潘 超， 馮永恒， 朱 宇， 倪紹忠

南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院(南京市第一醫(yī)院)普外科，江蘇 南京 210006

胃炎患者的患病率難以統(tǒng)計(jì)，很多慢性胃炎患者可能無臨床癥狀，許多因素均可以引起胃炎，包括幽門螺桿菌(H.pylori)感染、藥物、膽汁反流、免疫因素等[1]。慢性胃部炎癥反復(fù)發(fā)作，常伴有胃黏膜炎癥及胃腺體萎縮，也常伴有腸上皮化生，慢性萎縮性胃炎已經(jīng)考慮是一種癌前疾病[2]，血清胃蛋白酶原(PG)是胃蛋白酶的前體，分為PGⅠ和PGⅡ兩種，目前許多研究考慮將PG作為胃癌及癌前疾病初篩的檢測(cè)指標(biāo)，PG能反映不同部位黏膜的功能及形態(tài)[3-6]。人血清增殖誘導(dǎo)配體(APRIL)是TNF家族的新成員，在多種腫瘤組織中高表達(dá)，它可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，防止腫瘤細(xì)胞凋亡[7-8]。本研究旨在觀察APRIL及胃蛋白酶原的比值(PGⅠ/PGⅡ,PGR)對(duì)胃炎、胃癌的預(yù)測(cè)作用，研究APRIL在正常對(duì)照者、胃炎患者及胃癌患者的表達(dá)差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料本研究對(duì)象的選擇為2014年1月至2016年12月南京市第一醫(yī)院就診并進(jìn)行胃鏡檢查的患者，選取胃鏡結(jié)果為正常、非萎縮性胃炎、萎縮性胃炎、胃癌患者各80例(術(shù)后所有患者均經(jīng)病理組織學(xué)診斷確認(rèn))。入組病例在行胃鏡檢查前均詳細(xì)詢問病史、既往有胃部疾病病史、胃部手術(shù)病史和近1年存在胃部用藥病史的患者均予以剔除，試驗(yàn)通過醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，所有入組患者均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 ELISA實(shí)驗(yàn)：抽取胃鏡結(jié)果為正常、非萎縮性胃炎、萎縮性胃炎、胃癌患者的清晨空腹靜脈血4 ml，以3 500 r/min離心6 min直至出現(xiàn)血清，收集血清置于-20 ℃的低溫冰箱中。按照ELISA的檢測(cè)說明書進(jìn)行操作，檢測(cè)4組研究對(duì)象血清中PGⅠ、PGⅡ、APRIL及H.pylori抗體的含量，并計(jì)PGR。

1.2.2 診斷價(jià)值分析：制作APRIL、PGR的受試者工作特征曲線圖(receiver operating characteristic curve，ROC)，計(jì)算APRIL及PGR預(yù)測(cè)胃炎、胃癌的截?cái)嘀担`敏度(%)=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性+假陰性)例數(shù)×100%。特異度(%)=真陰性例數(shù)/(真陰性+假陽(yáng)性)例數(shù)×100%。

1.2.3 組織標(biāo)本的APRIL含量的測(cè)定：4組研究對(duì)象均在內(nèi)鏡下選取病灶處胃黏膜組織4～6塊(正常對(duì)照者選取胃竇和幽門區(qū)域組織)，組織標(biāo)本經(jīng)液氮速凍后置于-70 ℃低溫冰箱備用。按照說明書使用Trizol法提取組織總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Takara)轉(zhuǎn)錄成cDNA，使用SYBR PCR試劑盒(Takara)在7500 RT-PCR系統(tǒng)上進(jìn)行檢測(cè)。使用引物如下，APRIL，正義：5′-ATTAACGCCACCTCCAAG-3′，反義：5′-CAGCAGATAAACTCCAGCAT-3′；β-actin，正義：5′-AGAGCCTCGCCTTTGCCGATCC-3′，反義：5′-CTGGGCCTCGTCGCCCACATA-3′。檢測(cè)不同疾病狀態(tài)下人胃黏膜組織中APRIL mRNA的表達(dá)情況。

2 結(jié)果

2.1 正常對(duì)照者、胃炎、胃癌患者的資料及血清中PGⅠ、PGⅡ、APRIL的檢測(cè)值4組研究對(duì)象的年齡及性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。正常對(duì)照組、非萎縮性胃炎組、萎縮性胃炎組、胃癌組PGⅠ水平逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；正常對(duì)照組、非萎縮性胃炎組、萎縮性胃炎組、胃癌組PGR也逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；APRIL及H.pylori抗體的ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，正常對(duì)照組、非萎縮性胃炎組、萎縮性胃炎組、胃癌組逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；PGⅡ的檢測(cè)水平在4組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表1)。

表1 正常對(duì)照者、胃炎、胃癌患者的資料及血清中PGⅠ、PGⅡ及APRIL的檢測(cè)值Tab 1 Data of normal controls, gastritis and gastric cancer patients and the detection values of PG Ⅰ, PG Ⅱ and APRIL in serum

