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        吊蘭屬植物Chlorophytum tuberosum的化學(xué)成分及其對(duì)血小板聚集的作用*

        2019-06-27 09:43:34付愛珍王曉明
        關(guān)鍵詞:糖鏈皂苷元試劑

        謝 燕 ,付愛珍 ,李 楠 ,張 晗 ,王曉明 ,張 鵬

        (1.天津中醫(yī)藥大學(xué)天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 301617;2.棗莊礦業(yè)集團(tuán)中心醫(yī)院,棗莊 277000)

        Chlorophytum tuberosum為百合科吊蘭屬一年生草本植物,花期或結(jié)果期間采集全草,在印度和非洲均作傳統(tǒng)藥用,具有抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、促進(jìn)性欲、治療痢疾和催乳等作用[1-2]。對(duì)該植物的現(xiàn)代藥理及化學(xué)成分研究尚未見報(bào)道,其同屬植物在中國(guó)共有5種作為藥用植物[3],民間用于清熱解毒、消腫止痛,主要藥理活性為鎮(zhèn)痛抗炎[4]、抗腫瘤[5]等。從吊蘭屬植物中分離鑒定的主要活性成分為甾體皂苷類化合物,是多種心腦血管中成藥如地奧心血康、心腦舒通的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。不同結(jié)構(gòu)的甾體皂苷類化合物對(duì)血小板聚集有雙向調(diào)節(jié)作用,如蒺藜總皂苷有顯著的抗血小板聚集作用[6-8],而重樓總皂苷則具有止血作用,在體外能直接誘導(dǎo)血小板聚集[9-12]。為了闡明Chlorophytum tuberosum的化學(xué)成分和藥理作用,本文對(duì)該植物50%乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行分離和結(jié)構(gòu)鑒定,并測(cè)試了其不同極性洗脫物及化合物對(duì)血小板聚集的影響。

        1 儀器材料

        傅里葉變換核磁共振波譜儀(瑞士Bruker公司,AVIII型);Agilent 1260制備型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent科技有限公司);分析型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent科技有限公司);超高效液相色譜儀(美國(guó) Waters);分析色譜柱(美國(guó) Agilent,5 μm,4.6 nm×150 nm);半制備型色譜柱(日本YMCPack,10 μm×250 mm,5 μm);制備型色譜柱(美國(guó)Agilent,21.2 mm×250 mm,7 μm);Sephadex LH-20(GE Healthcare公司);柱色譜和薄層層析色譜硅膠(青島海洋化工廠);D101大孔吸附樹脂(天津海光化工有限公司);Flexstation 3酶標(biāo)儀(Molecular Device);96 孔酶標(biāo)板。

        色譜乙腈和甲醇(天津市大茂化學(xué)試劑生產(chǎn)廠);氘代試劑(美國(guó) Cambrige Isotope Laboratories,Inc);阿司匹林和ADP(美國(guó)Sigma-Aldrich公司);其他所用試劑均為分析純。

        緩沖溶液(pH 7.4)配制:NaCl(130 mmol/L)、檸檬酸鈉(10 mmol/L)、NaHCO3(9 mmol/L)、葡萄糖(6 mmol/L)、MgCl2(9 mmol/L)、KH2PO4(0.81 mmol/L)、Tris-base(10 mmol/L)。

        Chlorophytum tuberosum全草由本校國(guó)際學(xué)院非洲留學(xué)生Abdulai Jawo Bah提供并經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)吳紅華老師鑒定為百合科吊蘭屬植物Chlorophytum tuberosum。

