孫立秋，王金蘭，趙 明，李 軍，王 丹，時(shí)志春，張樹軍

（齊齊哈爾大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾 161006）

丹參（Salvia miltiorrhiza Bge） 為唇形科多年生草本植物，主產(chǎn)于陜西、山東、山西、河南、河北等地[1]，以根入藥，具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩等功效[2]，是心腦血管病及多種炎癥的常用藥材。由于丹參地上部分約占全草的2/3，而且每年均可采收，有更豐富的資源，但丹參地上部分大多被遺棄，未得到有效利用，造成藥用資源的浪費(fèi)和生態(tài)環(huán)境的污染[3]。研究表明[4]，丹參地上部分含有豐富的丹酚酸類[5]、黃酮類[6]、三萜類等化學(xué)成分，具有較強(qiáng)的抗氧化[7]、降血糖等活性，并能有效改善腦梗塞、腦缺血等癥狀[8]，其中丹酚酸B和迷迭香酸等水溶性成分[9]在臨床上廣泛用于治療心血管系統(tǒng)疾病[10]。為了開發(fā)丹參地上部分藥用資源利用，采用H PLC法對(duì)丹參地上部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量進(jìn)行了分析評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1200型高效液相色譜儀，美國(guó)安捷倫公司產(chǎn)品；KQ3200D E型數(shù)控超聲波清洗器，昆山超聲儀器限公司產(chǎn)品；Sarturius BT 124S/BT 25S型電子天平。

丹參地上部分由密山市康華中藥材種植專業(yè)合作社提供的2017年8月8日采集品；甲醇及其他試劑均為色譜分析純；水為娃哈哈純凈水；對(duì)照品丹酚酸B（98.51%，M UTS-18040503），成都曼思特生物科技有限公司提供；迷迭香酸（＞97%，J1613019），阿拉丁試劑有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Eclipse X DB-C18型（4.6 mm×250 mm，5 m）；流動(dòng)相:甲醇（A） -0.8%冰乙酸水溶液 （B） 梯度洗脫 （0～3 min，30%A→31%A；3～53 min，31%A→35%A，53～65 min，35%A→40%A，V/V）；流速1 mL/min，進(jìn)樣量5μL，柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm。

1.2.2 丹酚酸B和迷迭香酸對(duì)照品溶液配制

精密稱取丹酚酸B和迷迭香酸對(duì)照品7.0 mg和6.0 mg，分別置于10 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解并稀釋至刻度，制得質(zhì)量濃度分別為0.70 mg/mL和0.60 mg/mL的對(duì)照品溶液。

1.2.3 供試品溶液配制

取干燥至恒質(zhì)量的丹參地上部分，精密稱取粉碎后的丹參地上部分粉末8.42 g，置于帶有回流冷凝器的250 mL圓底燒瓶中，每次加入80.0 mL甲醇，加熱回流1.5 h，回流提取3次，過濾后合并濾液濃縮至恒質(zhì)量，得丹參地上部分甲醇提取物。精密稱取上述醇提物，配制成質(zhì)量濃度為5 mg/mL的供試品溶液，用微孔濾膜（0.22μm）濾過，備用。

1.2.4 色譜分析

精密吸取供試品溶液、丹酚酸B和迷迭香酸對(duì)照品溶液各5μL，在“1.2.1”項(xiàng)的色譜條件下進(jìn)行分析，得供試品溶液色譜圖和丹酚酸B（D B）和迷迭香酸（M D）的混合對(duì)照品溶液色譜圖。

供試品溶液色譜圖見圖1，迷迭香酸（M D） 的混合對(duì)照品溶液色譜圖見圖2。

圖1 供試品溶液色譜圖

圖2 迷迭香酸（M D） 的混合對(duì)照品溶液色譜圖

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系及檢測(cè)限和定量限

精密移取丹酚酸B（0.70 mg/mL） 和迷迭香酸（0.60 mg/mL） 貯備液適量，分別用甲醇稀釋至質(zhì)量濃度為 14.0，35.0，70.0，140.0，700.0 μg/mL 和12.0，30.0，60.0，300.0，600.0 μg/mL 的對(duì)照品溶液，精密吸取上述溶液各5μL，進(jìn)行高效液相色譜分析，連續(xù)進(jìn)樣3次，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，所對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，分別對(duì)丹酚酸B和迷迭香酸的質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸分析，得回歸方程分別為Y=1 177.1X+26.851，R2=1.0；Y=1 468.9X+112.21，R2=0.999 3。表明丹酚酸B的質(zhì)量濃度14.0～700μg/mL，迷迭香酸的質(zhì)量濃度12～600μg/mL時(shí)有良好的線性關(guān)系。

經(jīng)H PLC測(cè)定，以信噪比（S/N） 為3和10所對(duì)應(yīng)樣品中該物質(zhì)的質(zhì)量濃度分別計(jì)算檢限測(cè)（L OD）和定量限（L O Q），丹酚酸B和迷迭香酸的檢測(cè)限檢出限L OD（S/N=3） 分別為0.2，0.3μg/mL；定量限L O Q（S/N=10） 分別為1.0，1.0μg/mL。

2.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液丹酚酸B和迷迭香酸5μL，在“1.2.1”項(xiàng)的色譜條件下進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)樣3次，記錄色譜峰面積。分析計(jì)算得丹酚酸B和迷迭香酸各峰面積的RS D分別為3.18%和1.99%，精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取丹酚酸B和迷迭香酸對(duì)照品溶液5 μL，依次在 0，4，8，12，16，18，24 h 進(jìn)樣分析，記錄各色譜峰面積，計(jì)算得其RS D分別為3.42%和3.85%，表明2種對(duì)照品在24 h內(nèi)都穩(wěn)定。

2.4 樣品含量測(cè)定

精密吸取供試品溶液5μL，在“1.2.1”項(xiàng)的色譜條件下進(jìn)行分析，記錄色譜峰面積，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算丹參地上部分丹酚酸B和迷迭香酸含量分別為5.24%和0.59%。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品，精密吸取供試品溶液5μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各色譜峰面積，測(cè)定丹酚酸B和迷迭香酸的含量分別為5.23%和0.59%，其RS D分別為1.32%和1.14%。表明該方法重復(fù)性好。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取同一批已知對(duì)照樣品含量80%，100%，120%的丹參地上部分，共9份，每3份1組，分別加入對(duì)照品丹酚酸B和迷迭香酸（質(zhì)量濃度分別為0.12，0.03 mg/mL） 1 mL進(jìn)樣分析，記錄色譜峰面積。結(jié)果表明，丹酚酸B和迷迭香酸的平均回收率分別為99.16%和101.11%，其RS D分別為0.735%和2.11%。

3 結(jié)論

丹參作為常用傳統(tǒng)中藥，市場(chǎng)上已開發(fā)出多種制劑，但均以根入藥，資源更為豐富的地上部分并未得到有效利用，隨著臨床應(yīng)用范圍的擴(kuò)大，亟需尋找新藥源。據(jù)文獻(xiàn)[11-12]可知，丹參根部中丹酚酸B和迷迭香酸的含量分別在1.81%～11.55%和0.11%～0.74%，試驗(yàn)以丹參地上部分為研究對(duì)象，經(jīng)H PLC法對(duì)由密山市康華中藥材種植專業(yè)合作社提供的丹參地上部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量進(jìn)行分析，得丹酚酸B和迷迭香酸的含量分別為5.24%和0.59%，與根部含量相當(dāng)，表明丹參地上部分作為獲取丹酚酸類化學(xué)成分的新資源具有很好的應(yīng)用前景。