曾青華

摘 要：為探討寧鄉(xiāng)豬遺傳多樣性，本研究以外來豬種大白豬為對照，研究了寧鄉(xiāng)豬GLP2R基因的多態(tài)性。通過限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP）分析檢測了該基因A/G位點。結(jié)果表明，寧鄉(xiāng)豬全部為GG型，大圍子豬和黔邵花豬的優(yōu)勢等位基因都為G；而外來品種（大白豬）的優(yōu)勢等位基因為A，其基因頻率為0.6433，中外品種的差異較大。本研究為寧鄉(xiāng)豬的保種和選育提供了有益的資料。

關(guān)鍵詞：豬；GLP2R基因；遺傳多態(tài)性

寧鄉(xiāng)豬是我國著名的四大地方豬品種之一，原產(chǎn)于湖南省寧鄉(xiāng)縣的流沙河及草沖一帶，其特征是“絲頸葫蘆肚，耳薄嘴筒齊，稀毛現(xiàn)薄皮，魚尾后腳直，奶子一斬齊，四腳要撒蹄”、“烏云蓋雪銀頸圈”。其體型中等，體質(zhì)疏松細(xì)致，體軀呈圓筒狀，毛色為黑白花，四肢、肋腹及頸下部為白色，頭和臀部呈黑色。GLP2R屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族[1]。GLP2R為GLP2的特異性受體，GLP2與其受體結(jié)合從而發(fā)揮作 用[2-3]。Luo等[4]認(rèn)為GLP2R基因與豬肌內(nèi)脂肪含量有關(guān)。

本研究首次檢測了寧鄉(xiāng)豬GLP2R基因的多態(tài)性，旨在為揭示豬GLP2R基因的分子遺傳機制奠定基礎(chǔ)，并為寧鄉(xiāng)豬保種和選育提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

以4個地方豬種（大圍子豬、寧鄉(xiāng)豬、沙子嶺豬、黔邵花豬）和1個外來豬種（大白豬）為試驗材料，共計523頭，分別采取豬耳組織樣品，于-20 ℃保存。

1.2 基因組DNA提取

基因組DNA提取按常規(guī)酚-氯仿法進行。

1.3 引物合成及聚合酶鏈反應(yīng)擴增

用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計引物，其中正向引物：5'-ATG AGG CCG GAA CGG AGC CG-3'；反向引物：5'-CTA ATC TCA CTC TCC TCG AG-3'，由華大基因公司合成。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）體系：2×PCR Master·Mix 10 μL，雙蒸水8.0 μL，引物1.0 μL，基因組DNA 1.0 μL。PCR擴增程序：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s；55 ℃復(fù)性30 s；72 ℃延伸30 s，共35個循環(huán)；72 ℃延伸 5 min；4℃保存。

2 結(jié)果與分析

2.1 基因型分型

在擴增的746 bp的片段中，709 bp處A/G突變位點導(dǎo)致了限制性內(nèi)切酶BstE Ⅱ的變化。GLP2R基因的A/G位點存在3種基因型，分別為GG基因型（506 bp、240 bp）、AG基因型（746 bp、506 bp、240 bp）和AA基因型 （746 bp）（圖1）。

2.2 豬GLP2R基因的多態(tài)性分析

GLP2R基因A/G突變位點PCR-RFLP-BstEⅡ的基因和基因型頻率見表1。大圍子豬和黔邵花豬這兩個地方品種的優(yōu)勢等位基因都為G；而外來品種（大白豬）的優(yōu)勢等位基因為A，基因頻率為0.6433。從基因型分布頻率看，GG型占優(yōu)勢，AA型個體較少，只在沙子嶺豬中發(fā)現(xiàn)1個，在黔邵花豬中發(fā)現(xiàn)4個，在桃源黑豬中檢出15個；但大白豬中GG型較少（41個），而AA型和AG型分別有125個和127個。

3 討論與結(jié)論

寧鄉(xiāng)豬GLP2R基因A/G位點基因型全部為GG型，可能的原因是該品種經(jīng)過長期高度近交的人工選育，此位點已全部純合，這也反映了該品種比較純。大圍子豬在該位點也是全部為GG型。沙子嶺豬和黔邵花豬G等位基因為優(yōu)勢等位基因，而在外來品種（大白豬）中A等位基因為優(yōu)勢等位基因，這也反映了中外品種的遺傳背景差異大。在該位點上的差異有望作為品種標(biāo)記的一種手段，應(yīng)用于標(biāo)記輔助選擇?！酢?/p>

參考文獻：（4篇，略）