        2 提取與分離

        Chlorophytum tuberosum全草1.5 kg,用8倍量50%乙醇回流提取3次,每次2 h,合并提取液,減壓濃縮至無醇味,濃縮液加蒸餾水稀釋,過濾,經(jīng)D101大孔吸附樹脂柱分離,依次用H2O和30%、50%、70%、95% 乙醇洗脫(v/v),減壓濃縮,得到 P 1~5共5個(gè)洗脫物。P 3(20 g)經(jīng)ODS中低壓柱色譜(50%乙腈-水洗脫)和LH-20凝膠柱后經(jīng)薄層檢識(shí)合并成分相同的流份,再經(jīng)薄層制備得到化合物9(17 mg);P 4(2.7 g)經(jīng) ODS 中低壓柱色譜(乙腈-水梯度洗脫)得3個(gè)組分Fr 4.1~Fr 4.3,將Fr 4.1經(jīng)硅膠柱色譜分離(CH2Cl2∶MeOH∶H2O=6.2∶2.8∶1),得化合物 8(8 mg)和 4(7 mg),F(xiàn)r 4.2 經(jīng)反向高效制備液相和硅膠柱色譜(CH2Cl2∶MeOH∶H2O=6.2∶2.8∶1),薄層色譜檢識(shí)后得化合物 5(20 mg)、6(10 mg)和 7(10 mg),F(xiàn)r 4.3經(jīng)硅膠柱色譜,石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫得化合物 11(3 mg);P 5(1.4 g)經(jīng)反復(fù)凝膠和硅膠柱色譜后,得組分Fr 5.1和Fr 5.2,F(xiàn)r 5.1經(jīng)反向高效制備液相,乙腈-水梯度洗脫,得到化合物2(3 mg)、1(7 mg)和 3(6 mg),F(xiàn)r 5.2 經(jīng)硅膠柱色譜石油醚-乙酸乙酯洗脫,得化合物10(4 mg)。

        稱取化合物1 mg溶于10 mL三氟乙酸水溶液(2 mol/L)中,95℃水浴回流3 h,室溫放置冷卻,用二氯甲烷10 mL萃取3次,合并后回收二氯甲烷,得到化合物苷元部分,與相應(yīng)的苷元共薄層,確定苷元的結(jié)構(gòu);水層回收后,用18 cm圓形濾紙進(jìn)行紙層析實(shí)驗(yàn),以標(biāo)準(zhǔn)糖對(duì)照確定糖的種類。展開劑為正丁醇-冰乙酸-水(4∶1∶5),顯色劑為苯胺-二苯胺-磷酸。

        3 結(jié)構(gòu)鑒定

        化合物4:白色粉末,10%硫酸-乙醇顯黃色,A試劑顯黃色。ESI-MS顯示分子中含有4個(gè)六碳糖m/z:1 077.67[M-H]-,1 079.51[M+H]+,431.16[M+H-162-162-162-162]+.1H-NMR (C5D5N,400 MHz)δ 0.64(3H,s),1.06(3H,s),1.06(3H,d,J=4.4 Hz),1.36(3H,d,J=6.8 Hz),2.73(1H,t,J=6.8 Hz),3.36(1H,br d,J=10.8 Hz),2.21 (1H,dd,J=14.4,4.4 Hz),2.35(1H,t,J=13.6 Hz),4.86(1H,J=7.6 Hz),5.15(1H,J=8 Hz),5.30(1H,J=8 Hz),5.59(1H,J=7.6 Hz)。13CNMR(C5D5N,100 MHz)δ 36.5(C-1),29.6(C-2),76.9(C-3),34.5(C-4),44.3(C-5),28.5(C-6),31.3(C-7),34.2(C-8),55.4(C-9),36.2(C-10),37.9(C-11),212.7(C-12),55.2(C-13),55.8(C-14),31.6(C-15),79.7(C-16),54.1(C-17),16.0(C-18),11.6(C-19),43.0(C-20),13.7(C-21),109.7(C-22),27.4(C-23),26.3(C-24),26.1(C-25),65.1(C-26),16.2(C-27),以上苷元數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的新??略碥赵獢?shù)據(jù)一致,并經(jīng)酸水解實(shí)驗(yàn)證明,鑒定苷元為新??略碥赵K崴鈱?shí)驗(yàn)證明了糖鏈中糖的組成為β-D-葡萄糖與β-D-半乳糖,糖鏈核磁數(shù)據(jù)為:Gal 102.3(C-1′),73.1(C-2′),75.5(C-3′),80.2(C-4′),75.2(C-5′),60.5(C-6′),Glc 105.0(C-1″),81.4(C-2″),88.5(C-3″),70.8(C-4″),77.5(C-5″),63.0(C-6″),Glc 104.8(C-1″′),76.1(C-2″′),77.8(C-3″′),70.9(C-4″′),78.6(C-5″′),62.2(C-6″′),Glc 104.5(C-1″″),75.2(C-2″″),78.6(C-3″″),71.5(C-4″″),78.6(C-5″″),62.2(C-6″″),根據(jù) HMBC 譜遠(yuǎn)程相關(guān)(見圖1),結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù),推測(cè)了糖鏈部分的連接位點(diǎn),其數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]糖鏈部分的數(shù)據(jù)一致。綜合以上數(shù)據(jù),鑒定化合物4結(jié)構(gòu)為(25S)-3β-羥基-5α-螺甾-12酮-3-O-β-D-葡萄糖-(1→2)-[β-D-葡萄糖-(1→3)]-β-D-葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷。

