王星敏，王 露，李 鑫，詹 力，唐付杰

（1. 重慶工商大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院，重慶 400067；2. 重慶市特色農(nóng)產(chǎn)品加工儲(chǔ)運(yùn)工程技術(shù)研究中心，重慶 400067）

0 引 言

中國(guó)桑資源豐富，其葉約占桑樹(shù)地上部分產(chǎn)量的64%[1]。桑葉富含異槲皮苷、紫云英苷、葉黃素、谷甾醇等[2]多種天然活性物質(zhì)及其衍生物，具有降血糖[3]、降血脂[4]、抗炎[5]、抗氧化[6]、抗腫瘤、抗菌[7]等藥理作用，是中國(guó)衛(wèi)生部確定的藥食同源物。其中，異槲皮苷又稱為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷，屬黃酮類化合物，常作為天然著色劑、抗氧化劑等功能性原料[8]，廣泛應(yīng)用于食品和醫(yī)藥行業(yè)。Jung等[9]發(fā)現(xiàn)異槲皮苷能有效降低由 NO引發(fā)的老鼠腦漿脂質(zhì)的過(guò)氧化作用；Liu等[10]發(fā)現(xiàn)10 μmol/L的異槲皮苷通過(guò)抑制TNF-α，NO和iNOS的產(chǎn)生起到對(duì)多糖誘導(dǎo) RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子的調(diào)控作用。目前對(duì)于異槲皮苷藥理性作用報(bào)道較多，對(duì)其提取的報(bào)道尚少。現(xiàn)有植物提取異槲皮苷的方法主要有超聲提取法、回流浸提法、酶法提取、超臨界流體萃取等?？轮俪傻萚11]采用回流法，100 g紅旱蓮經(jīng)1 L/次乙醇回流2 h可提取異槲皮苷達(dá)2.83 mg/g；賈冬冬等[12]采用超聲提取桑葉中異槲皮苷和蘆丁，可提取異槲皮苷 6.47 μg/g。植物提提技術(shù)中，酶法[13]提取一般耗時(shí)至少3 h；超臨界流體提取技術(shù)[14]雖已應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中，但對(duì)設(shè)備要求高，投資大?，F(xiàn)有提取技術(shù)或多或少存在提取率不高、投資成本大、時(shí)間長(zhǎng)等不足。隨著“健康中國(guó) 2030”、“國(guó)民營(yíng)養(yǎng)計(jì)劃(2017-2030)”和“鄉(xiāng)村振興”國(guó)家戰(zhàn)略的實(shí)施，如何高值利用桑等生物質(zhì)資源，提高天然活性成分的提取效率，滿足人們?nèi)找嬖鲩L(zhǎng)的健康保健需求實(shí)現(xiàn)，越來(lái)越引起人們的關(guān)注。

桑葉致密的植物組織結(jié)構(gòu)形成天然屏障，阻礙異槲皮苷等天然活性成分的溶出。水熱反應(yīng)是熱化學(xué)轉(zhuǎn)化過(guò)程，在較低溫度（亞臨界區(qū)），生物質(zhì)主要發(fā)生水解反應(yīng)，生成水溶性物質(zhì)（大分子物質(zhì)）。將水熱反應(yīng)引入天然產(chǎn)物提取技術(shù)中，主要利用一定的水熱高溫（壓）條件對(duì)植物組織的裂解或轉(zhuǎn)化水解[15]，破壞植物組織致密結(jié)構(gòu)，加速溶劑滲透、擴(kuò)散，減少天然產(chǎn)物浸出的傳質(zhì)阻力，有利于天然活性成分的高效提取?；诖?，為提高異槲皮苷提取率，本文提出水熱反應(yīng)輔助醇提法提取桑葉中異槲皮苷，利用響應(yīng)面分析法優(yōu)化獲得適宜的異槲皮苷提取參數(shù)，探明影響異槲皮苷提取的因素間交互作用，探究異槲皮苷傳質(zhì)擴(kuò)散規(guī)律，為桑葉資源高值利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

