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        淺談用酶聯(lián)免疫法與膠體金法檢測乙肝表面抗原的優(yōu)缺點

        2019-07-01 13:46:39李昶
        中國實用醫(yī)藥 2019年9期

        李昶

        【摘要】 目的 分析在慢性乙型肝炎(乙肝)表面抗原(HBsAg)檢測中應(yīng)用酶聯(lián)免疫法與膠體金法的優(yōu)缺點。方法 選取4500份血液標(biāo)本進(jìn)行研究, 分別采用酶聯(lián)免疫法與膠體金法來檢測標(biāo)本的HBsAg, 對比兩種檢測方法的結(jié)果及優(yōu)缺點。結(jié)果 4500份血液標(biāo)本中, 酶聯(lián)免疫法檢測出305例陽性標(biāo)本, 陽性率為6.78%(305/4500);膠體金法檢測出298例陽性標(biāo)本, 陽性率為6.62%(298/4500)。其中, 兩種檢測結(jié)果同時為陽性的血液標(biāo)本有295份, 酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果呈陽性而膠體金法檢測結(jié)果為陰性的有10例, 膠體金法檢測結(jié)果呈陽性而酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果為陰性的有3例, 兩種檢測結(jié)果同時為陰性的標(biāo)本有4192份。采用電化學(xué)發(fā)光法對其中檢測結(jié)果不一致的13例血液標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查, 發(fā)現(xiàn)復(fù)查的結(jié)果與酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果相同, 與膠體金法比較, 酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的靈敏度更高, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 酶聯(lián)免疫檢測法有著較高的靈敏度, 但操作步驟繁瑣, 比較費(fèi)時, 膠體金法操作便捷、迅速, 但檢測靈敏度偏低。血站在篩查獻(xiàn)血者的HBsAg時, 可先采用膠體金法進(jìn)行快速篩查, 有效縮短初篩的時間, 提高檢查效率, 在大規(guī)模乙肝病毒攜帶篩檢中可采取此種方法, 對于經(jīng)膠體金法檢測結(jié)果為陽性的少數(shù)患者可采用酶聯(lián)免疫法展開復(fù)查, 從而將檢測準(zhǔn)確率有效提升。

        【關(guān)鍵詞】 慢性乙型肝炎表面抗原;酶聯(lián)免疫法;膠體金法

        DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.09.016

        作為乙肝病毒外殼蛋白的一項主要成分, HBsAg也是臨床開展乙肝血清標(biāo)志物檢查的重要指標(biāo)之一[1]?,F(xiàn)階段, 臨床在開展HBsAg檢測工作時, 通常采用酶聯(lián)免疫法與膠體金法, 但關(guān)于二者的優(yōu)缺點及適用范圍還存在一定的爭議[2]。

        因此, 本文以本站于2015年2月~2018年6月采集的4500份血液標(biāo)本為例, 分別采用酶聯(lián)免疫法與膠體金法檢測標(biāo)本的HBsAg, 對兩種檢測方法的結(jié)果及優(yōu)缺點展開對比與評價, 現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

        1 資料與方法

        1. 1 一般資料 選取本站2015年2月~2018年6月采集的4500份血液標(biāo)本為研究對象, 按衛(wèi)生部門的相關(guān)要求, 對所有標(biāo)本展開乙肝病毒攜帶檢測, 盡可能降低漏檢率及誤檢率。采用真空管采集所有血液標(biāo)本, 并在采集當(dāng)日完成檢測工作。

        1. 2 方法

        1. 2. 1 儀器及試劑 采用型號為TECAN Hydroflex的洗板機(jī)、TECAN Surise的酶標(biāo)儀各一套, 均由上??迫A生物公司生產(chǎn), 在使用之前均經(jīng)過廠方的嚴(yán)格調(diào)試及校準(zhǔn)。試劑則包括由上海科華生物公司生產(chǎn)、用于酶聯(lián)免疫法檢測的HBsAg診斷試劑盒, 由杭州艾康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)、用于膠體金法檢測的HBsAg診斷試劑盒及購自衛(wèi)健委臨檢中心的質(zhì)控血清, 所有試劑均在有限期內(nèi)。

        1. 2. 2 檢測方法 ①酶聯(lián)免疫法:采用加樣器吸取20 μl稀釋液至微孔中至微孔中, 接著加入血清100 μl, 放置37℃左右的環(huán)境中溫育1 h, 然后將酶結(jié)合物加入至微孔內(nèi), 繼續(xù)溫育0.5 h, 然后洗滌, 加入底物顯色, 并將終止液加入其中。最后采用酶標(biāo)儀比色, 將吸光度值讀取出來, 并展開計算。②膠體金法:采用加樣器吸取60 μl的新鮮血清, 向試紙條加樣端緩慢滴入, 讓血清自動通過濾膜朝檢測端進(jìn)行移動。放置20℃左右的環(huán)境中10 min, 最后觀察檢測結(jié)果。

        1. 3 判定標(biāo)準(zhǔn) 酶聯(lián)免疫法:樣本吸光度值比臨界值(S/CO)≥1時表明結(jié)果呈陽性;<1時, 表明結(jié)果為陰性。膠體金法:試紙條檢測線與對照線兩處同時出現(xiàn)了呈紫紅色的兩條免疫復(fù)合物線條, 表明結(jié)果呈陽性;如果只有對照線出出現(xiàn)一條免疫復(fù)合物線條, 表明結(jié)果呈陰性。