2.2 APRIL、PGR作為預(yù)測(cè)胃炎、胃癌的ROC曲線根據(jù)計(jì)算的結(jié)果，APRIL檢測(cè)胃炎、胃癌的截?cái)嘀禐?1.605 ng/ml，靈敏度為97.1%，特異度為96.3%(見圖1)。PGR檢測(cè)胃炎、胃癌的截?cái)嘀禐?，靈敏度為100%，特異度為92.9%(見圖2)。

2.3 組織標(biāo)本的APRIL mRNA表達(dá)水平的測(cè)定從4組樣本中取材進(jìn)行PCR檢測(cè)APRIL mRNA的表達(dá)水平，其中胃癌組的表達(dá)水平顯著高于非萎縮性胃炎組、萎縮性胃炎組及正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見圖3)。

3 討論

胃部疾病是臨床最為常見的疾病之一，目前門診越來越多的患者選擇胃鏡檢查來了解胃部的情況，血清PG的檢測(cè)可以間接反映胃部的情況，PG是胃蛋白酶的前體，包括PGⅠ和PGⅡ兩個(gè)亞群，胃的黏膜腺體萎縮時(shí)PGⅠ有所下降，PGⅡ與胃底黏膜的狀態(tài)有關(guān)，PGR的變化反映了胃黏膜腺體萎縮的情況[9]。在本次試驗(yàn)中，正常對(duì)照者、非萎縮性胃炎患者、萎縮性胃炎患者與胃癌患者的PGⅠ、PGR檢測(cè)值存在差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，正常對(duì)照者的PG Ⅰ、PGR檢測(cè)值是高于疾病狀態(tài)下的檢測(cè)水平。APRIL的檢測(cè)值則相反，胃癌患者中APRIL的ELISA檢測(cè)值最高，而正常對(duì)照者最低，4組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示著APRIL在胃部疾病的病情演變過程中也可能是動(dòng)態(tài)變化的，有可能胃部疾病越嚴(yán)重，APRIL的ELISA的檢測(cè)值就越高。

圖1 APRIL作為預(yù)測(cè)胃炎、胃癌的ROC曲線Fig 1 The ROC curve of APRIL as the index for predicting gastritis and gastric cancer

圖2 PGR作為預(yù)測(cè)胃炎、胃癌的ROC曲線Fig 2 The ROC curve of PGR as the index for predicting gastritis and gastric cancer

注：與胃癌組比較，*P<0.05。圖3 組織標(biāo)本的APRIL mRNA表達(dá)水平Fig 3 The expression level of APRIL mRNA in tissue samples

血液學(xué)檢查比胃鏡檢查更為便捷、經(jīng)濟(jì)，且胃鏡檢查存在明顯的不適反應(yīng)。如果血液學(xué)檢查能夠較為準(zhǔn)確、靈敏地初篩出胃部的疾病，那么將大大節(jié)省醫(yī)療資源，實(shí)驗(yàn)中根據(jù)APRIL及PGR的檢測(cè)結(jié)果制作出了預(yù)測(cè)胃炎、胃癌的ROC曲線圖，并且也計(jì)算出了截?cái)嘀担瑑蓚€(gè)預(yù)測(cè)指標(biāo)的靈敏度及特異度均顯示較高，當(dāng)然，本實(shí)驗(yàn)的納入統(tǒng)計(jì)人數(shù)有限，也存在明顯的局限。

APRIL是TNF受體家族中的重要一員，廣泛表達(dá)于淋巴細(xì)胞中，對(duì)于B細(xì)胞的存活、增殖、發(fā)育及分化存在影響，同時(shí)也能夠調(diào)節(jié)T細(xì)胞的炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答等[10-11]。APRIL可以在多種器官的腫瘤組織中異常表達(dá)[12-13]，且與腫瘤組織的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[14]，既往研究顯示，APRIL過表達(dá)的胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)更為迅速，而抑制APRIL表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯遲滯[7]。有研究顯示，NF-κB信號(hào)通路與APRIL誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞的順鉑化療抵抗有關(guān)[15]，胃癌患者APRIL mRNA的表達(dá)相比于正常對(duì)照者及胃炎患者明顯增高，預(yù)示APRIL和胃癌之間存在緊密的聯(lián)系，但目前APRIL與胃癌之間聯(lián)系的信號(hào)通路尚不清楚。

ELISA檢測(cè)同樣表現(xiàn)出H.pylori抗體的檢測(cè)與APRIL的檢測(cè)值從正常對(duì)照組到胃癌組均逐步上升，兩者可能存在相關(guān)性，需進(jìn)一步的研究證實(shí)。

綜上所述，對(duì)于胃部疾病的早期診斷可以使用ELISA檢測(cè)PGⅠ、PGR、APRIL的方法，對(duì)于APRIL水平顯著升高的患者，應(yīng)警惕胃癌發(fā)生的可能。