錢亞瓊 茅利明 章海峻 張利群

流行性感冒病毒（Flu）是引起全球性流行性感冒的病原體，病毒為正粘病毒科，單負股RNA病毒，通過飛沫傳播［1］。人類流感病毒主要分為甲、乙、丙三種類型。對于甲型和乙型流感病毒檢測具有較大臨床意義，而丙型流感病毒主要侵襲嬰幼兒，且以散發(fā)出現(xiàn)，一般不引起流行［2］。為了解近期本地區(qū)流感病毒隨不同季節(jié)的流行情況，作者對1648例疑似患者進行流感病毒抗原的篩查檢測，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2017年3月至2018年2月本院發(fā)熱門診及內(nèi)科、兒科門診因發(fā)熱、鼻塞、咽痛、流涕頭痛、全身乏力酸痛等流感樣癥狀而就診的疑似患者1648例，平均年齡（36.3±15.4）歲。診斷標(biāo)準參照衛(wèi)生部《流行性感冒診斷標(biāo)準》（WS285-2008）。應(yīng)用甲型/乙型流感病毒抗原金標(biāo)記試劑進行流感抗原的篩查檢測。所有疑似患者均同時檢測血常規(guī)及CRP等感染性指標(biāo)。另選取同時期在本院體檢中心行健康體檢且無流感癥狀及其它疾病的志愿者240例為正常對照組，平均年齡（33.5±13.8）歲。兩組臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法 標(biāo)本的采集與處理：檢測方法以咽喉拭子采樣為主。采樣拭子必須為泡沫（Foam）或人造絲（Rayon）材質(zhì)。用滅菌的拭子從口腔內(nèi)完全插入咽喉中，以咽后壁、上顎、扁桃體等發(fā)紅部位為中心，摩擦10余次，以便能采集到黏膜表皮。采集的標(biāo)本應(yīng)盡快送檢，不＞24h。血常規(guī)標(biāo)本為靜脈采血2ml注入紫色EDTA-K2抗凝管，顛倒混勻后2h內(nèi)上機檢測完畢。試劑和方法：（1）流感病毒抗原檢測試劑盒性能驗證：本試劑盒的性能驗證主要體現(xiàn)在以下三方面：①最小檢測靈敏度：本試劑對甲型流感病毒（A2/Aichi/2/68H3N2）的最小檢測靈敏度為1.25×103CEID50/每人分檢測。對乙型流感病毒（Hongkong5/72）的最小檢測靈敏度為0.5×102CEID50/每人分檢測；②可檢出菌株：A型Flu有7個H1N1亞型，5個H3N2亞型，2個H5NI，1個H9N2和1個H7N3，B型Flu有5個型；涵蓋所有主要的流感病毒亞型；③交叉反應(yīng)與干擾物質(zhì)：Flu檢測試劑與不同濃度的病毒、細菌和真菌進行交叉反應(yīng)，F(xiàn)lu檢測試劑均為陰性，慶大霉素等數(shù)十種不同劑量濃度OTC藥物均不會對Flu檢測產(chǎn)生影響。（2）流感病毒抗原檢測：利用膠體金免疫層析法原理，采用艾博生物醫(yī)藥（杭州）有限公司生產(chǎn)的甲型/乙型流感病毒抗原檢測試劑盒，嚴格按照試劑說明書操作。檢測方法如下：①檢測前將檢測試劑、樣本和Flu 裂解液恢復(fù)至室溫（15℃～30℃）；②在樣本抽提管中加入6滴（約192μl）含有三羥甲基氨基甲烷的裂解液，抽提液不能過量，以免樣本稀釋而產(chǎn)生假陰性；③采好樣的拭子放入抽提管，旋轉(zhuǎn)10s并且用手指擠壓，可使樣本和裂解液充分混合；④試紙條按箭頭方向插入樣本抽提管，15min取出試劑并判斷結(jié)果。（3）血常規(guī)檢測：采用邁瑞B(yǎng)C5390全自動血細胞分析儀（帶CRP功能），檢測指標(biāo)為白細胞（WBC）、中性粒細胞（Neu）、淋巴細胞（Lym）、嗜酸性粒細胞（Eos）、血小板（PLT）和C反應(yīng)蛋白（CRP）等。儀器、CRP乳膠免疫比濁法試劑盒（鼠單克隆抗CRP抗體）等試劑均由深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司提供，日間室內(nèi)質(zhì)控均在正常范圍內(nèi)。Flu結(jié)果判讀標(biāo)準：陽性（+）：測試區(qū)、甲流和/或乙流出現(xiàn)紫紅色帶；陰性（-）：僅測試區(qū)出現(xiàn)紫紅色帶，甲流和乙流均無任何條帶；無效區(qū)：質(zhì)控帶未出現(xiàn)紫紅色帶，排除不正確操作或試劑變質(zhì)無效。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件。計量資料用（±s）表示，用t檢驗；計數(shù)資料用卡方檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 流感病毒陽性組和健康對照組血常規(guī)、CRP結(jié)果比較 見表1。