原料：桑葉由重慶市北碚區(qū)蠶桑研究院提供。試劑：無(wú)水乙醇（分析純），磷酸（分析純），乙腈（色譜純），重慶川東化工集團(tuán)有限公司，異槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)品（≥98%），成都普菲德生物技術(shù)有限公司。儀器：1260高效液相色譜儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司）；CJF-0.05小型高壓反應(yīng)釜（北京鞏義予華儀器有限公司）；臺(tái)式電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；高速粉碎機(jī)（北京開(kāi)創(chuàng)同和科技發(fā)展有限公司）；傅里葉變換紅外光譜儀（美國(guó) Nicolet 公司)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 水熱輔助乙醇提取桑葉中異槲皮苷

采摘新鮮桑葉經(jīng)干燥、粉粹、過(guò)篩 0.18 mm后，分別稱取干燥桑葉粉末5.0 g于水熱反應(yīng)釜中，按桑葉質(zhì)量與乙醇溶液體積之比（料液比）為 1:3～1:7加入體積分?jǐn)?shù)為30%～70%的乙醇，于120～160 ℃的烘箱中水熱反應(yīng)40～80 min后（通過(guò)預(yù)試驗(yàn)確定范圍），過(guò)濾，分別收集濾渣和濾液。濾液即含有異槲皮苷醇提液；濾渣集中收集后待二次利用。區(qū)別于水熱輔助乙醇提取法，乙醇浸提法按乙醇體積與桑葉質(zhì)量比為 10:1加入體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇，于45 ℃水浴搖床浸提5.0 g桑葉粉末120 min。

1.2.2 異槲皮苷的分析測(cè)定

1）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。準(zhǔn)確稱取10 mg異槲皮苷標(biāo)品用乙醇定容至25 mL得濃度為0.4 mg/mL異槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，準(zhǔn)確移取0.5、1、2、4、6、10 mL定容至10 mL，得到質(zhì)量濃度梯度為 0.02、0.04、0.08、0.16、0.24、0.4 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液以待檢測(cè)。以濃度c對(duì)峰面積作圖，繪制異槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=12 615X-31.658，R2=0.999 8，表明在濃度范圍0.02～0.4 mg/mL內(nèi)線性關(guān)系較好，可用于試驗(yàn)計(jì)算。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算異槲皮苷質(zhì)量濃度，進(jìn)而計(jì)算桑葉中異槲皮苷溶浸量y，計(jì)算公式見(jiàn)公式（1）。

式中 c異槲皮苷濃度，mg/mL；v提取液體積，mL；m桑葉質(zhì)量，g。

2）高效液相色譜分析。采用高效液相色譜法測(cè)定醇提液中異槲皮苷質(zhì)量濃度，色譜條件為：色譜柱為Hypersil ODS柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相是體積比為 20:80的乙腈和 0.5%磷酸水溶液；流速為1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm；柱溫為25 ℃；進(jìn)樣量為10 μL；洗脫時(shí)間 30 min。

1.2.3 桑葉底物FTIR分析

采用衰減全反射模式測(cè)定桑葉的傅里葉變換紅外光譜，分析水熱反應(yīng)后底物表面化學(xué)物質(zhì)的官能團(tuán)種類及其變化，測(cè)定波數(shù)為4 500～500 cm-1。

1.2.4 響應(yīng)面分析法

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用 Box-Behnken設(shè)計(jì)，選取水熱時(shí)間、料液比、水熱溫度和乙醇體積分?jǐn)?shù)為自變量，以異槲皮苷得率為響應(yīng)值，設(shè)計(jì)4因素3水平的響應(yīng)面分析試驗(yàn)，響應(yīng)曲面因素水平編碼（表1）。

表1 響應(yīng)曲面因素水平與編碼Table 1 Response surface factor level and coding

2 結(jié)果與分析

2.1 影響異槲皮苷溶浸的水熱-醇提單因素試驗(yàn)

