS“Cuzhi”）的變異品種，已獲得國家林業(yè)局植物新品-種權(quán)，葉片中間翠綠，四周金黃。‘黃金甲株型緊湊，色澤鮮亮，抗寒性與北海道黃楊基本一致，可耐23.9°C低溫，在北方寒冷地區(qū)有很大市場潛力。目前，‘黃金甲主要靠嫁接進(jìn)行繁殖，費(fèi)時(shí)費(fèi)力且繁殖系數(shù)較低，其原種北海道黃楊的組培快繁技術(shù)已有所突破，因此，研究‘黃金甲組培繁育技術(shù)，以實(shí)現(xiàn)‘黃金甲的快速繁殖。

1材料選擇

春夏季選用‘黃金甲幼嫩帶芽莖段作為外植體，秋冬季選用飽滿冬芽作為外植體。

2培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基采用WPM固體培養(yǎng)基，瓊脂質(zhì)量濃度7g/L，蔗糖質(zhì)量濃度30g/L，pH值為5.8，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2500～3500Lx，培養(yǎng)溫度為24～26℃，相對(duì)濕度45%～50%。

3消毒處理

材料采集后，去掉葉片，保留部分葉柄，然后用紗布包好放自來水下流水沖洗2h，后用軟毛刷蘸取含有0.1%NaCIO的溶液清洗外植體，消毒液中加入5～6滴吐溫80。

外植體為帶芽莖段，完成清洗步驟后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)依次用75%酒精消毒20s、0.1%HgCl消毒4min，再用滅菌水清洗5～6次，每次不少于2min。然后切成有一對(duì)芽長0.5～I(xiàn).0cm小段，進(jìn)行接種。

外植體為越冬芽，需在超凈工作臺(tái)內(nèi)剝?nèi)パ客獠繑?shù)層芽鱗，再進(jìn)行消毒處理，才可接種。

4生長與分化情況

4.1初代培養(yǎng)

在WPM培養(yǎng)基中，添加KT 1.0mg/L、6-BA0.5mg/L、NAA 0.2mg/L，將切好的外植體接到上述培養(yǎng)基中，每瓶接2個(gè)外植體，接120瓶。接種10d后，芽眼萌動(dòng)，30d后，葉片展開，大部分長出3～5片嫩葉，開始轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)I。

4.2繼代培養(yǎng)I

繼代培養(yǎng)I培養(yǎng)基配方：WPM+KT 1.0mg/L+TDZ0.05mg/L+NAA 0.1mg/L，從初代培養(yǎng)中選擇生長較好的外植體，每瓶接2個(gè)，接90瓶。接種30d后，從原芽體位置逐漸長出大量叢生芽，60d后芽眼分化完成，不再增多也不再長大，開始轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)Ⅱ。

4.3繼代培養(yǎng)Ⅱ

繼代培養(yǎng)Ⅱ培養(yǎng)基配方：WPM+KT0.5mg/L+GA30.1mg/L+NAA0.1mg/L，每瓶接2個(gè)外植體，接90瓶。接種30d后，叢生芽顯著長大，節(jié)間伸長。

4.4生根培養(yǎng)

生根培養(yǎng)基配方：WPM+NAA 0.1mg/L，選取包含2對(duì)以上側(cè)芽，長3～4cm的叢生芽，將其剪下，插入生根培養(yǎng)基中，30d后無根枝條莖段下部長出大量不定根。

4.5煉苗

選取生長健壯、根系發(fā)達(dá)的組培苗，先打開瓶蓋通風(fēng)2d，使小苗逐漸適應(yīng)外界環(huán)境，再小心取出，不要傷到根系，清水沖洗干凈根部附著的培養(yǎng)基，晾干水分后，栽植至滅過菌的培養(yǎng)土內(nèi)，培養(yǎng)土按泥炭：珍珠巖：蛭石=1：1：1的比例進(jìn)行配制。栽植后噴施適量濃度多菌靈和代森錳鋅混合液，放置背光處，覆膜保濕，保持溫度在15～20℃之間，約20d后，新根長出，芽眼開始抽出新葉，說明煉苗已經(jīng)成活，可將苗挪至向陽處，并逐漸去掉覆膜，使苗適應(yīng)外界環(huán)境，1個(gè)月后即可轉(zhuǎn)入正常養(yǎng)護(hù)。如果發(fā)生爛苗或者真菌蔓延，則要及時(shí)挖掉死苗及周圍土壤，然后噴施高濃度多菌靈進(jìn)行防治，以免影響其它幼苗成活。

5結(jié)論

‘黃金甲從接種到成苗大約需要半年時(shí)間，平均1個(gè)單芽可成苗10～15個(gè)，而傳統(tǒng)嫁接繁殖單芽成苗平均0.8～0.9個(gè)，組培的增殖系數(shù)是傳統(tǒng)嫁接技術(shù)的10多倍?？梢?，組培將是‘黃金甲最快擴(kuò)繁方式。

6意義與進(jìn)展

‘黃金甲是北海道黃楊的彩葉變種，屬于葉綠素變異形成的新品種，本研究中的組培繁殖技術(shù)，沒有形成愈傷組織，就不會(huì)出現(xiàn)返祖或是黃化苗現(xiàn)象。這種技術(shù)由叢生芽到生根，長成完整植株，保持‘黃金甲的優(yōu)良性狀，還提高增殖系數(shù)，繁殖周期約6個(gè)月，為‘黃金甲的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供了更加有效的途徑。此種組培繁育技術(shù)的應(yīng)用，也為其他彩葉植物的快繁提供借鑒。