吳子聰 高嘉敏 王一飛 王治平

【摘 要】目的：通過研究連艾煎的體外抗氧化作用，為充分利用連艾煎提供參考依據(jù)。方法：以黃連、艾葉質(zhì)量比2∶1制備水提液;以維生素C為對(duì)照，采用分光光度法測(cè)定連艾煎清除DPPH和ABTS自由基的能力;以N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）作為對(duì)照，采用熒光法測(cè)定連艾煎對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞活性氧簇（ROS）產(chǎn)生的影響。結(jié)果：連艾煎清除DPPH和ABTS自由基的IC50值分別為（2391.20±41.85）mg/L和（249.98±17.19）mg/L，且在一定濃度范圍內(nèi)存在量效關(guān)系;而連艾煎對(duì)ROS的產(chǎn)生具有促進(jìn)作用。結(jié)論：連艾煎具有一定胞外抗氧化能力，在胞內(nèi)會(huì)促進(jìn)ROS的生成，為連艾煎的充分利用提供參考。

【關(guān)鍵詞】連艾煎;艾葉;黃連;抗氧化;活性氧簇

【中圖分類號(hào)】R284 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）5-0014-05

連艾煎方出《松峰說疫》卷二，其配方為黃連與艾葉，具有調(diào)中下氣，清腸開噤之功效，主治瘟疫噤口下痢者[1]。黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.、三角葉黃連 Coptis deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao或云連 Coptis teeta Wall.的干燥根莖。以上三種分別習(xí)稱“味連”、“雅連”、“云連”。秋季采挖，除去須根和泥沙，干燥，撞去殘留須根。味苦，寒。歸心、脾、胃、肝、膽、大腸經(jīng)[2]。艾葉為菊科植物艾Artemisia argyi LevL et Vant.的干燥葉。夏季花未開時(shí)采摘，除去雜質(zhì)，曬干。艾葉氣清香，味苦，艾葉味辛、苦，溫;有小毒。歸肝、脾、腎經(jīng)[2]。黃連與艾葉皆為常用中藥，針對(duì)黃連或艾葉單方已有大量現(xiàn)代研究[3-9]。近年來，有關(guān)中藥復(fù)方的抗氧化研究備受廣泛關(guān)注，然而連艾煎作為一種傳統(tǒng)中藥復(fù)方，但在維普、CNKI或Pubmed等中內(nèi)外各文獻(xiàn)庫(kù)皆沒檢索出對(duì)連艾煎有任何現(xiàn)代研究，也沒有對(duì)其抗氧化能力或藥理作用的研究，本實(shí)驗(yàn)開展連艾煎的體外抗氧化活性研究，為連艾煎的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）;紫外分光光度計(jì)（島津公司）;熒光顯微鏡（尼康公司）;電熱爐（廣州粵城電器廠）;循環(huán)真空泵（河南省予華儀器有限公司）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（海道夫公司），移液槍（艾本德公司）。

1.2 材料 黃連（產(chǎn)地：四川，批號(hào)：180801）、艾葉（產(chǎn)地：汕頭，批號(hào)：20180901），均購(gòu)于大參林廣州心誼路店，經(jīng)廣東藥科大學(xué)王治平副研究員鑒定確定為毛茛科、黃連屬黃連Coptis chinensis Franch.及菊科植物艾Artemisia argyi LevL et Vant.;1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）（規(guī)格1g，純度96%，批號(hào)：W26F7E10072，源葉生物公司）;2，2'-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABT，批號(hào)E1506006，規(guī)格1g，純度98%，美國(guó)Aladdin公司）;維生素C（規(guī)格100g，純度99.7%，批號(hào)20130315，%國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;過硫酸鉀（規(guī)格500g，純度99.5%，批號(hào)P112191，美國(guó)Aladdin公司）;NAC（規(guī)格25g，純度99%，批號(hào)A105420，美國(guó)Aladdin公司）;95%乙醇購(gòu)自廣州化學(xué)試劑廠;ROS檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

2方法

2.1 連艾煎的制備 連艾煎由黃連6g，熟艾3g組成。按處方取藥材，溫水浸泡30min，加水100mL，煎煮提取3次，每次60min，過濾，合并濾液，濃縮至每1mL藥液含生藥66mg，即得。