        化合物5:白色粉末,10%硫酸-乙醇顯紫灰色,A試劑顯黃色,ESI-MS顯示分子中含有4個(gè)六碳糖 m/z 1 081.88[M+H]+。1H-NMR(C5D5N,400 MHz)δ 0.77(3H,s),0.65(3H,s),1.10(3H,d,J=6.6 Hz),1.04(3H,d,J=7.2 Hz),0.76(3H),0.65(3H),3.33(1H,br d,J=10.2 Hz),4.87(1H,d,J=7.8 Hz),5.12(1H,d,J=7.8 Hz),5.25(1H,d,J=7.8 Hz),5.53(1H,d,J=7.2 Hz)。13C-NMR(C5D5N,100 MHz)δ 45.4(C-1),72.4(C-2),84.0(C-3),34.0(C-4),44.5(C-5),27.9(C-6),31.9(C-7),34.4(C-8),54.2(C-9),36.7(C-10),21.3(C-11),39.9(C-12),40.6(C-13),56.1(C-14),32.1(C-15),81.0(C-16),62.6(C-17),16.5(C-18),13.2(C-19),42.3(C-20),14.7(C-21),109.6(C-22),27.4(C-23),26.0(C-24),26.2(C-25),64.9(C-26),16.2(C-27),以上苷元數(shù)據(jù)及酸水解實(shí)驗(yàn)證明,其苷元為新替告皂苷元,糖鏈中糖的組成為β-D-葡萄糖與β-D-半乳糖,糖鏈核磁數(shù)據(jù)為:Gal 103.0(C-1′),71.1(C-2′),75.3(C-3′),79.6(C-4′),75.8(C-5′),60.5(C-6′),Glc 104.3(C-1″),81.1(C-2″),88.4(C-3″),71.4(C-4″),77.3(C-5″),62.3(C-6″),Glc 105.1(C-1″′),75.3(C-2″′),78.2(C-3″′),70.3(C-4″′),78.4(C-5″′),62.1(C-6″′),Glc 104.7(C-1″″),75.5(C-2″″),78.4(C-3″″),70.6(C-4″″),78.4(C-5″″),62.8(C-6″″)。綜合以上數(shù)據(jù)及 HMBC 遠(yuǎn)程相關(guān)(圖1),推測(cè)了糖鏈部分的連接位點(diǎn),其數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致,鑒定化合物5的結(jié)構(gòu)為新替告皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖-(1→2)-[β-D-葡萄糖-(1→3)]-β-D-葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷。

