何世成，王昌建，林 源，賀銀輝，彭 志，魯杏華，唐小明，王衛(wèi)國，劉道新

（湖南省動物疫病預(yù)防控制中心，湖南長沙 410014）

非洲豬瘟（African swine fever，ASF） 是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，對染疫國家的生豬產(chǎn)業(yè)和相關(guān)國際貿(mào)易影響巨大，是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）的須通報動物疫病，屬于我國一類動物疫病。ASFV宿主是家豬和野豬，不感染人，主要通過間接和直接接觸傳播，發(fā)病豬、隱性感染豬及其排泄物、污染物以及軟蜱等媒介吸血昆蟲是其主要傳染源[1-2]。自2018年8月，ASF疫情首次在遼寧省發(fā)現(xiàn)以來，短期內(nèi)在全國多個省份接連發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致大量生豬被撲殺，經(jīng)濟損失慘重[3-5]。2018年10月湖南省發(fā)現(xiàn)首起ASF疫情，且在1個月內(nèi)連續(xù)發(fā)現(xiàn)7起，給該省生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴(yán)重打擊。為了解湖南省屠宰場ASFV污染情況，在疫情暴發(fā)期內(nèi)，對湖南省疫點、疫區(qū)以及非疫區(qū)屠宰場開展了ASFV監(jiān)測，以期為評估ASFV潛在傳播風(fēng)險提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2018年10月，在湖南省3個ASF疫區(qū)市、2個非疫區(qū)市86個屠宰場，選擇待宰圈、電麻前生豬通道、放血槽、盛血器、脫毛池、屠宰場總排水溝、屠宰線、肉品存儲庫等不同生產(chǎn)環(huán)節(jié)，采集樣品895份，其中環(huán)境拭子樣品757份、豬血樣品17份、豬肉樣品109份以及屠宰場內(nèi)加工的香腸8份、臘肉4份。

1.2 試劑

ASFV熒光PCR檢測引物和探針：由中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心提供；熒光PCR擴增試劑盒：購自北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司；病毒RNA/DNA提取試劑盒：購自蘇州天隆生物科技股份公司。

1.3 主要儀器設(shè)備

NP968核酸提取儀：西安天?。籄BI 7500fast熒光PCR儀：賽默飛；生物安全柜：美國BAKER；高壓滅菌鍋：上海申安。

1.4 樣品處理和檢測

按中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心編制的《非洲豬瘟實驗室檢測操作程序》進行樣品處理、熒光PCR擴增、結(jié)果判定和廢棄物處置，按照RNA/DNA提取試劑盒說明書提取核酸。

1.5 屠宰場清洗消毒

待宰圈舍、進豬通道、卸豬臺、淋浴間等區(qū)域，每循環(huán)1次，徹底清理1次糞便，清水沖洗后用2%～5%燒堿液噴灑，30 min后再用清水沖洗；屠宰、分割加工車間，每次生產(chǎn)結(jié)束后先用清水沖洗，再用0.1%～0.2%的戊二醛噴霧消毒，30 min后用清水沖洗。

1.6 陽性屠宰場檢測

根據(jù)《湖南省防治重大動物疫病指揮部辦公室關(guān)于因非洲豬瘟關(guān)聯(lián)暫停的屠宰場恢復(fù)生產(chǎn)有關(guān)事項的通知》（湘防重病辦﹝2018﹞15號）的規(guī)定，暫停疫情縣以外、與疫點有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)的ASFV檢測陽性屠宰場的屠宰活動15 d，在此期間進行徹底清洗消毒，分別于暫停屠宰后5、10、14 d，在待宰圈、屠宰間、放血槽、打毛間、總排水口等5個部位，各采集5份環(huán)境樣品，共25份/次進行ASFV檢測。

2 檢測結(jié)果

2.1 總體情況

86個屠宰場的895份樣品中，11個場的43份樣品為ASFV核酸陽性，場陽性率為12.8%，樣品陽性率為4.8%。43份陽性樣品包括36份環(huán)境拭子樣品、1份豬肉樣品、5份香腸樣品、1份臘肉樣品，其中陽性環(huán)境拭子主要采自屠宰間、放血槽、排水溝、脫毛池、生豬清洗間等位置。不同類型屠宰場檢測結(jié)果見表1，不同類型樣品檢測結(jié)果見表2。

