張 愿，李逢逢，張祖珍，楊宗斌，王福生

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微籽龍膽氯仿部位中三萜類成分研究

張 愿，李逢逢，張祖珍，楊宗斌，*王福生

（大理大學藥學與化學學院，云南，大理 671000）

采用多種色譜技術（硅膠、ODS、MCI和Sephadex LH-20等）從微籽龍膽氯仿部位分離得到9個三萜類化合物，通過核磁共振技術和文獻數(shù)據(jù)對比，分別鑒定為：-香樹脂醇 (1)、3,28-二羥基烏蘇烷 (2)、3-羥基-12-烯-28-醛烏蘇烷 (3)、烏蘇酸 (4)、3-hydroxy-urs-11-en-13,28-olide (5)、2-羥基烏蘇酸 (6)、obtusalin (7)、樺木酸（8）和2,3,24-三羥基齊墩果酸 (9)。化合物 (7) 和 (9) 為首次從該屬植物中分離得到。

微籽龍膽；氯仿部位；三萜類成分

龍膽屬植物全世界約有400種，我國有247種、41變種，其中云南共有125種，包括6個變種，絕大部分分布在云南西北部地區(qū)[1]。龍膽屬植物中主要含有環(huán)烯醚萜和裂環(huán)烯醚萜、黃酮和三萜及其苷類等成分[2]，具有明顯的抗炎、抗氧化、抗真菌、抗腫瘤、保肝、降血糖及創(chuàng)傷愈合等多種生理活性[2]。

微籽龍膽（）為龍膽科龍膽屬植物，主產于云南東川、昆明、洱源、鶴慶、劍川和麗江等地，大多生長于海拔2100 ~ 3350 m的山坡草地及灌木叢中[3-4]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)微籽龍膽氯仿部位不僅具有抑制乙酰膽堿酯酶活性，而且能夠減少Aβ（β-淀粉樣蛋白）的產生[5]。目前未見文獻報道微籽龍膽三萜類化學成分研究。為了解微籽龍膽的活性成分，本實驗對氯仿部位的三萜類成分進行了研究，從中分離鑒定了9個單體化合物?；衔?(7) 和 (9) 為首次從該屬植物中分離得到。化合物結構見圖1。

圖1 化合物1-9的結構式

1 儀器與材料

1.1 實驗儀器

上海亞榮公司生產的旋轉蒸發(fā)儀（2L，5L） Bruker Advance-400 MHz 核磁共振儀（NMR）；干燥箱（上海博訊實業(yè)有限公司）；SHD-III型循環(huán)式真空泵；分析天平(奧豪斯儀器常州有限公司)。

1.2 實驗試劑與材料

正丁醇、乙醇、甲醇、乙酸乙酯和氯仿均為工業(yè)純重蒸后使用，DMSO(二甲基亞砜，阿拉丁試劑公司)，氘代氯仿和氘代甲醇（北京百靈威科技有限公司），Sephadex LH-20（Pharmacia），ODS，MCI，柱層析硅膠和薄層色譜硅膠板GF254（青島海洋化工廠）。本研究使用的藥用植物微籽龍膽于2016年11月采自云南省洱源縣，由大理大學藥學與化學學院段寶忠副教授鑒定為微籽龍膽（Franch）。樣品標本 (WFS-161106)存放于大理大學藥學與化學學院王福生教授課題組。

2 提取與分離方法

微籽龍膽陰干，稱取14 kg，用粉碎機粉碎后過篩，用95%的乙醇浸泡12 h，提取3 次，然后再用50%乙醇浸泡提取3 次，將提取液減壓濃縮后得到總浸膏。將其懸浮于適量常溫水中，依次用石油醚、氯仿、正丁醇、水溶液進行萃取。氯仿-正丁醇萃取部分分別用硅膠和大孔樹脂上樣，經硅膠（氯仿-甲醇）、凝膠（甲醇）、ODS（甲醇-水）和MCI（甲醇-水）柱層析等方法進行反復分離得到上述9 個三萜類化合物，其中化合物1（56 mg），化合物2（32 mg），化合物3（78 mg），化合物4（24.5 mg），化合物5（36.2 mg），化合物6（105 mg），化合物7（98 mg），化合物8（66.3 mg），化合物9（46.7 mg）。