        化合物6:白色粉末,10%硫酸-乙醇顯紫灰色,A 試劑顯黃色,ESI-MS m/z 112 5.73[M+HCOO]-。1HNMR(C5D5N,400 MHz)δ 0.76(3H,s),0.64(3H,s),1.11(3H,d,J=6.6 Hz),1.05(3H,d,J=7.2 Hz),0.76(3H),0.65(3H),3.33(1H,br d,J=10.2 Hz),4.89(1H,d,J=7.2 Hz),5.08(1H,d,J=7.8 Hz),5.16(1H,d,J=7.8 Hz),5.46(1H,d,J=7.8 Hz)。13C-NMR(C5D5N,100 MHz)δ 45.4(C-1),72.4(C-2),83.9(C-3),33.9(C-4),44.4(C-5),27.9(C-6),31.9(C-7),34.4(C-8),54.2(C-9),36.7(C-10),21.3(C-11),39.9(C-12),40.6(C-13),56.1(C-14),32.1(C-15),81.0(C-16),62.6(C-17),16.5(C-18),13.2(C-19),42.3(C-20),14.7(C-21),109.6(C-22),27.4(C-23),26.0(C-24),26.2(C-25),64.9(C-26),16.2(C-27);以上苷元數(shù)據(jù)及酸水解實(shí)驗(yàn)證明,鑒定苷元為新替告皂苷元,酸水解證明糖鏈中糖的組成為β-D-葡萄糖與β-D-半乳糖,糖鏈核磁數(shù)據(jù)為:Gal 102.9(C-1′),71.1(C-2′),75.3(C-3′),79.6(C-4′),75.8(C-5′),60.4(C-6′),Glc 104.9(C-1″),75.3(C-2″),78.2(C-3″),70.3(C-4″),78.4(C-5″),62.1(C-6″),Glc 104.2(C-1″′),81.0(C-2″′),70.6(C-3″′),87.3(C-4″′),77.3(C-5″′),62.4(C-6″′),Glc 104.6(C-1″″),76.9(C-2″″),78.0(C-3″″),71.4(C-4″″),78.4(C-5″″),62.8(C-6″″)。HMBC譜遠(yuǎn)程相關(guān)推測(cè)糖鏈部分的連接位點(diǎn)為 β-D-葡萄糖-(1→2)-[β-D-葡萄糖-(1→4)]-β-D-葡萄糖-(1→4)-β-D-半乳糖。綜合1HNMR、13C-NMR、HMBC、HSQC、TOCSY、LC-MS 并與文獻(xiàn)[12]碳譜數(shù)據(jù)比對(duì),鑒定化合物6的結(jié)構(gòu)為新替告皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖-(1→2)-[β-D-葡萄糖-(1→4)]-β-D-葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷。

        圖1 化合物4和5的結(jié)構(gòu)及HMBC相關(guān)信號(hào)

        化合物1:白色針狀晶體,10%硫酸-乙醇顯紫色,A試劑顯黃色,E試劑顯紅色。ESI-MS m/z:433.13[M+H]+,414.97[M+H-H2O]+,477.07[M+HCOO]-。1H-NMR(C5D5N,600 MHz)δ 0.82(3H,s),0.85(3H,s),1.06(3H,d,J=7.2 Hz),1.13(3H,d,J=6.6 Hz),2.01(1H,ddd,J=17.4,12.6,6 Hz),2.12(1H,tt,J=18 Hz,13.2 Hz,9 Hz,4.2 Hz),2.25(1H,dd,J=12.6,4.8 Hz),3.35(1H,br d,J=11.4 Hz),3.85(1H,m),4.05(2H,m),4.51(1H,m,H-16)。13C-NMR(C5D5N,100 MHz)δ 45.1(C-1),73.0(C-2),76.6(C-3),37.0(C-4),46.4(C-5),28.2(C-6),32.0(C-7),34.6(C-8),54.5(C-9),37.1(C-10),21.4(C-11),39.9(C-12),40.1(C-13),56.3(C-14),32.1(C-15),81.1(C-16),62.7(C-17),16.6(C-18),13.6(C-19),42.4(C-20),14.8(C-21),109.6(C-22),27.5(C-23),26.1(C-24),26.3(C-25),65.0(C-26),16.2(C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致,鑒定化合物1為新替告皂苷元。

        化合物2:白色粉末,10%硫酸-乙醇顯黃色,A試劑顯黃色,E試劑顯紅色。ESI-MS m/z:446.95[M+H]+,428.97[M+H-H2O]+,490.94[M+HCOO]-。1H-NMR(C5D5N,400 MHz)δ 0.89(3H,s),1.10(3H,s),1.08(3H,d,J=8 Hz),1.38(3H,d,J=7 Hz),2.76(1H,dd,J=8.4,6.8 Hz),3.38(1H,d,J=7 Hz),3.84(1H,m),4.00(2H,m),4.07(2H,m),4.47(1H,m)。13C-NMR(C5D5N,100 MHz)δ 46.1(C-1),72.9(C-2),76.6(C-3),37.2(C-4),45.2(C-5),28.2(C-6),31.6(C-7),33.9(C-8),55.5(C-9),38.1(C-10),38.4(C-11),212.8(C-12),55.8(C-13),56.0(C-14),31.9(C-15),79.9(C-16),54.3(C-17),16.3(C-18),13.3(C-19),43.3(C-20),13.9(C-21),109.9(C-22),27.7(C-23),26.3(C-24),26.5(C-25),65.3(C-26),16.4(C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致,鑒定化合物2為(25S)-曼諾皂苷元。

