李正義，李穎毅，羅 成，袁文兵

(寶雞市人民醫(yī)院 泌尿外科，陜西 寶雞721000)

前列腺癌( prostate cancer，PCa)是歐美國家最常見的惡性腫瘤之一，同時也是我國中老年男性較為常見的泌尿系統(tǒng)腫瘤，其發(fā)病率逐年升高。因此對前列腺癌疾病的發(fā)生、治療和預(yù)后的研究具有重要的意義。本研究主要采用免疫組化技術(shù)對PCa組織中p27和bcl-2蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行系統(tǒng)分析，探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源收集2010.07-2016.10陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除前列腺癌組織及穿刺前列腺癌組織標(biāo)本30例，年齡54-87歲，中位年齡73歲，患者術(shù)前未接受其他方式治療。按照2003年WHO標(biāo)準(zhǔn)，高分化前列腺腺癌13例，中、低分化前列腺腺癌17例。收集本院同期20例前列腺增生組織為對照組。

1.2 主要試劑p27抗體為美國Santa Cruz Biotechnology公司產(chǎn)品，bcl-2抗體為兔抗人單克隆抗體，二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG；抗體和免疫組化試劑盒均購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)法本次所進(jìn)行的免疫組化均采用SP方法，大致的操作步驟如下：脫蠟后水化，開始抗原修復(fù)，通過過氧化物酶阻斷后分別孵育一抗和二抗，顯色試劑為二氨基聯(lián)苯胺(DAB)，最后經(jīng)復(fù)染、脫水、透明和封片后顯微鏡下觀察結(jié)果。PBS替代一抗作空白對照。

1.4 結(jié)果評價主要根據(jù)各樣本陽性細(xì)胞占所有檢測細(xì)胞的比例。p27蛋白主要定位于細(xì)胞核內(nèi)，染色后為棕黃色，bcl-2則以細(xì)胞漿著棕色顆粒判讀為陽性，陽性細(xì)胞計數(shù)采用高倍鏡(×400)下隨機(jī)選取10個視野，計數(shù)陽性細(xì)胞所占比例的平均數(shù)(%)。若樣本無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞率小于10%時為陰性，陽性細(xì)胞率大于等于10%則為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)，計量數(shù)據(jù)通過χ2檢驗，P<0.05為組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

p27蛋白在前列腺癌組織中的陽性表達(dá)率(23.3%)顯著低于前列腺增生組織中的陽性表達(dá)率 (85.0%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。bcl-2蛋白前列腺癌組織中的陽性表達(dá)率為63.3%，明顯高于前列腺增生組織中10.0%的陽性表達(dá)率，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；p27在前列腺癌高分化組的陽性表達(dá)率(46.1%)顯著高于中低分化組(5.9%)(P<0.05)，bcl-2蛋白在前列腺癌高分化組的陽性表達(dá)率(38.5%)顯著低于中低分化組 (82.4%)(P<0.05)。

表1 前列腺癌組織中p27、bcl-2蛋白表達(dá)

注：P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 p27、bcl-2蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)