3 實驗結果

化合物1：白色粉末。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 5.12 (1H, t,=3.6 Hz, H-12), 3.22 (1H, m, H-3), 1.00, 0.97, 0.99, 0.79, 0.89, 0.79 (each 3H, s, H-23, 24, 25, 26, 27, 28), 1.20 (3H, d,=6.0 Hz, H-29), 0.97(3H, d,=6.0 Hz, H-30);13C-NMR (100MHz, CDCl3): 38.9 (C-1), 27.4 (C-2), 79.2 (C-3), 38.9 (C-4), 55.3 (C-5), 18.5 (C-6), 33.1 (C-7), 40.1 (C-8), 47.8 (C-9), 37.0 (C-10), 23.5 (C-11), 124.4 (C-12), 139.7 (C-13), 42.2 (C-14), 28.2 (C-15), 26.8 (C-16), 33.9 (C-17), 59.2 (C-18), 39.8 (C-19), 39.7 (C-20), 31.4 (C-21), 41.7 (C-22), 28.3 (C-23), 15.8 (C-24), 15.8 (C-25), 17.0 (C-26), 23.4 (C-27), 28.9 (C-28), 17.6 (C-29), 21.5 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道一致，故鑒定為-香樹脂醇。

化合物2：白色粉末。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 5.13 (1H, s,=3.6Hz, H-12), 3.52 (1H, d,= 11.0 Hz, H-28), 3.22 (1H, m, H-3), 3.18 (1H, d,= 10.8Hz, H-28), 1.99 (1H, d,= 3.6Hz, H-18), 0.80 (3H, d, Me), 0.87 (3H, d, Me), 0.63, 0.73, 0.83, 1.01 (12H, s, Me);13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 38.9 (C-1), 26.1 (C-2), 79.1 (C-3), 38.1 (C-4), 55.3 (C-5), 18.4 (C-6), 32.9 (C-7), 40.1 (C-8), 47.8 (C-9), 37.0 (C-10), 23.5 (C-11), 125.1 (C-12), 138.8 (C-13), 42.2 (C-14), 27.3 (C-15), 23.4 (C-16), 38.9 (C-17), 54.1 (C-18), 39.5 (C-19), 39.4 (C-20), 30.7 (C-21), 35.3 (C-22), 28.2 (C-23), 15.7 (C-24), 15.8 (C-25), 16.9 (C-26), 23.4 (C-27), 70.0 (C-28), 17.5 (C-29), 21.4 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道一致，故鑒定為 3,28-二羥基-烏蘇烷。

化合物3：白色粉末。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 0.73, 0.77, 0.91, 0.92, 0.99, 1.09, 1.14 (s, 7*CH3), 2.34 (t,= 7.32 Hz, 1H, H-5), 3.21 (dd,=5.16 Hz, 2H, H-3), 5.32 (t,= 3.6 Hz, 1H, H-12), 3.22 (dd,= 10.7, 5.1 Hz, 1H), 9.33 (d,= 1.2 Hz, 1H, H-28);13C-NMR (100MHz, CDCl3): 32.0 (C-1), 27.3 (C-2), 79.1 (C-3), 38.8 (C-4), 55.3 (C- 5),18.4 (C-6), 33.2 (C-7), 39.9 (C-8), 47.7 (C-9), 37.0 (C-10), 22.8 (C-11), 126.3 (C-12), 137.9 (C-13), 42.3 (C-14), 29.8 (C-15), 27.0 (C-16), 50.3 (C-17), 52.8 (C-18), 39.1 (C-19), 38.9 (C-20), 30.3 (C-21), 38.8 (C-22), 28.3 (C-23), 15.7 (C-24), 15.6 (C-25), 16.8 (C-26), 23.4 (C-27), 207.6 (C-28), 17.3 (C-29), 21.2 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道一致，故鑒定為 3-羥基-12-烯-28-醛烏蘇烷。

化合物4：白色粉末。1H-NMR (400MHz, DMSO): 11.98 (COOH), 8.31 (s, OH), 3.01 (1H, m, H-3), 5.11 (m,=3.3 Hz, 1H, H-12), 2.08 (1H, m,=9.7 Hz, H-18), 0.85 (3H, d ,=5.1), 0.87 (3H, d,=5.4), 0.63, 0.74, 0.84, 0.86, 1.03 (each 3H, s, 5*CH3);13C-NMR (100MHz, DMSO): 30.4 (C-1), 27.1 (C-2), 77.2 (C-3), 38.6 (C-4), 55.0 (C-5), 18.2 (C-6), 32.9 (C-7), 41.5(C-8), 47.2 (C-9), 36.7 (C-10), 23.1 (C-11), 124.8 (C-12), 138.4 (C-13), 41.8 (C-14), 27.7(C-15), 24.0 (C-16), 47.1 (C-17), 52.6 (C-18), 38.8 (C-19), 38.7 (C-20), 30.4 (C-21), 36.6(C-22), 28.5 (C-23), 16.3 (C-24), 15.4 (C-25), 17.2 (C-26), 23.5 (C-27), 178.6 (C-28), 17.1 (C-29), 21.3 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道一致，故鑒定為烏索酸。

