金輝 王海峰 曾忠友

(武警海警總隊(duì)醫(yī)院骨二科，浙江 嘉興 314000)

調(diào)查顯示，隨著我國人口老齡化，老年骨質(zhì)疏松發(fā)病率呈逐年增加趨勢，輕微創(chuàng)傷則可造成骨質(zhì)疏松患者發(fā)生骨質(zhì)疏松性骨折〔1，2〕。老年骨質(zhì)疏松主要是多種原因?qū)е碌膯挝惑w積骨質(zhì)總量減少、骨組織微細(xì)破壞和改變?yōu)樘卣鞯囊环N全身性骨骼疾病〔3，4〕。流行病學(xué)調(diào)查顯示，老年骨質(zhì)疏松患者容易發(fā)生骨折，嚴(yán)重影響老年人生活質(zhì)量〔5〕。因此，老年骨質(zhì)疏松性骨折患者采取有效的診斷和治療方法尤為重要。臨床研究顯示，CYP11A1基因rs900798位點(diǎn)多態(tài)性與芳香酶抑制劑治療的絕經(jīng)女性骨量丟失相關(guān)，提示該基因位點(diǎn)在骨代謝調(diào)節(jié)中具有潛在作用〔6〕。但目前，CYP11A1基因rs900798位點(diǎn)多態(tài)性與老年骨質(zhì)疏松性骨折相關(guān)性研究甚少，缺乏有效的參考價值。故而本研究旨在分析老年骨質(zhì)疏松性骨折與CYP11A1基因rs900798位點(diǎn)多態(tài)性的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇武警浙江省總隊(duì)醫(yī)院于2015年1月至2016年12月收治的老年骨質(zhì)疏松性骨折患者90例作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的關(guān)于骨質(zhì)疏松相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)(T值≤-2.5SD)；②骨折患者均為低能量損傷引起的骨折；③患者年齡≥70歲且≤85歲；④獲得知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近3個月服用影響骨代謝藥物者；②近6個月服用唑來膦酸或阿倫磷酸，雌激素、骨化三醇、降鈣素等；③合并嚴(yán)重心肺、肝腎功能異常；④合并甲狀腺功能衰退、甲狀腺功能亢進(jìn)及糖尿病等；⑤精神疾病者。研究組男29例，女61例；年齡70～84〔平均(76.48±3.51)〕歲；體重指數(shù)(BMI)17～28〔平均(21.45±2.89)〕kg/m2。另選擇同期收治的單純老年骨質(zhì)疏松患者80例作為對照組，男26例，女54例；年齡70～85〔平均(77.13±4.63)〕歲；BMI 18～26〔平均(21.76±2.35)〕kg/m2。兩組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1骨代謝標(biāo)志物檢測 包括骨鈣素(BGP)、Ⅰ型原骨膠原蛋白N-端肽(sCTX)和堿性磷酸酶(ALP)，入院后第2天抽取患者3 ml外周靜脈血，分離血清，離心半徑10 cm，2 500 r/min，離心時間10 min，放置于-20℃下保存待測。采用日立7600型全自動生化分析儀及配套試劑盒嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說明書標(biāo)準(zhǔn)測定BGP、sCTX和ALP含量。

1.2.2骨密度檢測 采用雙能X線吸收儀測定股骨頸和腰椎(L2～4)骨密度。

1.2.3CYP11A1基因rs900798位點(diǎn)多態(tài)性檢測 入院后第2天抽取患者3 ml外周靜脈血，放置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，放置于-20℃下保存，用于提取白細(xì)胞基因組。采用酚/氯仿法提取外周血白細(xì)胞DNA，放置于-20℃下保存，用于鑒定單核苷酸多態(tài)性。采用SNaPshot技術(shù)進(jìn)行基因分型，核心反應(yīng)體系包括測序酶、緊挨多態(tài)位點(diǎn)5′-端的不同長度延伸引物、四種熒光標(biāo)記dNTP及包含單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)的PCR產(chǎn)物模板。CYP11A1基因rs900798位點(diǎn)引物設(shè)計(jì)由上海生物工程技術(shù)有限公司合成。上游引物5′-CCACTCTTGGAGCCCTTCTG-3′，下游引物5′-GAGCTGGCAATGATGTGTCC-3′。