2.2 溶液 配制61.8μg/mL DPPH工作液：稱取6.18mg DPPH粉末，用無水乙醇溶解并定容至100mL。ABTS+自由基儲(chǔ)備液：稱取9.67 mg ABTS 和64.26mg過硫酸鉀于10mL 的棕色瓶中，加蒸餾水定容至刻度線，避光靜置過夜。

2.3 連艾煎對(duì)DPPH自由基的清除能力 根據(jù)文獻(xiàn)[10-13]方法進(jìn)行DPPH自由基清除能力測(cè)試。DPPH是一種在有機(jī)溶劑中相對(duì)穩(wěn)定的自由基，其乙醇溶液為紫色，需避光儲(chǔ)存，DPPH具有孤對(duì)電子，故有接受一個(gè)電子或氫離子的能力，在波長(zhǎng)為517nm 下具有最大吸收，可用紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行定量測(cè)定。當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，DPPH·的單電子被配對(duì)而使其顏色變淺，從而導(dǎo)致517nm下吸光值下降，且下降程度呈線性關(guān)系，據(jù)此可以評(píng)價(jià)試驗(yàn)樣品的抗氧化能力。取3.00mL 新配制的61.8μg/mL DPPH工作液置于10mL 具塞比色管中，使用移液槍分別加入90.91、121.21、151.52、181.82、212.12與242.42μL的樣品溶液，蒸餾水補(bǔ)充至4.00mL，混勻后室溫下避光反應(yīng)30min，在517nm處測(cè)定其吸光度A2。另外再取3.00mL 95%乙醇置于10mL具塞比色管中，然后分別加入與樣品管加入量相同體積的樣品溶液，蒸餾水補(bǔ)充至4.00mL，混勻后室溫下避光反應(yīng)30min，在517nm 處測(cè)定其吸光度A1，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。清除率計(jì)算公式：

DPPH自由基清除率（%）=A0-（A2-A1）A0×100%

其中，A0為空白吸光度，A1為樣品自身對(duì)照吸光度，A2為樣品吸光度。

2.4 連艾煎對(duì)ABTS自由基的清除能力 根據(jù)文獻(xiàn)方法進(jìn)行ABTS自由基清除能力測(cè)定[14-15]。ABTS在適當(dāng)?shù)难趸瘎┳饔孟卵趸删G色的ABTS·+，在抗氧化物存在時(shí)ABTS·+的產(chǎn)生會(huì)被抑制，在734nm或405nm測(cè)定ABTS的吸光度即可測(cè)定并計(jì)算出樣品的總抗氧化能力。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用80%乙醇將ABTS+儲(chǔ)備液稀釋成所需工作液，使其在室溫下于734nm 處測(cè)得的吸光度在0.700 ± 0.020。取3.00mL 新配制的濃度為ABTS+工作液置于10mL具塞比色管中，使用移液槍分別加入6.06、12.12、18.18、24.24、30.30及36.36μL的樣品溶液，蒸餾水補(bǔ)充至4.00mL，混勻后室溫下避光反應(yīng)30min，在734nm處測(cè)定其吸光度A2。另外再取3.00mL 95%乙醇置于10mL具塞比色管中，然后分別加入與樣品管加入量相同體積的樣品溶液，蒸餾水補(bǔ)充至4.00mL，混勻后室溫下避光反應(yīng)30min，在734nm 處測(cè)定其吸光度A1，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。清除率計(jì)算公式：