化合物5：白色粉末。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 5.95 (1H, d,= 10.4, H-12), 5.53 (1H, dd,= 10.3, 3.1Hz, H-11), 3.21 (1H, dd,= 11.2, 5.0Hz, H-3), 2.13 (1H, d,= 13.1Hz , 2.9Hz , H-18), 1.16 (3H, s , H-27), 1.05 (3H, s, H-26), 1.00 (d, 3H, H-29), 0.98 (s, 3H, H-23), 0.93 (s, 3H, H-30), 0.91 (s, 3H, H-25), 0.78 (s, 3H, H-24);13C-NMR (100MHz, CDCl3): 38.4 (C-1), 27.1 (C-2), 79.0 (C-3), 39.1 (C-4), 54.9 (C-5), 17.8 (C-6), 31.4 (C-7), 41.8 (C-8), 53.2 (C- 9), 36.5 (C-10), 129.0 (C-11), 133.6 (C-12), 89.8 (C-13), 42.0 (C-14), 25.6 (C-15), 22.9 (C-16), 45.2 (C-17), 60.7(C-18), 38.2 (C-19), 40.4 (C-20), 30.9 (C-21), 31.4 (C-22), 27.9 (C-23), 15.1 (C-24), 18.0 (C-25), 19.0 (C-26), 16.2 (C-27), 180.0 (C-28), 18.1 (C-29), 19.3 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]報道一致，故鑒定為 3-hydroxy-urs-11- en-13,28-olide。

化合物6：白色粉末。1H-NMR (400MHz, DMSO): 5.12 (1H, t,=3.16Hz, H-12), 4.86 (1H, d,=7.6Hz, H-1), 4.10 (1H, m, H-5), 3.62 (1H, m, H-4), 3.20 (1H, m, H-3), 3.01 (2H, m, H-2, H-5) 和0.57, 0.69, 0.73, 0.84, 0.85, 0.95, 1.07 (each of 3H, Me×7);13C-NMR (100MHz, DMSO): 47.3 (C-1), 67.5 (C-2), 82.5 (C-3), 39.2 (C-4), 55.1 (C-5), 18.3 (C-6), 32.9 (C-7), 39.4 (C-8), 47.3 (C-9), 37.8 (C-10), 23.2 (C-11), 124.8 (C-12), 138.5 (C-13), 41.9 (C-14), 27.8 (C-15), 23.3 (C-16), 47.2 (C-17), 52.7 (C-18), 38.8 (C-19), 38.7 (C-20), 30.5 (C-21), 36.6 (C-22), 29.1 (C-23), 16.7 (C-24), 17.3 (C-25), 17.4 (C-26), 23.5 (C-27), 178.7 (C-28), 17.2 (C-29), 21.3 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道一致，故鑒定為 2-羥基烏蘇酸。

化合物7：白色粉末。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 5.12 (1H, t,=3.6Hz, H-12), 3.51 (1H, d,=10.9Hz, H-27), 3.22 (d,=5.4Hz, 1H, H-3), 0.87 (3H, d, H-30), 0.77, 0.91, 0.93, 0.97, 0.98, 1.08(6x-CH3);13C-NMR (100MHz, CDCl3): 38.9 (C-1), 27.3 (C-2), 79.1 (C-3), 38.1 (C-4), 55.2 (C-5), 18.4 (C-6), 32.9 (C-7), 40.1 (C-8), 47.7 (C-9), 37.0 (C-10), 23.4 (C-11), 125.1 (C-12), 138.8 (C-13), 42.1 (C-14), 23.5 (C-15), 26.1 (C-16), 38.8 (C-17), 54.1 (C-18), 39.5 (C-19), 39.5 (C-20), 30.7 (C-21), 35.3 (C-22), 28.2 (C-23), 16.9 (C-24), 15.7 (C-25), 15.8 (C-26), 70.0 (C-27), 23.4 (C-28), 17.5 (C-29), 21.4 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道一致，故鑒定為 obtusalin。

