高沖 張平

摘 要 豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種具有高度傳染性的疫病，對養(yǎng)豬業(yè)危害極大，我國將其列為一類動物傳染病。近年來，豬瘟的非典型臨床表現(xiàn)和病理變化越來越常見，給該病的臨床診斷及有效防控帶來了難度。本文通過對豬瘟的實驗室診斷及抗體檢測技術(shù)進行簡要綜述，以期為做好豬瘟的實驗室診斷與抗體監(jiān)測，加強豬瘟的防控和凈化提供參考。

關(guān)鍵詞 豬瘟；實驗室診斷；抗體監(jiān)測

實驗室檢測技術(shù)是畜禽疾病防控的重要手段，準確而快速的診斷是畜禽疾病控制的前提。豬瘟檢測技術(shù)一直是該病防控研究的一個重要內(nèi)容。2007年我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了《豬瘟防治技術(shù)規(guī)范》和相關(guān)的系列診斷方法用于中國的豬瘟防控。近年來，隨著養(yǎng)殖業(yè)規(guī)?；?、集約化的快速發(fā)展，非典型豬瘟流行普遍，與其他豬病混合感染現(xiàn)象日趨嚴重，豬瘟疫苗高密度100%全面免疫帶來了感染豬與免疫豬鑒別診斷的難題，加之非洲豬瘟的傳入，對豬瘟的實驗室診斷及抗體監(jiān)測提出了更高的要求。近年來，隨著病毒學(xué)、組織培養(yǎng)技術(shù)、生物化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展，大大推動了我國豬瘟檢測技術(shù)的研發(fā)進程。

1 豬瘟病原學(xué)診斷技術(shù)

常用的豬瘟病原學(xué)診斷方法有病毒分離鑒定和實驗動物法、雞新城疫病毒強化實驗、免疫熒光實驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和分子生物學(xué)檢測技術(shù)。

ELISA免疫檢測技術(shù)是當(dāng)前應(yīng)用最廣泛、發(fā)展最快的一項免疫檢測技術(shù)。豬瘟病毒抗原ELISA檢測方法主要是雙抗體夾心ELISA，也稱抗原捕獲ELISA（AC-ELISA），該方法優(yōu)點是操作簡單、自動化程度高、可做到高通量檢測大分子抗原，缺點是該方法只對強毒檢測效果良好，但對弱毒的監(jiān)測不敏感。

隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，豬瘟病毒核酸檢測靈敏度呈現(xiàn)數(shù)量級的提高，RTPCR、RT-nPCR、熒光定量RT-PCR、RT-LAMP等多種分子生物學(xué)的檢測方法為豬瘟病毒的臨床快速診斷、基層場地實時便捷診斷、實驗室檢測、流行病學(xué)調(diào)查及野毒株和疫苗株的鑒別診斷提供了強有力的支持。其中熒光定量RT-PCR方法是在普通RT-PCR的基礎(chǔ)上引入熒光染料，通過熒光PCR儀進行RT-PCR擴增，檢測樣品可以使組織病料也可以是血液樣品。該方法因敏感性高、全封閉反應(yīng)的優(yōu)勢，有效解決了RT-PCR方法容易漏檢以及RT-LAMP方法容易污染的問題，并且實現(xiàn)了對病毒含量的定量檢測，是目前對豬瘟病毒疑似感染病例進行確診的最合適的方法。

2 豬瘟抗體監(jiān)測技術(shù)

合理、有效的免疫程序是提高群體免疫水平的保證，因此抗體水平的監(jiān)測是評價疫苗免疫效果的重要技術(shù)手段。常用的豬瘟抗體監(jiān)測方法有免疫熒光抗體中和試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、豬瘟正向間接血凝試驗（IHA）。

近年來隨著免疫學(xué)、標記技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)以及有關(guān)新型技術(shù)的發(fā)展，ELISA檢測技術(shù)取得了突破性進展，已發(fā)展出間接ELISA、阻斷ELISA、夾心ELISA、競爭ELISA、斑點ELISA和PPA-ELISA等，這些方法均已被用于豬瘟抗體的檢測，而其中豬瘟病毒間接ELISA和阻斷ELISA應(yīng)用最為廣泛，也是國際貿(mào)易指定的豬瘟抗體確診方法。同時一些新型檢測技術(shù)如疫芯片技術(shù)何熒光微球技術(shù)用于豬瘟抗體診斷的研究已經(jīng)顯示出良好的勢頭，開發(fā)這類技術(shù)用于豬瘟抗體的鑒別診斷具有良好的應(yīng)用前景。

豬瘟正向間接血凝試驗是利用CSFV致敏紅細胞，在適宜的電解質(zhì)存在的條件下，進行抗原抗體反應(yīng)，最終根據(jù)紅細胞的凝集判斷結(jié)果。該方法由于操作簡單，不需要特殊檢測儀器，肉眼即可判定結(jié)果，目前仍廣泛應(yīng)用于基層和技術(shù)落后地區(qū)，缺點是受主觀因素影響極大且重復(fù)性差。

間接ELISA是在已知抗原包被板中加入稀釋待檢血清，反應(yīng)后加入HRPO標記的葡萄球菌蛋白A或其他可與抗體結(jié)合物質(zhì)，加入底物顯色，酶標儀讀數(shù)后判定結(jié)果。該方法優(yōu)點是敏感性高，可用于大批量檢測；缺點是非特異性強，各試劑盒標準不一致，相關(guān)性差。

3 小結(jié)與展望

豬瘟目前仍是嚴重危害養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的疾病，采用正向間接血凝試驗和ELISA對豬瘟疫苗免疫效果進行檢測，采用熒光定量RT-PCR方法對豬瘟病毒感染的疑似病例進行確診是豬瘟防控和凈化的關(guān)鍵。雖然我國豬瘟檢測技術(shù)已經(jīng)實現(xiàn)了與國際的接軌，但相信隨著獸醫(yī)診斷技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，探索高通量自動化的檢測技術(shù)如生物芯片技術(shù)仍將是今后研究的熱點。

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