ABTS自由基清除率（%）=A0-（A2-A1）A0 ×100%

其中，A0為空白吸光度，A1為樣品自身對(duì)照吸光度，A2為樣品吸光度。

2.5 連艾煎對(duì)細(xì)胞內(nèi)的活性氧簇（ROS）水平的影響 ROS水平檢測(cè)實(shí)驗(yàn)根據(jù)參考文獻(xiàn)[16]，使用ROS檢測(cè)試劑盒進(jìn)行。DCFH-DA探針法是一種利用熒光探針DCFH-DA進(jìn)行ROS檢測(cè)的方法，DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH，而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)的ROS可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測(cè)DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。取處于對(duì)數(shù)期的RAW264.7細(xì)胞（2×107個(gè)）接種于6孔板，分為空白組、ROS陽(yáng)性對(duì)照組（Rosup，ROS檢測(cè)試劑盒提供，50mg/L）、LPS組（100μg/L）、LPS+ROS抑制劑（NAC，1.0g/L）組、LPS+連艾煎組（1.5g/L）、連艾煎自身對(duì)照組（1.5g/L）。除ROS陽(yáng)性對(duì)照組外，分別以相應(yīng)藥物刺激細(xì)胞24h，ROS陽(yáng)性對(duì)照組刺激2h。在超凈工作臺(tái)中避光下，DCFH-DA探針（ROS檢測(cè)試劑盒提供）用無血清培養(yǎng)基稀釋，使DCFH-DA終濃度為4.9mg/L，每孔加入1mL的DCFH-DA探針，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中避光孵育細(xì)胞1h，使用無血清培養(yǎng)基在超凈工作臺(tái)中避光清洗3次，以充分去除未結(jié)合的游離的DCFH-DA探針;在熒光倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度的變化，激發(fā)波長(zhǎng)488nm，檢測(cè)波長(zhǎng)525nm，并對(duì)其進(jìn)行拍照（200×）記錄（激發(fā)時(shí)間10s，曝光時(shí)間1s）。同時(shí)，使用ImageJ圖像處理軟件對(duì)ROS熒光強(qiáng)度進(jìn)行灰度分析，隨機(jī)選取十個(gè)視野，獲取平均光密度，根據(jù)光密度對(duì)各組ROS進(jìn)行相對(duì)定量。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料采用（x±s）表示，組間比較采用兩樣本t檢驗(yàn)。P< 0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 連艾煎清除DPPH自由基試驗(yàn) 如表1所示，在一定的濃度范圍內(nèi)，連艾煎對(duì)DPPH自由基具有一定的清除能力，隨著濃度的增加，對(duì)DPPH自由基的清除率也逐步增加。連艾煎清除DPPH自由基的IC50為（2391.21±41.85）mg/L，陽(yáng)性藥物維生素C清除DPPH自由基的IC50為（0.73±0.02）mg/L，兩者之間的差異非常顯著（P< 0.01）。

3.2 連艾煎清除ABTS自由基試驗(yàn) 在一定的濃度范圍內(nèi)，連艾煎對(duì)ABTS自由基具有一定的清除能力，隨著濃度的增加，對(duì)ABTS自由基的清除率也逐步增加。連艾煎清除ABTS自由基的IC50為（240.96±4.66）mg/L，陽(yáng)性藥物維生素C清除ABTS自由基的IC50為（1.14±0.04）mg/L，兩者之間的差異非常顯著（P<0.01），結(jié)果見表2。

3.3 連艾煎對(duì)RAW264.7細(xì)胞ROS水平的影響試驗(yàn) 如圖1所示，空白組的細(xì)胞沒有檢測(cè)出ROS熒光，LPS組和ROS陽(yáng)性組都檢測(cè)出明顯的ROS亮斑，而ROS抑制劑NAC則抑制了LPS引起的ROS升高。從圖1.e可以看出，連艾煎沒有抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞的ROS產(chǎn)生，反而增加了其生成，在LPS+連艾煎（1.5g/L）的ROS熒光比之前4組都要高。從圖1.f可以看出，單用連艾煎刺激RAW264.7細(xì)胞也產(chǎn)生了類似的結(jié)果。使用ImageJ軟件對(duì)ROS熒光進(jìn)行灰度分析（圖2），可知Rosup組和LPS組的ROS熒光都比空白組高，且差異非常顯著（P< 0.01），LPS+連艾煎組ROS熒光比LPS組高，且差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.01），而連艾煎自身對(duì)照組ROS熒光則比空白組和LPS組都要高，且差異顯著（P< 0.05），說明連艾煎自身可以引起細(xì)胞ROS升高。