2.1.1 水熱時(shí)間對(duì)異槲皮苷溶浸的影響

水熱反應(yīng)有利于植物組織的轉(zhuǎn)化分解，水熱反應(yīng)時(shí)間影響著植物組織官能團(tuán)裂解及分解效果，影響異槲皮苷傳質(zhì)溶浸。由圖1a可知，5.000 0 g桑葉當(dāng)料液比為1:4、乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%、水熱溫度為160℃時(shí)，在水熱反應(yīng)40～80 min范圍內(nèi)，桑葉中異槲皮苷溶浸量先上升后下降，在60 min時(shí)達(dá)到最大值，為2.626 1 mg/g，對(duì)比乙醇浸提法反應(yīng)2 h的溶浸量（0.071 0 mg/g），水熱輔助醇提法大大提高異槲皮苷的提取能效。分析原因在于，木質(zhì)素主要由苯基丙烷結(jié)構(gòu)單元通過(guò)C-O-C和C=C聯(lián)接而成，在水熱轉(zhuǎn)化過(guò)程中，以β-O-4型連接的木素結(jié)構(gòu)單元更易斷裂，同時(shí)C-C也相對(duì)易斷裂，易發(fā)生脫水反應(yīng)[16]，加大木質(zhì)素水熱轉(zhuǎn)化生成較低分子的酚類單體或多聚體[17]，纖維素及半纖維素的長(zhǎng)鏈分子轉(zhuǎn)化成可溶性的低聚糖和單糖等小分子[18]，從而破壞植物組織致密結(jié)構(gòu)，有利于異槲皮苷溶出充分，提高異槲皮苷溶浸率，但過(guò)度延長(zhǎng)水熱反應(yīng)時(shí)間會(huì)增加能耗[19]。

2.1.2 料液比對(duì)異槲皮苷溶浸的影響

提取溶劑乙醇為親水性有機(jī)溶劑，能誘導(dǎo)非極性物質(zhì)產(chǎn)生一定的極性，因電性作用可溶解含有 8個(gè)羥基的異槲皮苷。由圖1b可知，當(dāng)水熱溫度為160℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%、水熱時(shí)間60 min時(shí)，在料液比為1:3～1:7范圍內(nèi)，異槲皮苷溶浸量隨著料液比的增加先增加后減少，在料液比為 1:6時(shí)異槲皮苷得率達(dá)到最大值為2.689 1 mg/g。分析原因在于，增大提取液用量，可適度增大水熱高溫（壓）條件的滲透壓力，有利于異槲皮苷在滲透壓和溶劑靜電的雙重作用充分溶浸并提取；但繼續(xù)增大提取劑用量，同時(shí)也增大乙醇與桑葉中其他活性成分的接觸、溶浸作用，導(dǎo)致異槲皮苷在溶浸過(guò)程中與其他活性成分產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，不僅影響異槲皮苷的溶浸，還造成不必要的溶劑浪費(fèi)[20]。

2.1.3 水熱溫度對(duì)異槲皮苷溶浸的影響

溫度升高可促使分子運(yùn)動(dòng)加速，增加溶劑分子和溶質(zhì)分子的動(dòng)能[21]。由圖1c可知，當(dāng)水熱時(shí)間60 min、料液比為1:6、乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí)，在120～160 ℃范圍內(nèi)，異槲皮苷溶浸量先增大后減小，在 140 ℃時(shí)達(dá)到最大值，此時(shí)異槲皮苷溶浸量為2.497 mg/g。分析原因在于，水熱反應(yīng)體系中較高溫度可適度軟化表面細(xì)胞壁，而纖維素和半纖維素是糖類碳水化合物，熱穩(wěn)定性相對(duì)低[22]，在升溫過(guò)程中發(fā)生表面水解[23]；此外，水熱反應(yīng)體系中較高溫度可加速乙醇分子和天然活性分子異槲皮苷的動(dòng)能，更利于異槲皮苷的擴(kuò)散和溶出[24]；溫度繼續(xù)升高，同時(shí)也加快其他物質(zhì)的溶出，影響異槲皮苷溶出擴(kuò)散效率，且過(guò)高溫度還會(huì)影響天然成分的生物活性，破壞天然活性成分分子結(jié)構(gòu)。