        化合物3:白色粉末,10%硫酸-乙醇顯黃色,A試劑顯黃色,E試劑顯紅色。ESI-MS m/z:430.95[M+H]+,412.99[M+H-H2O]+,475.07[M+HCOO]-.1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 0.90(3H,s),1.04(3H,s),1.07(3H,d,J=6.8 Hz),1.08(3H,d,J=6.8 Hz),2.22(1H,dd,J=14.4,4.8 Hz),2.40(1H,br t,J=14 Hz),2.50(1H,dd,J=8.8,6.8 Hz),3.31(1H,d,J=10.8 Hz),3.92(1H,dd,J=10.8,2.4 Hz),3.59(1H,m),4.34(1H,m)。13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ 36.6(C-1),31.2(C-2),71.1(C-3),38.0(C-4),44.8(C-5),28.4(C-6),31.4(C-7),34.5(C-8),55.7(C-9),36.2(C-10),38.0(C-11),213.8(C-12),55.2(C-13),55.9(C-14),31.7(C-15),79.4(C-16),53.5(C-17),16.2(C-18),12.1(C-19),42.8(C-20),13.2(C-21),109.9(C-22),26.1(C-23),25.9(C-24),27.2(C-25),65.3(C-26),16.2(C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致,鑒定化合物3為新海柯皂苷元。

        化合物7:白色粉末,10%硫酸-乙醇顯紫灰色,A 試劑顯黃色。ESI-MS m/z:1 051.84[M+H]+,1 095.67[M+HCOO]-。1H-NMR(C5D5N,400 MHz)δ 1.12(3H,d,J=6.7 Hz),1.06(3H,d,J=6.8 Hz),0.77(3H),0.67(3H),2.11(1H,tt,J=13.2 Hz),2.17(1H,dd,J=12.8,4.4 Hz),3.35(1H,br d,J=10.8 Hz),3.61(1H,m),4.91(1H,d,J=7.6 Hz),4.95(1H,d,J=8 Hz),5.10(1H,d,J=7.6 Hz),5.21(2H,m),5.50(1H,d,J=8 Hz),5.58(1H,d,J=8 Hz)。13C-NMR(C5D5N,100 MHz)δ 45.5(C-1),72.5(C-2),84.1(C-3),34.1(C-4),44.5(C-5),28.0(C-6),32.0(C-7),34.5(C-8),54.2(C-9),36.8(C-10),21.3(C-11),39.9(C-12),40.6(C-13),56.2(C-14),32.1(C-15),81.1(C-16),62.7(C-17),16.5(C-18),13.3(C-19),42.4(C-20),14.8(C-21),109.6(C-22),27.4(C-23),26.1(C-24),26.3(C-25),65.0(C-26),16.2(C-27),Gal 103.2(C-1′),71.3(C-2′),75.4(C-3′),79.3(C-4′),76.0(C-5′),60.4(C-6′),Glc 104.9(C-1″),81.2(C-2″),86.9(C-3″),70.3(C-4″),77.2(C-5″),62.5(C-6″),Glc 104.7(C-1″′),74.9(C-2″′),78.6(C-3″′),70.7(C-4″′),77.5(C-5″′),62.6(C-6″′),Xyl 104.6(C-1″″),75.0(C-2″″),78.4(C-3″″),70.4(C-4″″),67.2(C-5″″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致,鑒定化合物7為新吉托皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖-(1→2)-[β-D-木糖-(1→3)]-β-D-葡萄糖-(1→4)-β-D-半乳糖苷。