1.3觀察指標(biāo) (1)觀察兩組骨代謝標(biāo)志物變化；(2)觀察兩組等位基因分布頻率與基因型頻率變化；(3)觀察不同基因型骨代謝標(biāo)志物變化；(4)觀察不同基因型骨密度變化。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、方差分析、t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組骨代謝標(biāo)志物變化比較 研究組BGP含量明顯低于對照組，而sCTX和ALP含量明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2兩組等位基因分布頻率與基因型頻率比較 研究組與對照組等位基因頻率(G、T基因)和基因型頻率(GG、GT、TT)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

2.3不同基因型骨代謝標(biāo)志物變化比較 不同基因型研究組患者血清BGP、sCTX和ALP含量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

2.4不同基因型研究組骨密度變化比較 不同基因型研究組患者股骨頸和腰椎(L2～4)骨密度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表4。

表1 兩組骨代謝標(biāo)志物變化比較

表2 兩組等位基因分布頻率與基因型頻率比較〔n(%)〕

表3 不同基因型研究組骨代謝標(biāo)志物變化比較

表4 不同基因型研究組骨密度變化比較

3 討 論

原發(fā)性骨質(zhì)疏松是老年人及絕經(jīng)后女性常見的一種全身性骨代謝疾病，以骨骼脆性增加、骨微結(jié)構(gòu)破壞、骨量丟失及骨折風(fēng)險增加為特點(diǎn)。老年骨質(zhì)疏松為低轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松，發(fā)病年齡通常在70歲以上〔7～10〕。老年骨質(zhì)疏松性骨折主要是老年人骨質(zhì)疏松癥候，骨強(qiáng)度和骨密度明顯下降，受到輕微暴力甚至日常生活均可能導(dǎo)致出現(xiàn)骨折，是骨質(zhì)疏松最嚴(yán)重的后果〔11～14〕。目前，骨密度是骨質(zhì)疏松診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，具有穩(wěn)定性好、精確度高等特點(diǎn)，但其無法反映骨代謝短時間內(nèi)病理生理變化。骨代謝標(biāo)志物可早期評估骨質(zhì)疏松治療效果。BGP是一種由成骨細(xì)胞和成纖維細(xì)胞合成的特殊骨蛋白，主要分泌非膠原蛋白，生成后部分進(jìn)入骨基質(zhì)與其結(jié)合，使其部分釋放入血，目前認(rèn)為BGP是反映骨形成率的一種特異性指標(biāo)。ALP主要由成骨細(xì)胞產(chǎn)生，也是成骨細(xì)胞具有活性和成熟的一種標(biāo)志，其含量變化可有助于了解成骨細(xì)胞狀態(tài)〔15〕。sCTX是較好的一種反映骨吸收指標(biāo)，主要存在于Ⅰ型分子間交聯(lián)物的重要區(qū)段〔16〕。sCTX主要用于判斷代謝性骨病的骨吸收狀態(tài)，檢測和評價抗骨吸收藥物的療效。本研究表明，老年骨質(zhì)疏松性骨折患者骨代謝指標(biāo)BGP含量降低而sCTX和ALP含量升高。

CYP11A1基因?qū)偌?xì)胞色素P450超家族，主要編碼膽固醇側(cè)鏈裂解酶，簡稱為P450scc〔17〕。P450scc是催化生物體內(nèi)類固醇激素合成的一種限速酶，且可催化膽固醇轉(zhuǎn)化為孕醇酮，為性激素合成的第一步〔18,19〕。研究認(rèn)為因性激素缺乏與老年骨質(zhì)疏松相關(guān)，CYP11A1基因可能與老年骨質(zhì)疏松性骨折骨密度存在一定的相關(guān)性〔20〕。但本研究表明，老年骨質(zhì)疏松性骨折骨密度與CYP11A1基因rs900798位點(diǎn)多態(tài)性無明顯相關(guān)性，且不同基因型患者血清BGP、sCTX和ALP含量比較無差異，說明老年骨質(zhì)疏松性骨折患者BGP、sCTX和ALP水平與CYP11A1基因rs900798位點(diǎn)多態(tài)性無明顯相關(guān)性。