馬騰達(dá)　王慧玲　周鳳霞　王宇　高澤岳

摘要：伏馬菌素主要是由串珠鐮刀菌屬產(chǎn)生的一類有毒害和致癌性的真菌毒素，包括FB1、FB2、FB3等11種，其中，伏馬菌素B1（FB1）是主要組分，也是毒性最強(qiáng)的組分，主要污染玉米、小麥、稻米等糧食作物及其制品。正因?yàn)榉R菌素具有毒性，對(duì)伏馬菌素進(jìn)行研究具有重要意義。本文總結(jié)了當(dāng)前伏馬菌素的研究新進(jìn)展，以期為今后的研究提供參考。

關(guān)鍵詞：伏馬菌素;食品檢測(cè);新進(jìn)展

中圖分類號(hào)： TS213.4? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：? A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI編號(hào)：? ?10.14025/j.cnki.jlny.2019.12.043

采食含有FB1的飼料和食品，可導(dǎo)致人及動(dòng)物中毒，如馬的腦白質(zhì)軟化癥、豬肺水腫癥、大鼠肝癌、人類食管癌和肝癌等。國(guó)際癌癥研究中心（IARC）將FB1列為2B類致癌物質(zhì)（即人類可能致癌物），并對(duì)其在飼料及食品中含量做了限量（1～3m·kg-1）規(guī)定。因此，研究食品中伏馬菌素的檢測(cè)新進(jìn)展具有重大意義。

1 伏馬菌素在食品檢測(cè)中的研究新進(jìn)展

目前，檢測(cè)伏馬菌素的方法主要有儀器分析（高效液相色譜法、質(zhì)譜及液相色譜-質(zhì)譜）和免疫學(xué)。

近些年，由于伏馬菌素的強(qiáng)毒性作用，對(duì)其研究也備受關(guān)注。郭禮強(qiáng)等建立了芝麻醬中16種真菌毒素（赭曲霉毒素A、T-2毒素、伏馬菌素B2、伏馬菌素B1、O-甲基雜色曲霉素、蛇形菌素、新茄鐮孢菌醇、雜色曲霉素、黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2、曲酸、青霉酸、橘青霉素、黃曲霉毒素M1）多殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 （UPLC-MS/MS）的檢測(cè)方法。芝麻醬樣品經(jīng)乙腈-水-乙酸（80∶19∶1，體積分?jǐn)?shù)，下同）溶液提取，QuEChERS方法凈化后，以含0.1%甲酸的水溶液與乙腈為流動(dòng)相，經(jīng)ACQUI TY UPLC BEH C18 色譜柱（2.1mm×50mm，1.7μm）分離，以多級(jí)反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：16種真菌毒素的檢出限為0.03～1.5μg/kg，定量限為0.10～4.0μg/kg;線性范圍在0.10～200μg/kg內(nèi)各成分的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.991;樣品在定量限1倍、2倍和10倍三個(gè)添加水平下的平均回收率為70.7%～99.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為3.26%～10.5%。該方法簡(jiǎn)便、靈敏、快速，可用于芝麻醬中多種真菌毒素污染的監(jiān)控分析[1]。

姚靜靜等擬制備靈敏度高、特異性強(qiáng)的抗伏馬菌素B1（FB1）單克隆抗體，并初步應(yīng)用于FB1的檢測(cè)，以期為FB1的免疫學(xué)快速檢測(cè)提供技術(shù)支持。采用碳二亞胺法（EDC）制備人工抗原FB1-BSA 和FB1-OVA。以免疫原FB1-BSA免疫BALB/c小鼠，每四周免疫一次。四免后，小鼠脾B細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合后，采用ELISA篩選，建立分泌抗FB1抗體的單克隆雜交瘤細(xì)胞株;采用動(dòng)物體內(nèi)誘生腹水方法制備出抗FB1單抗，并鑒定單抗的各種性能;初步建立FB1免疫學(xué)檢測(cè)方法。結(jié)果得到1株穩(wěn)定分泌抗FB1 單抗的雜交瘤細(xì)胞株2E11-H3，該細(xì)胞株分泌的mAbs的效價(jià)高達(dá)1∶1.02×106，親和力常數(shù)平均值為7.98×1010L·mol-1，亞型為IgG3。FB1 mAbs的工作濃度為1∶6.0×104，與FB1發(fā)生特異性反應(yīng)，間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)得IC50=43.65ng·mL-1;與FB1結(jié)構(gòu)類似物FB2和FB3的交叉反應(yīng)率分別為385%和72.4%，與其他霉菌毒素及載體蛋白BSA和OVA均無(wú)交叉反應(yīng)。樣品回收率在85.85%～114.07%，平均值為98.81%;變異系數(shù)為10.11%。本研究制備出了靈敏度高、特異性強(qiáng)、親和力高的FB1單抗，并初步建立FB1免疫學(xué)檢測(cè)方法[2]。

任文潔等為制備一種快速檢測(cè)玉米中伏馬菌素B1（FB1 ）膠體金免疫層析試紙條。方法：采用碳化二亞胺法合成檢測(cè)抗原FB1-BSA，檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液，辛酸-飽和硫酸銨法對(duì)抗FB1單克隆抗體腹水進(jìn)行純化，將金標(biāo)抗體噴于金標(biāo)墊，檢測(cè)抗原FB1-BSA（T線）和羊抗鼠二抗（C線）噴涂于硝酸纖維素膜（NC膜）。結(jié)果：得到的單克隆抗體效價(jià)為1.28×105。該試紙條的NC膜噴涂的檢測(cè)抗原濃度為200 μg/mL，羊抗鼠二抗?jié)舛葹?.0mg/mL，噴涂量分別為0.74 μL/cm，試紙條靈敏度為20ng/mL，檢測(cè)時(shí)間只需5min，試紙條于4℃至少可保存12個(gè)月。結(jié)論：采用制備的試紙條對(duì)玉米實(shí)際樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果與高效液相和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果相一致，說(shuō)明該試紙條適合現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)伏馬菌素B1[3]。

2 展望

當(dāng)前，對(duì)于伏馬菌素的研究越來(lái)越火熱。由于其毒性強(qiáng)大而備受關(guān)注。因此，研究伏馬菌素的檢測(cè)方法就顯得更為重要。在研究過(guò)程中也總結(jié)出了很多方法，每種研究方法都有各自的特點(diǎn)。在以后的研究中，應(yīng)該致力于研究出更快，更加簡(jiǎn)單、實(shí)用的測(cè)定方法，以更好地為食品檢測(cè)服務(wù)。

參考文獻(xiàn)

[1]郭禮強(qiáng).超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定芝麻醬中16種真菌毒素[J].中國(guó)調(diào)味品，2017，42（10）：154-159.

[2]姚靜靜.伏馬菌素B1單克隆抗體的制備及免疫學(xué)檢測(cè)方法初步應(yīng)用[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，47（5）：1009-1017

[3]任文潔.伏馬菌素B1膠體金免疫層析快速檢測(cè)試紙條的研制[J].食品工業(yè)科技，2015，58（6）：58-63.