        化合物8:白色粉末,10%硫酸-乙醇顯黃色,A試劑顯黃色。ESI-MS m/z:1 165.54[M+H]+,1 209.52[M+HCOO]-。1H-NMR(C5D5N,400 MHz)δ 0.86(3H,s),1.06(3H,s),1.06(3H,d,J=5.6 Hz),1.35(3H,d,J=6.8 Hz),1.70(3H,d,J=5.6 Hz),2.39(1H,m),2.67(1H,dd,J=5.2,8.8 Hz),2.72(1H,m),3.36(1H,br d,J=11.2 Hz),4.81(1H,d,J=7.6 Hz),4.95(1H,d,J=8 Hz),5.20(1H,d,J=7.6 Hz),5.33(1H,d,J=8 Hz),5.35(1H,br s)。13C-NMR(C5D5N,100 MHz)δ 36.7(C-1),29.7(C-2),76.9(C-3),34.3(C-4),44.5(C-5),28.7(C-6),31.4(C-7),34.4(C-8),55.6(C-9),36.4(C-10),38.0(C-11),212.7(C-12),55.4(C-13),56.0(C-14),31.8(C-15),79.8(C-16),54.2(C-17),16.3(C-18),11.9(C-19),43.1(C-20),13.7(C-21),109.8(C-22),26.4(C-23),26.2(C-24),27.5(C-25),65.2(C-26),16.0(C-27),Gal 100.2(C-1′),77.4(C-2′),76.2(C-3′),81.4(C-4′),75.1(C-5′),60.4(C-6′),Glc 105.4(C-1″),81.5(C-2″),88.0(C-3″),70.4(C-4″),77.6(C-5″),62.9(C-6″),Rha 101.6(C-1″′),72.3(C-2″′),72.7(C-3″′),74.0(C-4″′),69.5(C-5″′),18.4(C-6″′),Xyl 105.0(C-1″″),75.1(C-2″″),78.7(C-3″″),70.7(C-4″″),67.3(C-5″″),Ara 105.7(C-1″″′),73.2(C-2″″′),74.7(C-3″″′),69.7(C-4″″′),67.3(C-5″″′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致,鑒定化合物8為大葉吊蘭苷C。

        化合物9:白色粉末,E試劑顯紅色。ESI-MSm/z:1 327.53[M+H-H2O]+,1 343.33[M-H]-。1H-NMR(C5D5N,400 MHz)δ 0.87(3H,s),1.11(3H,s),1.01(3H,d,J=6.8 Hz),1.52(3H,d,J=6.4 Hz),1.71(3H,d,J=6 Hz),2.19-2.26(3H,m),2.41(1H,m),2.88(1H,t,J=7.6 Hz),3.48(1H,dd,J=6.8,9.2 Hz),4.95(1H,d,J=8 Hz),5.04(1H,d,J=7.6 Hz),5.20(1H,d,J=8 Hz),5.34(1H,d,J=7.2 Hz),5.42(1H,d,J=8 Hz),6.30(1H,br s)。13C-NMR(C5D5N,100 MHz)δ 36.9(C-1),29.9(C-2),77.2(C-3),34.3(C-4),44.3(C-5),28.5(C-6),31.6(C-7),34.2(C-8),55.6(C-9),36.3(C-10),37.9(C-11),213.0(C-12),55.5(C-13),55.7(C-14),31.6(C-15),79.6(C-16),54.9(C-17),16.1(C-18),11.7(C-19),41.2(C-20),15.1(C-21),110.6(C-22),31.6(C-23),28.2(C-24),34.1(C-25),75.2(C-26),17.3(C-27),3-O-Gal 100.0(C-1′),76.6(C-2′),76.1(C-3′),79.6(C-4′),75.1(C-5′),60.3(C-6′),Glc 105.3(C-1″),81.4(C-2″),87.8(C-3″),70.2(C-4″),77.6(C-5″),62.8(C-6″),Rha 101.6(C-1″′),72.3(C-2″′),72.6(C-3″′),73.9(C-4″′),69.6(C-5″′),18.4(C-6″′),Xyl 104.8(C-1″″),74.6(C-2″″),78.5(C-3″″),70.6(C-4″″),67.2(C-5″″),Ara 105.7(C-1″″′),73.1(C-2″″′),74.4(C-3″″′),69.5(C-4″″′),67.5(C-5″″′),26-O-Glc 105.0(C-1′),75.0(C-2′),78.6(C-3′),71.6(C-4′),78.4(C-5′),62.7(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致,鑒定化合物9為大葉吊蘭苷E。