4 討論

4.1 連艾煎方 出《松峰說疫》卷二，其處方包括黃連及艾葉，具有調(diào)中下氣，清腸開噤之功效，主治噤口痢，下痢赤白，腹中疼痛，里急后重，得食則吐者[1，17]。推測(cè)其解腸胃熱毒功能可能與其

抗氧化能力有關(guān)，故對(duì)其抗氧化能力作初步測(cè)試[18]。連艾煎體外抗氧化實(shí)驗(yàn)研究表明，連艾煎對(duì)DPPH及ABTS自由基具有一定的清除作用，雖然清除活性不如維生素C，但在一定范圍內(nèi)其抗氧化作用與濃度也能呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系。為了進(jìn)一步探究連艾煎的抗氧化能力，我們使用了RAW264.7細(xì)胞模型檢測(cè)連艾煎對(duì)細(xì)胞ROS的影響。在細(xì)胞ROS實(shí)驗(yàn)中，可以明顯看出ROS陽(yáng)性對(duì)照（Rosup）、LPS都對(duì)細(xì)胞ROS熒光有顯著升高作用（P< 0.01），同時(shí)，ROS抑制劑NAC顯著抑制了LPS引起的ROS升高（P< 0.01），說明細(xì)胞ROS模型成功建立。LPS+連艾煎組顯示出比LPS組更強(qiáng)的熒光（P< 0.01），說明連艾煎并不會(huì)抑制LPS引起的ROS升高，而相比空白組，連艾煎自身對(duì)照組顯著地增強(qiáng)了細(xì)胞ROS熒光（P< 0.01），說明連艾煎自身會(huì)對(duì)細(xì)胞ROS產(chǎn)生有促進(jìn)作用。與普通的抗氧化劑不同的是連艾煎在理化實(shí)驗(yàn)中顯示出較強(qiáng)抗氧化活性，而在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中則可以升高ROS水平，這個(gè)現(xiàn)象是值得深入研究的。

研究表明ROS與很多病理過程具有密切聯(lián)系，尤其是腫瘤[19-20]。Gorrini等發(fā)現(xiàn)胰島素升高細(xì)胞內(nèi)ROS水平，后者進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖[21]。Helfinger等研究顯示，高濃度的ROS可導(dǎo)致DNA損傷和突變，引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化[22]。有研究發(fā)現(xiàn)，ROS介導(dǎo)的PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的過度激活利于腫瘤細(xì)胞存活以及促進(jìn)化療耐藥[23-24]。因此，傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為體內(nèi)ROS升高可促進(jìn)腫瘤形成、侵襲和轉(zhuǎn)移，并基于此尋找具有強(qiáng)抗氧化活性的天然產(chǎn)物作為開發(fā)抗腫瘤藥物的新方向[25]。

然而，ROS在癌癥中的作用仍存在爭(zhēng)議，最新的觀點(diǎn)認(rèn)為機(jī)體低水平的ROS能夠增加癌癥風(fēng)險(xiǎn)，升高ROS反而利于癌癥治療。哥德堡大學(xué)的一項(xiàng)研究指出抗氧化劑NAC和維生素E分別使肺癌小鼠的最大存活率降低了60%和50%[26-29]。此外，Lee等發(fā)現(xiàn)放射治療使機(jī)體產(chǎn)生ROS能引起DNA損傷，從而破壞癌細(xì)胞[30]。Zhen和Hu等研究顯示，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，ROS水平升高會(huì)導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞對(duì)電離輻射的抗性降低，從而增強(qiáng)癌細(xì)胞對(duì)放射治療的敏感性[31-32]。普通抗氧化劑有效地減少ROS的生成，從而使癌細(xì)胞的生長(zhǎng)不受干擾，詹姆斯沃森（James Dewey Watson）甚至認(rèn)為，抗氧化劑不但無助于預(yù)防癌癥，還可能引發(fā)癌癥[33-34]。

綜上所述，關(guān)于ROS在癌癥中的作用的研究日益增多，但學(xué)術(shù)界對(duì)ROS是致癌還是抗癌目前尚未有統(tǒng)一的觀點(diǎn)，ROS作為腫瘤促進(jìn)劑或抑制劑的作用都有大量證據(jù)支持，這種悖論被解釋為適應(yīng)性穩(wěn)態(tài)，細(xì)胞內(nèi)存在一種平衡，可能引起細(xì)胞損傷的活性物質(zhì)也能激活保護(hù)細(xì)胞的生物途徑，這種平衡取決于活性物質(zhì)的濃度[35-36]。