表1 流感病毒陽性組和健康對照組血常規(guī)、CRP結(jié)果比較（±s）

表1 流感病毒陽性組和健康對照組血常規(guī)、CRP結(jié)果比較（±s）

Neu(×109/l)組別 n WBC(×109/l)Lym(×109/l)Eos(×109/l)PLT(×109/l)CRP(mg/L)流感陽性組 456 5.4±1.1 3.6 ±1.0 1.47±0.5 0.15±0.03 144±35 12.6±4.74正常對照組 240 6.7±1.3 3.4 ±0.9 2.38±0.8 0.58±0.05 186±46 2.27±1.03 P值 ＜0.05 0.187 ＜0.05 ＜0.05 0.023 ＜0.05

2.2 不同月份的流感病毒檢出率 本地區(qū)年度流感高峰期在2018年1月和2月，且以乙型流感為主，其余月份為散發(fā)低流行。年度甲型流感和乙型流感病毒檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=20.615，P＜0.05），見表2。

表2 不同月份甲型/乙型流感病毒感染率［n（%）］

2.3 不同年齡組流感樣病例中流感病毒抗原檢測陽性分布 1648例流感樣病例咽拭子中，甲型和乙型流感抗原金標(biāo)法陽性總計456例。男984例，陽性279例，陽性檢出率28.35%，女664例，陽性177例，陽性檢出率26.65%，男女患者陽性檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.571，P=0.455）。根據(jù)年齡分組，不同年齡組的流感病毒抗原檢出率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=27.174，P＜0.05），見表 3。

表3 不同年齡組流感樣病例患者中流感病毒抗原陽性檢出率比較

3 討論

甲型和乙型流感病毒會產(chǎn)生許多亞型，是因流感病毒的血凝素（hemagglutinin HA）和神經(jīng)氨酸酶（neuraminidase NA）抗原易發(fā)生轉(zhuǎn)變，其組成氨基酸位點均可發(fā)生變異。流感病毒通過每次大流行后，通過上述的氨基酸位點變異，從而產(chǎn)生新型的流感病毒，人體免疫系統(tǒng)對于變異的亞型普遍缺乏抵抗力，因而造成局部或廣泛的流行［3-4］。流感病毒是引起較多動物，特別是鳥類和禽類患流感的RNA病毒，秋冬季鳥類的全球性遷徙可能是引起流感病毒全球性傳播的一種重要的傳播途徑［5］。

本資料顯示，與正常對照組比較，流感病毒抗原陽性組的血常規(guī)中的項目除Neu無明顯變化，WBC、Eos、Lym、PLT均明顯下降，而CRP則明顯升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這符合病毒感染性疾病的血細胞檢查規(guī)律，外周血LEU和PLT的減少可能是由于淋巴細胞和巨核細胞參與病毒滅活引起病毒誘導(dǎo)淋巴細胞凋亡以及巨核細胞破壞而減少，此外病毒可能產(chǎn)生循環(huán)分子引起血小板粘附聚集也會引起外周血血小板減少［6］。本地區(qū)流感病毒的流行高發(fā)期在冬季和春季，其余時間呈全年散發(fā)低流行。本地區(qū)年度流感爆發(fā)期在2018年1～2月，這2個月由膠體金免疫層析法檢測的甲型和乙型流感的陽性檢出率分別是11.86%和22.37% 。本次流感爆發(fā)期檢測到的流感類型主要以呈局限流行的乙型流感病毒為主。全年乙型流感與甲型流感陽性檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=20.615，P＜0.05）。甲型流感在 2017 年 9～10 月陽性檢出率分別為22.22%和18.18%，呈局部小散發(fā)小流行狀態(tài)。4個月～10歲和21～60歲年齡段是流感病毒高發(fā)年齡段，其2017年度甲/乙流感陽性檢出率分別32.28%和31.21% 。兒童高發(fā)流感病毒主要是因為幼兒人體免疫力發(fā)育不健全，以及因集體生活（幼兒園），相互感染的機會多，從而容易感染。＞60歲老年人組，其陽性檢出率為25.86%。因老年人患慢性疾病比如糖尿病、呼吸道和心肺疾病增多，機體免疫力低，再重疊感染流感病毒，會加重原有基礎(chǔ)性疾病，甚至危及生命。因此，流感病毒早期、快速和方便的診斷有助于臨床治療的進行。

目前檢測流感病毒的診斷方法，均具有一定的局限性［7］。如作為金標(biāo)準的病毒分離培養(yǎng)，因其需3～7d才能出結(jié)果。核酸RNA檢測的優(yōu)點是速度快且可檢測分型，但對實驗室設(shè)計布局、設(shè)備和人員要求等因素均較高。這兩種檢測方法均不適合基層醫(yī)院快速診斷流感病毒［8］。目前一般基層醫(yī)院用于檢測流感病毒的方法主要是流感病毒抗原金標(biāo)法檢測。相對于以上方法，其敏感性和特異性相對較差［9］。同時，受檢測標(biāo)本的類型及個人采樣水平、操作手法以及試劑盒差異，目前有關(guān)流感病毒抗原陽性率的文獻報道并不一致［10］。但其利用抗原膠體金免疫層析技術(shù)，具有快速、簡單、無需特殊設(shè)備和無污染等優(yōu)點，對涵蓋甲型和乙型流感病毒的不同亞型以及不同株均具有良好的反應(yīng)性，適合基層醫(yī)院廣泛篩查使用。