表1 不同類型屠宰場ASFV檢測結(jié)果

表2 不同類型樣品ASFV檢測結(jié)果

2.2 屠宰場清洗效果

1個疫情無關(guān)聯(lián)陽性屠宰場（正常屠宰），首次采樣（在待宰圈、放血槽、盛血器、電麻前生豬通道、屠宰場總排水溝、屠宰線、脫毛池等7個工作地，每個地點隨機采集環(huán)境拭子3份）2 d后，再次采樣（7個環(huán)節(jié)，每個環(huán)節(jié)5份，共35份）檢測，結(jié)果全為陰性。其間屠宰場按日常清洗消毒程序，其清洗消毒2次。另外10個暫停屠宰的陽性屠宰場，其間共清洗消毒3次，每次檢測均為陰性。

3 分析與討論

本次監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，屠宰場內(nèi)的ASFV樣品陽性率為4.8%，場陽性率為12.8%，表明屠宰環(huán)節(jié)存在ASFV污染。疫情關(guān)聯(lián)屠宰場陽性率（75.0%）遠高于疫點縣屠宰場（0）和疫情無關(guān)聯(lián)屠宰場（2.9%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），表明屠宰場ASFV污染與屠宰疫點養(yǎng)豬場生豬直接關(guān)聯(lián)，這也符合ASF高度接觸傳播的流行病學(xué)特征。

AFSV抵抗力強，在外界可長期存活，任何與感染生豬接觸的行為均有引發(fā)ASF疫情的風(fēng)險[6-7]。本次檢測發(fā)現(xiàn)的43份陽性樣品中，有36份（83.7%）為環(huán)境拭子樣品，表明病毒一旦隨生豬進入屠宰場，就會潛入屠宰間、放血槽、排水溝、脫毛池等區(qū)域，繼而污染整個屠宰環(huán)節(jié)。如果屠宰場與養(yǎng)殖場之間存在運輸人員、車輛、工具等的頻繁接觸，那么病毒匯集、擴散風(fēng)險巨大，如果不經(jīng)過嚴(yán)格消毒，就會使病毒進一步擴散。從湖南省屠宰場的消毒監(jiān)測效果看，通過嚴(yán)格和規(guī)范的消毒，可以有效殺滅ASFV。因此，要做好屠宰場內(nèi)環(huán)境、運輸車輛的清洗消毒工作，確保病原在屠宰場內(nèi)不交叉、不回流。

監(jiān)測結(jié)果顯示，屠宰場豬肉樣品陽性率為0.9%，表明屠宰場豬肉產(chǎn)品存在ASFV污染風(fēng)險，其原因與屠宰了隱性帶毒豬以及屠宰場的病毒污染有關(guān)。另外，監(jiān)測的所有香腸、臘肉樣品均來自于同一個疫情關(guān)聯(lián)屠宰（加工）企業(yè)。溯源調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在采樣監(jiān)測前，該場多次宰殺來自疫情場的生豬，因此及時開展疫情場的外調(diào)記錄調(diào)查，追蹤屠宰場的動物產(chǎn)品流向，將有助于降低病毒經(jīng)產(chǎn)品擴散的風(fēng)險。

此外，從與疫點養(yǎng)殖場有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)屠宰場的環(huán)境、豬肉及其制品監(jiān)測結(jié)果可以看出，屠宰場是ASF防控的關(guān)鍵主體。如果屠宰場屠宰了隱性帶毒生豬，病毒就會進入產(chǎn)品并長時間存活，這會給ASF防控和凈化帶來更大困難。因此，建議根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部統(tǒng)一部署，要求屠宰企業(yè)繼續(xù)加大ASFV自檢力度，政府和技術(shù)部門加強指導(dǎo)和監(jiān)督，把好屠宰檢疫關(guān)。

4 結(jié)論

本監(jiān)測利用熒光PCR方法，對湖南省86個屠宰場進行ASFV核酸檢測，在11個屠宰場的43份樣品中檢測出核酸陽性，場陽性率為12.8%，樣品陽性率為4.8%，表明屠宰場存在ASFV污染，其來源主要與屠宰疫情養(yǎng)殖場生豬有關(guān)。屠宰場的日常清洗消毒，可有效消除病毒，對于ASF防控具有積極意義。因此，屠宰場應(yīng)加強AFS自檢工作，堅持日常清洗消毒制度，阻斷病毒通過屠宰產(chǎn)品再次擴散傳播。