2.1.4 不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇對(duì)異槲皮苷溶浸的影響

在水熱反應(yīng)中，物質(zhì)的擴(kuò)散還與溶液黏度相關(guān)[25]。由圖1d可知，當(dāng)料液比為1:6、水熱溫度140 ℃、水熱時(shí)間60 min時(shí)，乙醇體積分?jǐn)?shù)為30%～70%時(shí)，不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇對(duì)異槲皮苷得率的影響有所不同，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為 60%時(shí)，異槲皮苷溶浸量達(dá)到最大為3.087 9 mg/g。分析原因在于，乙醇和水均含有-OH，根據(jù)相似相溶原理，可溶解還有8個(gè)-OH的異槲皮苷；異槲皮苷雖在水中溶解度僅為25.9 μg/mL，但水可適度增加醇提體系滲透壓力，可加大底物表面與溶劑間濃度差，有助于醇溶性物質(zhì)的充分?jǐn)U散和溶出；乙醇體積分?jǐn)?shù)偏低，有利于提高多糖、多肽等水溶性物質(zhì)溶出量[26]，乙醇體積分?jǐn)?shù)偏高時(shí)，則加大醇溶性物質(zhì)如葉綠素、葉黃素、親脂性強(qiáng)的成分溶出，影響異槲皮苷的溶出效果。

圖1 單因素試驗(yàn)Fig.1 Single factor test

2.2 異槲皮苷溶浸因素的響應(yīng)面分析

2.2.1 回歸模型構(gòu)建及顯著性檢驗(yàn)

運(yùn)用Design-Expert v8.0軟件建立的試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，對(duì)表2中試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得出水熱時(shí)間（A）、料液比（B）、水熱溫度（C）、乙醇體積分?jǐn)?shù)（D）與異槲皮苷得率（Y）之間的二次多元回歸方程見(jiàn)式（2）。

該回歸方程中4個(gè)一次項(xiàng)系數(shù)均為正值，表明4個(gè)因子對(duì)異槲皮苷得率都有協(xié)同作用[27]。對(duì)該模型進(jìn)行模型系數(shù)顯著性檢驗(yàn)和方差分析，結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 RSM試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Experimental design and results of RSM

表3 方差分析及顯著性檢驗(yàn)Table 3 Analysis of variance and test of significance

從方差分析可以看出：該方程P＜0.000 1，F(xiàn)=22.91，表明針對(duì)本試驗(yàn)的響應(yīng)目標(biāo)值 Y所選用的模型具有很好的顯著性；失擬項(xiàng)表示模型預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值不擬合的概率，該模型中失擬項(xiàng)P=0.506 1＞0.05，說(shuō)明試驗(yàn)與該模型的差異程度不顯著，無(wú)失擬因素存在，影響極顯著；決定系數(shù)R2=0.958 2，表明約95.82%的異槲皮苷得率變異分布在所選取的4個(gè)因素中，總變異中僅有4.18%不能由該模型解釋，表明該模型擬合程度良好；校正系數(shù)表明試驗(yàn)值與預(yù)測(cè)值間具有較高相關(guān)性，該模型擬合程度良好，可用此模型對(duì)水熱反應(yīng)輔助醇提異槲皮苷進(jìn)行得率的分析和預(yù)測(cè)。由F值檢驗(yàn)可獲得影響桑葉異槲皮苷得率的主次因素為：水熱時(shí)間＞水熱溫度＞料液比＞乙醇體積分?jǐn)?shù)。

2.2.2 水熱解因素響應(yīng)面及交互作用分析

響應(yīng)面和等高線能直觀地反映各因素的交互作用對(duì)響應(yīng)值的影響[28-30]。以式（2）數(shù)學(xué)模型為基礎(chǔ)，應(yīng)用Design Expert 8.0.6軟件編程，繪制響應(yīng)值異槲皮苷得率與影響因素的三維關(guān)系圖。等高線的形狀反映交互效應(yīng)的強(qiáng)弱大小，橢圓形表示交互作用顯著，而圓形則相反[31]。由圖2a～2d可知，2因素間的響應(yīng)面圖均存在極值，AB、AC、BC和CD的等高線呈橢圓形，橢圓軸線與坐標(biāo)軸之間有較大的角度，表明響應(yīng)面中 2個(gè)影響因素的交互作用顯著；此預(yù)測(cè)結(jié)果與表 3中方差分析及顯著性檢驗(yàn)所反映的結(jié)果一致。