3 討論

細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子(CKI)包括KIP 家族和 INK4 家族蛋白，p27是前者的重要成員之一。已有的研究提示，p27生物學(xué)功能較為廣泛，主要在細(xì)胞周期過程參與的調(diào)控作用。正常細(xì)胞中，p27能夠通過抑制CDK的活性，負(fù)向調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的運(yùn)轉(zhuǎn)，同時也參與細(xì)胞分化過程中的調(diào)控作用[1,2]。p27作為細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控因子，能夠阻止細(xì)胞通過G1/S期的轉(zhuǎn)換過程中，起到“關(guān)卡”的作用，使得其能抑制細(xì)胞的增殖，從而細(xì)胞有機(jī)會修復(fù)細(xì)胞發(fā)育過程中受損的DNA。p27一般情況下被認(rèn)為是一種抑癌基因，主要通過直接與cDK或cyclin-cDK復(fù)合物結(jié)合，降低酶的活性，產(chǎn)生對細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控作用，從而使細(xì)胞周期會停滯在G1期，細(xì)胞停止發(fā)育[3]，Polya K[4]等的實驗表明p27在蛋白表達(dá)水平上與腫瘤的形成有關(guān)。p27與腫瘤的相關(guān)性可能并不表現(xiàn)為基因水平上的缺陷，而是通過蛋白表達(dá)水平的變化來起到關(guān)鍵的作用。近來已有研究表明，p27的蛋白表達(dá)水平與惡性腫瘤的惡性相關(guān)程度，侵襲性的強(qiáng)弱程度及預(yù)后效果明顯具有相關(guān)性，可以作為惡性腫瘤預(yù)后判斷的指標(biāo)。Tsihlias[5]等研究的113例前列腺癌均發(fā)現(xiàn)p27kipl蛋白的低表達(dá)與復(fù)發(fā)及預(yù)后有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)p27 蛋白在良性前列腺增生組織中陽性率明顯高于前列腺腺癌組織，p27蛋白陽性表達(dá)率在前列腺腺癌高分化組中顯著高于中低分化組，提示p27蛋白表達(dá)與前列腺腺癌發(fā)生發(fā)展及分化密切相關(guān)，p27蛋白表達(dá)下調(diào)能夠?qū)е录?xì)胞增生，從而無法實現(xiàn)有效的負(fù)反饋調(diào)控作用，最終促使前列腺正常組織發(fā)生嚴(yán)重的癌變。

bcl-2為最早發(fā)現(xiàn)的抑制細(xì)胞凋亡的基因，該基因的表達(dá)與細(xì)胞抵抗力密切相關(guān)，通過抑制組織細(xì)胞凋亡實現(xiàn)延長細(xì)胞壽命的現(xiàn)象[6]。國內(nèi)外研究表明，胃癌形成與bcl-2高表達(dá)相關(guān)[7，8]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞凋亡在惡性腫瘤發(fā)生過程特別是前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，如bcl-2作為調(diào)控凋亡的重要基因產(chǎn)物在該腫瘤的基礎(chǔ)研究中受到廣泛關(guān)注，介于其可以抑制多種組織的細(xì)胞凋亡，因此目前可作為公認(rèn)的抗凋亡基因[9]。本研究中， bcl-2在前列腺癌組織中陽性表達(dá)率為46.1%，明顯高于前列腺增生組織中的5.9%陽性表達(dá)，與先前文獻(xiàn)[10，11]報道基本一致，進(jìn)一步提示bcl-2參與前列腺癌的誘發(fā)過程。值得注意的是，在前列腺癌不同組別中，中低分化組的bcl-2陽性表達(dá)率達(dá)到82.4%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于高分化組38.2%陽性表達(dá)率，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，揭示bcl- 2 蛋白表達(dá)水平的變化與前列腺癌細(xì)胞的分化程度有關(guān)，即當(dāng)癌細(xì)胞分化差時，其表達(dá)明顯升高。因此，通過檢測bcl- 2蛋白表達(dá)水平，對臨床上對前列腺癌的診斷過程和預(yù)后評價具有一定參考價值。

目前，前列腺癌的發(fā)生機(jī)制尚不是十分明確。綜上所述，在前列腺癌和良性前列腺增生中p27和bcl- 2蛋白表達(dá)存在差異，二者可能存在協(xié)同作用。本研究結(jié)果顯示:p27 蛋白在良性前列腺增生組織中陽性表達(dá)率顯著高于前列腺腺癌組織，p27蛋白陽性表達(dá)率在前列腺癌高分化組中顯著高于中低分化組，提示p27蛋白表達(dá)與前列腺腺癌發(fā)生發(fā)展及分化密切相關(guān)；前列腺癌組織中bcl- 2表達(dá)較前列腺增生組織明顯升高，且隨腫瘤分化程度的降低呈上升趨勢。研究提示p27和bcl- 2兩種蛋白與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，檢查其表達(dá)水平對疾病診斷、治療和預(yù)后具有一定的參考意義。