        1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        4500份血液標(biāo)本中, 酶聯(lián)免疫法檢測出305例陽性標(biāo)本, 陽性率為6.78%(305/4500);膠體金法檢測出298例陽性標(biāo)本, 陽性率為6.62%(298/4500)。其中, 兩種檢測結(jié)果同時為陽性的血液標(biāo)本有295份, 酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果呈陽性而膠體金法檢測結(jié)果為陰性的有10例, 膠體金法檢測結(jié)果呈陽性而酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果為陰性的有3例, 兩種檢測結(jié)果同時為陰性的標(biāo)本有4192份。采用電化學(xué)發(fā)光法對其中檢測結(jié)果不一致的13例血液標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查, 發(fā)現(xiàn)復(fù)查的結(jié)果與酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果相同, 酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的靈敏度100%(10/10)高于膠體金法的0(0/10), 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

        3 討論

        現(xiàn)階段, HBsAg為血站篩查獻(xiàn)血者時一項必檢指標(biāo), 常用檢測方法有酶聯(lián)免疫法與膠體金法。對這兩種檢測方法的原理展開分析, 發(fā)現(xiàn)其存在明顯差異[3]。具體來說, 酶聯(lián)免疫法采用HBsAg診斷試劑盒, 應(yīng)用到了雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附的原理, 即讓抗原或抗體與某種固相載體相結(jié)合, 并保持免疫活性, 或讓抗原或抗體與某種酶鏈接為抗原或酶標(biāo)抗體, 同時保留免疫活性或酶活性。作為一種利用酶的放大及高效催化作用的標(biāo)記免疫技術(shù), 具有檢測靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)勢, 對HBsAg可展開定量或半定量檢測;但此種檢測方法存在操作步驟繁瑣、比較費(fèi)時的缺點[4]。膠體金法采用HBsAg診斷試劑盒, 應(yīng)用到了膠體金免疫層析技術(shù), 其中膠體金指的是氯金酸與還原劑等物質(zhì)發(fā)生一定的反應(yīng), 聚合成相應(yīng)大小的顆粒, 在靜電的影響下, 此種顆粒會形成具有穩(wěn)定性的膠體狀態(tài)。膠體金在弱堿狀況下會帶負(fù)電荷, 與蛋白質(zhì)分子正電荷基團(tuán)發(fā)生靜電結(jié)合, 因而不會影響到蛋白質(zhì)的生物特性, 具有操作簡便迅速, 試劑保存便利, 可將職業(yè)暴露事件發(fā)生率大大降低, 有效減少醫(yī)務(wù)人員的工作量及面臨的風(fēng)險等優(yōu)點, 但存在檢測靈敏度偏低等不足之處[5]。

        本次研究中, 以本站采集的4500份血液標(biāo)本為例, 結(jié)果顯示, 4500份血液標(biāo)本中, 酶聯(lián)免疫法檢測出305例陽性標(biāo)本, 陽性率為6.78%(305/4500);膠體金法檢測出298例陽性標(biāo)本, 陽性率為6.62%(298/4500)。其中, 兩種檢測結(jié)果同時為陽性的血液標(biāo)本有295份, 酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果呈陽性而膠體金法檢測結(jié)果為陰性的有10例, 膠體金法檢測結(jié)果呈陽性而酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果為陰性的有3例, 兩種檢測結(jié)果同時為陰性的標(biāo)本有4192份。采用電化學(xué)發(fā)光法對其中檢測結(jié)果不一致的13例血液標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查, 發(fā)現(xiàn)復(fù)查的結(jié)果與酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果相同。與膠體金法比較, 酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的靈敏度更高, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

        綜上所述, 在HBsAg檢測中, 酶聯(lián)免疫檢測法與膠體金法均為兩種較可靠的檢測方法, 前者有著比較高的靈敏度, 但操作步驟繁瑣、比較費(fèi)時, 后者操作便捷、迅速, 但檢測靈敏度偏低, 因此在檢測患者的HBsAg時可先采用膠體金法進(jìn)行快速篩查, 有效縮短初篩的時間, 以提高檢查效率, 在獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前血液篩查時可采取此種方法;對于經(jīng)膠體金法檢測結(jié)果為陽性的少數(shù)患者可采用酶聯(lián)免疫法展開復(fù)查, 從而將檢測準(zhǔn)確率有效提升。

        參考文獻(xiàn)

        [1] 鄔劍, 李慧玲. ELISA法和膠體金試紙條法在乙肝表面抗原檢測中的應(yīng)用研究. 醫(yī)學(xué)信息, 2018, 31(9):155-156.

        [2] 李小云. ELISA法和膠體金免疫層析法檢測乙肝表面抗原結(jié)果分析. 醫(yī)學(xué)美學(xué)美容, 2015, 18(3):225.

        [3] 馬連學(xué), 李艷菊, 魏巍. 化學(xué)發(fā)光微粒免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的結(jié)果對比分析. 中國實用醫(yī)藥, 2014, 9(9):89-90.

        [4] 李玉亮. 淺談應(yīng)用膠體金法與酶聯(lián)免疫法檢測乙肝表面抗原的優(yōu)缺點. 當(dāng)代醫(yī)藥論叢, 2014, 12(16):45-46.

        [5] 湯曉琳, 方芳. 膠體金免疫層析法和ELISA法檢測乙肝表面抗原的對比. 沈陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2014, 16(3):160-161.

        [收稿日期:2018-09-20]

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