        化合物10:白色針狀結(jié)晶,易溶于二氯甲烷,10%硫酸-乙醇顯色呈紫紅色。石油醚-乙酸乙酯(5∶1)為展開劑,與β-谷甾醇對(duì)照品共薄層,Rf值及顯色情況均相同。鑒定化合物10為β-谷甾醇。

        化合物11:白色無定型粉末,易溶于二氯甲烷,10%硫酸-乙醇顯色呈紫紅色。二氯甲烷-甲醇(15∶1)為展開劑,與胡蘿卜苷對(duì)照品共薄層,Rf值及顯色情況均相同。鑒定化合物11為胡蘿卜苷。

        4 血小板聚集實(shí)驗(yàn)

        4.1 方法 SD大鼠稱體質(zhì)量,10%水合氯醛麻醉(0.5 mL/100 g),腹主動(dòng)脈取血后室溫下離心10 min(200×g);取上清,離心 10 min(800×g),棄去上清,加緩沖溶液將沉淀混勻,得到血小板懸濁液,血小板數(shù)調(diào)整為約5×108個(gè)/mL。加100 μL血小板混懸液至96孔酶標(biāo)板,每孔加入CaCl2溶液1~2 μL(0.9~1.8 mmol/L),F(xiàn)lexstation 3 酶標(biāo)儀在 405 nm 處測(cè)A值。陽性組加入50 μL阿司匹林,陰性組和對(duì)照組加入50 μL緩沖溶液,實(shí)驗(yàn)組加入50 μL測(cè)試樣品溶液,于37℃持續(xù)震動(dòng)孵育10 min,實(shí)驗(yàn)組和陽性組、陰性組加入 20 μmol/L 的 ADP 各 50 μL,進(jìn)一步激活血小板[14],對(duì)照組加50 μL緩沖溶液。37℃下每45 s讀數(shù)1次,至A值不再變化,得A值隨時(shí)間變化的動(dòng)力學(xué)曲線:1)血小板聚集率%=(At=0-At)/At=0×100%;2)藥物對(duì)血小板聚集的抑制率%=(陰性組最大聚集率-對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)組聚集率)/陰性組最大聚集率×100%。

        4.2 結(jié)果 Chlorophytum tuberosum 50%乙醇提取物及經(jīng)大孔樹脂柱層析得到的5個(gè)極性部位P 1~5(見第2部分)。以阿司匹林為陽性對(duì)照,ADP為激動(dòng)劑,在100 μg/ml(95%乙醇洗脫物為50 μg/mL)的測(cè)試濃度下,95%乙醇洗脫物對(duì)血小板聚集抑制活性最強(qiáng),30%乙醇洗脫物具有較弱的血小板聚集抑制活性,其他組分及受試化合物對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集幾乎無影響。在不加ADP的情況下,測(cè)試了不同極性部位及部分化合物誘導(dǎo)血小板聚集的活性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明70%乙醇洗脫物有中等強(qiáng)度的誘導(dǎo)血小板聚集的活性;化合物7具有顯著的誘導(dǎo)血小板聚集活性,化合物6有中等強(qiáng)度的誘導(dǎo)血小板聚集活性。各極性部位及化合物對(duì)血小板聚集活性的影響見表1。

        表1 各組分及化合物對(duì)血小板聚集活性的影響

        5 討論

        對(duì)Chlorophytum tuberosum 50%乙醇提取物中的化學(xué)成分及不同極性部位和單體化合物進(jìn)行了血小板聚集活性研究,共分離得到11個(gè)化合物,化合物2(25S)-曼諾皂苷元為百合科首次分離,化合物1新替告皂苷元為吊蘭屬首次分離,并通過血小板聚集實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),同一植物不同極性部位及單體化合物對(duì)血小板聚集活性作用不同,值得進(jìn)一步研究其化學(xué)成分與藥效之間的關(guān)系,為該植物開發(fā)研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)。

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