氧化應(yīng)激促進(jìn)癌癥發(fā)展和殺傷癌細(xì)胞的作用為兩種相反的癌癥治療策略提供了不同的理論基礎(chǔ)。一種方法是使用抗氧化劑提高ROS清除能力，從而消除ROS信號(hào)并抑制腫瘤生長(zhǎng)，另一種相反的方法是用具有促氧化劑殺傷癌細(xì)胞，促氧化劑可增加ROS生成或消除癌細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)[37]。連艾煎的抗氧化活性實(shí)驗(yàn)顯示出連艾煎具有較強(qiáng)的抗氧化活性，同時(shí)可以升高細(xì)胞ROS水平。通過對(duì)連艾煎抗氧化活性的研究，在一定程度上預(yù)示連艾煎可能因?yàn)樯逺OS帶來健康風(fēng)險(xiǎn)，也可能成為一種避免細(xì)胞ROS減少而導(dǎo)致癌癥風(fēng)險(xiǎn)增加，甚至可以通過引起ROS升高而增加癌細(xì)胞對(duì)放射治療敏感度的抗氧化劑。連艾煎對(duì)腫瘤到底起到何種作用值得進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]劉奎.松峰說疫（第2卷）[M].? 北京：人民衛(wèi)生出版社，1987： 130.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（第一部）[M].? 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2015.

[3]張立敏，安紅梅.中藥復(fù)方抗氧化治療阿爾茨海默病[J].世界中醫(yī)藥， 2017， 12（3）： 708-711.

[4]蓋曉紅，劉素香，任濤，等.黃連的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥， 2018， 49（20）： 4919-4927.

[5]李云，王煒，尹登科，等.黃連多糖不同組分抗氧化活性比較研究[J].安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)， 2015， 34（1）： 66-69.

[6]曹玲，于丹，崔磊，等.艾葉的化學(xué)成分、藥理作用及產(chǎn)品開發(fā)研究進(jìn)展[J].藥物評(píng)價(jià)研究， 2018， 41（5）： 918-923.

[7]王曉琴，周成江，張娜，等.野艾蒿化學(xué)成分研究[J].中藥材， 2011， 34（2）： 234-236.

[8]王惠君，王文泉，盧誠(chéng)，等.艾葉研究進(jìn)展概述[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2015， 43（8）： 15-19.

[9]胡崗，尹美珍，喻昕，等.艾葉多糖體外抗氧化作用研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥， 2015， 18（11）： 2650-2652.

[10]Fang L， Zhang H， Zhou J， et al. Rapid Screening and Preparative Isolation of Antioxidants from Alpinia officinarum Hance Using HSCCC Coupled with DPPH-HPLC Assay and Evaluation of Their Antioxidant Activities[J]. J ANAL METHODS CHEM， 2018（1）： 3158293.

[11]Sonklin C， Laohakunjit N， Kerdchoechuen O. Assessment of antioxidant properties of membrane ultrafiltration peptides from mungbean meal protein hydrolysates[J]. Peerj， 2018（6）： e5337.

[12]闞永軍，趙立，楊彬君，等.野生和林下種植金線蓮的體外抗氧化活性研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥， 2017， 26（6）： 15-17.

[13]李生茂，劉琳，潘媛，等.川芎揮發(fā)油化學(xué)成分GC-MS分析及抗氧化活性研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥， 2018， 27（2）： 16-20.

[14]Lee D， Lee O H， Choi G， et al. Antioxidant and Anti-Adipogenic Activities ofTrapa japonicaShell Extract Cultivated in Korea[J]. Prev. Nutr. Food Sci， 2017， 22（4）： 327-334.

[15]王吉成，劉軒，唐勁天，等.桑葉發(fā)酵前后總黃酮、總酚酸含量變化及抗氧化活性研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥， 2014， 23（23）： 15-18.