圖2 交互作用對(duì)異槲皮苷得率的響應(yīng)面圖Fig.2 Response surface diagram of interaction on yield of isoquercitrin

2.2.3 模型驗(yàn)證

采取響應(yīng)面分析優(yōu)化的適宜工藝參數(shù)，即水熱時(shí)間為80 min、料液比為1:7、水熱溫度為154 ℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)為57%，分別取5.0 g桑葉進(jìn)行平行試驗(yàn)3次取平均值，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.3%，說(shuō)明響應(yīng)曲面法得出的最優(yōu)工藝參數(shù)具有重現(xiàn)性，且該模型對(duì)優(yōu)化此工藝具有可行性；試驗(yàn)浸提所得異槲皮苷平均得率為3.649 1mg/g，是乙醇浸提異槲皮苷得率（0.071 0 mg/g）的51倍。相比單因素試驗(yàn)結(jié)果，優(yōu)化所獲工藝參數(shù)中水熱時(shí)間、水熱溫度有所提高，但優(yōu)化所獲得的異槲皮苷得率較單因素試驗(yàn)值3.087 9mg/g提高了18.2%，顯著增加高附加值的天然活性物質(zhì)的利用率。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 最佳方案驗(yàn)證結(jié)果Table 4 Verification result of best scheme

2.3 異槲皮苷溶浸過(guò)程解析

2.3.1 異槲皮苷傳質(zhì)擴(kuò)散模型

天然產(chǎn)物提取的過(guò)程其實(shí)質(zhì)為活性成分在植物體與溶劑間的傳質(zhì)擴(kuò)散作用。將底物桑葉視為多孔介質(zhì)[32]，利用經(jīng)驗(yàn)公式 Webber-Morris動(dòng)力學(xué)模型擴(kuò)散方程[33-34]探究異槲皮苷在植物組織在水熱解轉(zhuǎn)化及乙醇同步提取作用下、由植物組織體內(nèi)擴(kuò)散至溶劑的過(guò)程。其中，Webber-Morris動(dòng)力學(xué)模型擴(kuò)散方程為

式中Kt溶劑內(nèi)擴(kuò)散速率常數(shù)，mg/(h1/2?mL)；qt為異槲皮苷t時(shí)刻濃度，mg/mL；C常數(shù)，反應(yīng)邊界層厚度；t為水熱時(shí)間，min。

基于響應(yīng)面優(yōu)化獲得異槲皮苷溶浸的適宜條件，開(kāi)展異槲皮苷溶浸濃度隨桑葉水熱反應(yīng)時(shí)間的影響研究，并以qt對(duì)t1/2作圖（圖3），相關(guān)參數(shù)見(jiàn)表5。

圖3 水熱法溶浸異槲皮苷的qt-t1/2曲線Fig.3 qt-t1/2 curve of isoquercetin dissolved by hydrothermal method

表5 異槲皮苷傳質(zhì)擴(kuò)散模型參數(shù)Table 5 Parameters of mass transfer diffusion model of isoquercetin

從決定系數(shù) R2可知，3階段的相關(guān)性較高，表明該模型可用于分析異槲皮苷的擴(kuò)散過(guò)程。由圖 3可知，異槲皮苷溶浸擴(kuò)散分為 3個(gè)階段：第Ⅰ階段為滲透溶浸階段，即溶劑向底物表面及內(nèi)部滲透，并溶浸底物中有效成分；第Ⅱ階段為內(nèi)部擴(kuò)散階段，即溶浸的異槲皮苷以分子形態(tài)從植物顆粒內(nèi)擴(kuò)散遷移到固液界面上；第Ⅲ階段為固液擴(kuò)散階段，即有效成分從植物體內(nèi)向溶劑主體擴(kuò)散，直至平衡。從圖可知，第Ⅱ階段呈直線增加，且不過(guò)原點(diǎn)，推測(cè)內(nèi)部擴(kuò)散為異槲皮苷溶出的關(guān)鍵步驟；第三階段為平緩的直線，表明異槲皮苷溶浸趨于平衡，且當(dāng)水熱輔助醇提至少需80 min，5.000 0 g桑葉中異槲皮苷溶浸才趨于平衡。此外，從表5中可知，3個(gè)階段的反應(yīng)邊界層厚度常數(shù)C值大小為CⅠ＜CⅡ＜CⅢ，呈逐漸增大趨勢(shì)，而擴(kuò)散速率常數(shù)Kt隨著邊界層厚度C的增加而變小，說(shuō)明邊界層厚度影響擴(kuò)散速率，內(nèi)部擴(kuò)散不是唯一的速度控制步驟。