化合物8：白色粉末。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 4.72 (s, 1H, H-29b), 4.59 (s, 1H, H-29a), 4.25 (d, 1H,=5.0 Hz, -OH ), 3.28 (m, 1H, H-3), 2.89 (m, 1H, H-19), 1.68 (s, 3H, H-30), 0.90 (s, 3H, H-27), 0.92 (s, 6H, H-23 and H-25), 0.81 (s, 3H, H-24), 0.74 (s, 3H, H-26);13C-NMR (100MHz, CDCl3): 38.8 (C-1), 27.5 (C-2), 79.2 (C-3), 39.0 (C-4), 55.5 (C-5), 18.4 (C-6), 34.5 (C-7), 40.8 (C-8), 50.6 (C-9), 37.3 (C-10), 21.0 (C-11), 25.6 (C-12), 38.5 (C-13), 42.6 (C-14), 29.8 (C-15), 32.3 (C-16), 56.5 (C-17), 49.4 (C-18), 47.0 (C-19), 150.5 (C-20), 30.7 (C-21), 37.2 (C-22), 28.1 (C-23), 15.5 (C-24), 16.2 (C-25), 16.1 (C-26), 14.8 (C-27), 181.4 (C-28), 109.8 (C-29), 19.5 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]報道一致，故鑒定為樺木酸。

化合物9：1H-NMR (400MHz, CD3OD): 5.27 (t,= 3.2Hz, 1H, H-12), 4.02 (m, 1H, H-2), 4.45 (d,= 2.4Hz, 1H, H-3), 4.01 (d,= 11.4Hz, 1H, H-24a), 3.60 (d,= 11.3Hz, 1H, H-24b), 0.80, 0.92, 0.95, 0.97, 1.10, 1.19 (6x-CH3);13C-NMR (100MHz, CD3OD): 42.6 (C-1), 66.9 (C-2), 74.6 (C-3), 42.9 (C-4), 49.9 (C-5), 19.3 (C-6), 33.8 (C-7), 40.7 (C-8), 48.7 (C-9), 39.2 (C-10), 24.7 (C-11), 123.4 (C-12), 145.3 (C-13), 45.4 (C-14), 28.8 (C-15), 24.1 (C-16), 47.6 (C-17), 42.7 (C-18), 47.2 (C-19), 31.6 (C-20), 34.9 (C-21), 34.2 (C-22), 24.0 (C-23), 68.8 (C-24), 17.3 (C-25), 17.6 (C-26), 26.7 (C-27), 181.9 (C-28), 33.5 (C-29), 23.1 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[16]報道一致，故鑒定為 2,3,24-trihydroxyolea-l2- en-28-oic acid(2,3, 24-三羥基齊墩果酸)。

4 小結

三萜類成分在植物中分布廣泛，具有抗真菌、抗腫瘤和降血糖等多種生物活性[17]，引起了國內外眾多學者的極大興趣，由此也發(fā)現(xiàn)了許多新穎的三萜骨架，但由于三萜類化合物種類繁多，極性相近，分離純化比較困難，化合物數(shù)量累積較慢。本研究豐富了龍膽屬植物中三萜類化學成分研究，為該藥用植物的活性研究及開發(fā)利用提供了一定的實驗依據(jù)。

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TRITERPENOID CONSTITUENTS FROM CHLOROFORM EXTRACT OF

ZHANG Yuan, LI Feng-feng, ZHANG Zu-zhen, YANG Zong-bin,*WANG Fu-sheng

(College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China)

Nine triterpenoids were isolated from the chloroform fraction ofby various column chromatography involving silica gel, ODS, MCI and Sephadex LH-20. Their structures were identified basing on NMR spectroscopic data analysis, together with comparison with previous data, to be-amyrin (1), 3, 28-dihydroxy-ursane (2), 3-hydroxy-12-ene-28-al-ursane (3), ursolic acid (4), 3-hydroxy-urs-11-en-13, 28-olide (5), 2-hydroxyursolic acid (6), obtusalin (7), betulinic acid (8) and 2,3,24-trihydroxyolea-l2-en-28-oic acid (9). Compounds 7 and 9 were isolated from this genus for the first time.

; chloroform part; triterpenoids

1674-8085(2019)03-0019-05

R284.1

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2019.03.004

2019-01-21；

2019-03-06

國家自然科學基金項目(31360082, 31860098)

張 愿(1992-)，男，河南泌陽人，碩士生，主要從事天然藥物化學研究(E-mail:1334432513@qq.com);

李逢逢(1990-)，男，江蘇豐縣人，碩士生，主要從事天然藥物化學研究(E-mail:250350663@qq.com);

張祖珍(1990-)，女，云南曲靖人，碩士生，主要從事天然藥物化學研究(E-mail:1174132107@qq.com);

楊宗斌(1995-)，男，云南楚雄人, 碩士生，主要從事天然藥物化學研究(E-mail:1377726097@qq.com);

*王福生(1965-)，男，云南大理人，教授，博士，碩士生導師，主要從事天然藥物化學研究(E-mail:wfsyn@163.com).