[16]侯麗麗，陳婷，劉禮婷，等.生長(zhǎng)激素釋放多肽對(duì)高糖誘導(dǎo)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的保護(hù)作用[J].國(guó)際眼科雜志， 2018， 18（7）： 1184-1187.

[17]謝海洲，盧祥之，謝芳. 中醫(yī)歷代良方全書[M]. 青島：青島出版社， 2006： 482.

[18]付烊，張艷，運(yùn)強(qiáng).放射性腸炎的中醫(yī)藥治療進(jìn)展[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)， 2016， 31（1）： 121-124.

[19]Conversely. Nutrients and Oxidative Stress： Friend or Foe[J]. OXID MED CELL LONGEV， 2018， 2018（6）： 314-321.

[20]Liguori I， Russo G， Curcio F， et al. Oxidative stress， aging， and diseases[J]. Clin Interv Aging， 2018， 13（1）： 757-772.

[21]Gorrini C， Harris I S， Mak T W. Modulation of oxidative stress as an anticancer strategy[J]. Nature reviews Drug discovery， 2013， 12（12）： 931.

[22]Helfinger V， Von Gall F F， Henke N， et al. Hydrogen peroxide formation by Nox4 limits malignant transformation[J]. bioRxiv， 2017： 177055.

[23]Helfinger V， Schroeder K. Redox control in cancer development and progression[J]. Molecular aspects of medicine， 2018.

[24]Govindarajan B， Sligh J E， Vincent B J， et al. Overexpression of Akt converts radial growth melanoma to vertical growth melanoma[J]. The Journal of clinical investigation， 2007， 117（3）： 719-729.

[25]Liou GY， Storz P. Reactive oxygen species in cancer[J]. Free radical research， 2010， 44（5）： 479-496.

[26]Wang J， Yi J. Cancer cell killing via ROS： to increase or decrease， that is the question[J]. Cancer biology & therapy， 2008， 7（12）： 1875-1884.

[27]Seifried H E， Mcdonald S S， Anderson D E， et al. The antioxidant conundrum in cancer[J]. Cancer research， 2003， 63（15）： 4295-4298.

[28]Group A-T B C C P S. The effect of vitamin E and beta carotene on the incidence of lung cancer and other cancers in male smokers[J]. New England Journal of Medicine， 1994， 330（15）： 1029-1035.

[29]Sayin V I， Ibrahim M X， Erik L， et al. Antioxidants accelerate lung cancer progression in mice[J]. SCI TRANSL MED， 2014， 6（221）： 1-30.

[30]Lee S Y， Jeong E K， Ju M K， et al. Induction of metastasis， cancer stem cell phenotype， and oncogenic metabolism in cancer cells by ionizing radiation[J]. Molecular cancer， 2017， 16（1）： 10.

[31]Zhen X， Cheng P， Pu K. Recent Advances in Cell Membrane–Camouflaged Nanoparticles for Cancer Phototherapy[J]. Small， 2018： 1804105.

[32]Hu J， Li H， Luo X， et al. The role of oxidative stress in EBV lytic reactivation， radioresistance and the potential preventive and therapeutic implications[J]. International journal of cancer， 2017， 141（9）： 1722-1729.

[33]Chandel N S， Tuveson D A. The Promise and Perils of Antioxidants for Cancer Patients — NEJM[J]. N Engl J Med， 2014， 371（2）： 177-178.

[34]Watson J. Oxidants， antioxidants and the current incurability of metastatic cancers[J]. OPEN BIOL， 2013， 3（120144）： 1-9.

[35]Davies J M S， Cillard J， Friguet B， et al. The Oxygen Paradox， the French Paradox， and age-related diseases[J]. Geroscience， 2017， 39（5-6）： 499-550.

[36]Obrador E， Liu-Smith F， Dellinger R W， et al. Oxidative stress and antioxidants in the pathophysiology of malignant melanoma[J]. Biological Chemistry， 2018.

[37]Trachootham D， Alexandre J P. Targeting cancer cells by ROS-mediated mechanisms： a radical therapeutic approach[J]. Nature Reviews Drug Discovery， 2009， 8（7）： 579-591.

（收稿日期：2019-01-10 編輯：劉斌）