2.3.2 桑葉水熱解表面紅外分析

對(duì)比桑葉原料、水熱輔助醇提后桑葉底物和醇提后桑葉底物的紅外光譜圖（圖4）發(fā)現(xiàn)，經(jīng)水熱反應(yīng)輔助醇提法處理的桑葉底物在2 916 cm-1[35]處纖維素的C-H伸縮振動(dòng)、1 417 cm-1處木質(zhì)素結(jié)構(gòu)支鏈中甲氧基、1 105 cm-1處的羧基中C-O伸縮振動(dòng)、895 cm-1處的纖維素中典型的β糖甘鍵特征吸收峰消失，表明桑葉中木質(zhì)素的苯基丙烷結(jié)構(gòu)單元以及纖維素表面官能團(tuán)分解；對(duì)比乙醇浸提后底物和桑葉原料，水熱反應(yīng)后底物在1 245 cm-1處的木質(zhì)素二芳基醚鍵C-O、1 060 cm-1處的纖維素吡喃糖環(huán)所含的醇 C-O伸縮振動(dòng)[17]的特征吸收峰明顯減弱，而1 624 cm-1的C=C出現(xiàn)、表明桑葉中纖維素的多聚糖發(fā)生水解。這與水熱反應(yīng)的選取條件有關(guān)，當(dāng)水熱溫度為154 ℃＜250 ℃時(shí)，水熱反應(yīng)主要以水解反應(yīng)為主，生成單糖等水溶性大分子物質(zhì)；而一定壓力使得溶劑密度增大，促使C-O、C-H、C=C鍵斷裂，有利于水解反應(yīng)發(fā)生，促進(jìn)木質(zhì)素的三維結(jié)構(gòu)解體。

圖4 桑葉底物紅外光譜圖解析Fig.4 Infrared spectra of mulberry leaves

3 結(jié) 論

1）采用水熱反應(yīng)輔助醇提法提取桑葉中異槲皮苷的適宜工藝參數(shù)為：水熱時(shí)間為80 min、水熱溫度為154 ℃、料液比為1:7、乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)，5.000 0 g桑葉中可溶浸3.649 1 mg/g異槲皮苷，該溶浸質(zhì)量是乙醇浸提的51倍，較單因素試驗(yàn)值3.087 9mg/g提高了18.2%，顯著增加高附加值的天然活性物質(zhì)的利用率，符合當(dāng)下經(jīng)濟(jì)、環(huán)境效益。

2）采用響應(yīng)曲面法進(jìn)行二次回歸擬合，所得模型P＜0.01，表明該模型影響極顯著；4個(gè)影響因素與響應(yīng)目標(biāo)值 Y之間存在交互作用的影響，其影響程度分別為：水熱時(shí)間＞水熱溫度＞料液比＞乙醇體積分?jǐn)?shù)。

3）內(nèi)部擴(kuò)散模型研究表明，異槲皮苷在反應(yīng)體系中的擴(kuò)散存在滲透、內(nèi)部擴(kuò)散和邊界擴(kuò)散 3個(gè)過(guò)程，內(nèi)部擴(kuò)散不是唯一的速度控制步驟，擴(kuò)散速率常數(shù)隨著邊界層厚度增加而變小。解析紅外光譜圖可知，羧基中 C-O伸縮振動(dòng)特征吸收峰、C-H彎曲振動(dòng)消失，O-H和 C-H的特征吸收峰減弱，表明水熱反應(yīng)有助于桑葉木質(zhì)素中苯基丙烷結(jié)構(gòu)單元分解，促使纖維素表面水解反應(yīng)發(fā)生，有利于提取物異槲皮苷的溶出。