宋賢超

（商丘市第四人民醫(yī)院普外科，河南 商丘 476000）

乙型肝炎肝硬化失代償期是慢性乙型肝炎、肝纖維化發(fā)展的最終結(jié)局之一[1]。研究顯示，3%的乙型肝炎患者出現(xiàn)失代償期肝硬化，疾病進(jìn)一步惡化可發(fā)展為原發(fā)性肝癌，5年生存率只有30%左右[2]。所以早診斷早治療，抑制病情進(jìn)展對(duì)于改善肝硬化失代償期患者的預(yù)后質(zhì)量有重要價(jià)值。miR-143、miR-145、AFP以及AFP-L3是臨床上常用的肝硬化診斷指標(biāo)。本研究比較慢性乙肝肝硬化失代償期患者與慢性乙肝患者miR-143、miR-145、AFP、AFP-L3的表達(dá)水平，為慢性乙肝肝硬化失代償期患者的臨床診斷提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年2月—2017年2月我院收治的慢性乙肝肝硬化失代償期患者30例為研究組，選取同期收治的慢性乙肝患者30例為對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合《實(shí)用醫(yī)學(xué)》中肝硬化失代償期的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，并根據(jù)臨床表現(xiàn)等確診；HBeAg陽(yáng)性患者HBV DNA≥105拷貝/mL，HBeAg陰性患者HBV DNA≥104拷貝/mL；所有病例符合Child-Pugh分級(jí)B級(jí)和C級(jí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤患者；合并自身免疫系統(tǒng)疾病患者；妊娠或哺乳期患者。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)miR-143、miR-145無(wú)菌操作下分別抽取兩組患者靜脈血3 mL，離心處理之后分離血清，應(yīng)用微量離心管儲(chǔ)存，常溫條件下持續(xù)水浴3 min之后，取200 μL，根據(jù)miR RNA試劑盒說(shuō)明書(shū)完成提取。根據(jù)miRNAcDNA第一鏈合成試劑盒（KR211）說(shuō)明書(shū)要求，將提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。反轉(zhuǎn)錄體系的配制：解凍2×miRNA RT Reaction Bu ff er并混勻，miRNA RT Enzyme Mix放于冰中備用，在冰上預(yù)冷RNaseFree的反應(yīng)管內(nèi)加入 2×miRNA RT Reaction Bu ff er 10 μL、miRNA RT EnzymeMix 2 μL 至總體積 20 μL（最后加入 miRNA RT Enzyme Mix）。重復(fù)進(jìn)行3次實(shí)驗(yàn)，反應(yīng)完成之后分析PCR曲線，計(jì)算miR-143、miR-145值[4]。

1.2.2 AFP以及AFP-L3檢測(cè)方法AFP-L3檢測(cè)應(yīng)用吸附離心管法，其中試劑為熱景生物公司生產(chǎn)。AFP檢測(cè)應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法，儀器為雅培公司生產(chǎn)，試劑為儀器配套試劑盒[5]。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平比較

研究組miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平比較

3 討論

乙型肝炎肝硬化失代償期的并發(fā)癥比較多，預(yù)后質(zhì)量較差，病死率居高不下，給患者的生命健康以及生活質(zhì)量帶來(lái)嚴(yán)重不良影響[6]。失代償期的患者長(zhǎng)期使用NUC治療能夠有效改善患者的血清學(xué)狀況以及病毒學(xué)狀況，從而避免患者出現(xiàn)失代償期并發(fā)癥例如肝性腦病以及肝細(xì)胞癌等。但HBV閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）無(wú)法得到完全清除，因此乙肝肝硬化失代償期的患者需要長(zhǎng)期堅(jiān)持進(jìn)行抗病毒治療。在臨床治療的過(guò)程當(dāng)中，一方面需要規(guī)范化進(jìn)行抗病毒治療，另一方面還需要遵循個(gè)體化的原則，根據(jù)患者的經(jīng)濟(jì)條件、病情狀況、不良反應(yīng)、藥物特點(diǎn)以及治療依從性等，合理選擇治療方案以及治療時(shí)機(jī)，同時(shí)全程對(duì)患者的抗病毒治療加強(qiáng)管理，從而獲得最為理想的治療效果。這就需要準(zhǔn)確診斷從而為抗病毒治療提供指導(dǎo)。

微小RNA(miRNA)是一種單鏈RNA，長(zhǎng)約為20個(gè)左右核糖核苷酸。少數(shù)miRNA同腫瘤疾病的出現(xiàn)存在密不可分的聯(lián)系。傳統(tǒng)上研究人員分析惡性腫瘤組織內(nèi)部miRNA的時(shí)候，需要使用病理組織切片，隨著技術(shù)的進(jìn)步，研究人員發(fā)現(xiàn)血清中也存在miRNA，且腫瘤血清當(dāng)中miRNA含量同健康人群存在明顯差異，可作為特異性腫瘤標(biāo)記物[7]。也有研究人員認(rèn)為miR-143、miR-145表達(dá)在慢性乙肝患者當(dāng)中明顯下調(diào)，同時(shí)在乙肝肝硬化標(biāo)本當(dāng)中明顯上調(diào)[8]。本研究結(jié)果顯示，肝硬化失代償期患者的miR-143、miR-145水平均顯著高于慢性乙肝患者（P＜0.05），說(shuō)明miR-143、miR-145水平同患者病情存在顯著相關(guān)性，這是因?yàn)橐腋胃斡不Т鷥斊诨颊吒渭?xì)胞HBV存在持續(xù)復(fù)制傾向，同時(shí)肝臟結(jié)構(gòu)中腫瘤細(xì)胞數(shù)量明顯增多，導(dǎo)致miR-143、miR-145水平上升[9-10]。

甲胎蛋白（AFP）是臨床上常用的一種血清學(xué)標(biāo)志物，研究人員普遍認(rèn)為血清AFP水平同肝臟疾病存在著密不可分的聯(lián)系，正常肝組織當(dāng)中的肝細(xì)胞AFP水平比較低甚至完全檢測(cè)不出，但是在肝硬化患者組織以及肝炎患者組織當(dāng)中，AFP含量水平上升異常明顯，同時(shí)在肝癌組織當(dāng)中上升的幅度最高。但AFP在早期肝硬化失代償期患者診斷中靈敏度較低，只有50%左右的患者呈現(xiàn)AFP陽(yáng)性。通常情況下，AFP作為肝硬化失代償期患者早期診斷的血清學(xué)標(biāo)志之一，敏感度為40%左右，特異度為80%左右[11]，所以單純借助于AFP用來(lái)監(jiān)測(cè)預(yù)警肝硬化失代償期存在著一定程度的限制。上世紀(jì)七十年代，研究人員借助于凝膠電泳分離得到AFP異質(zhì)體，后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)AFP-L3超過(guò)10%同肝硬化失代償期患者存在顯著相關(guān)性，可作為早期診斷的重要標(biāo)志物，因此AFP-L3檢測(cè)對(duì)于肝硬化失代償期患者的早期診斷有重要的價(jià)值。本研究結(jié)果顯示，研究組AFP和AFP-L3水平均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。說(shuō)明慢性乙肝肝硬化失代償期患者的AFP、AFP-L3水平高于慢性乙肝患者，可作為檢測(cè)疾病進(jìn)展的標(biāo)志物。

綜上所述，肝硬化失代償期患者的血清miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平顯著上升，積極采取治療措施，有利于改善患者預(yù)后質(zhì)量。