王娟 黃炳臣 吳雪銘 蘇群英 林潔 黃小英 龍喜帶

【摘要】?目的?探討雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、原癌基因人類表皮生長因子受體-2（Her-2）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、p53基因（p53）和增殖細(xì)胞核抗原（Ki67）在乳腺癌中的表達(dá)及臨床病理意義分析。方法?收集乳腺癌根治術(shù)標(biāo)本213例，通過免疫組織化學(xué)法檢測ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌組織中的表達(dá)，探討這些免疫組化指標(biāo)與臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果?（1）ER、PR和Ki67與組織學(xué)分級及臨床分期有關(guān)（P<0.05）。（2）Her-2與組織學(xué)分級及組織學(xué)分類有關(guān)（P<0.05）。（3）p53與組織學(xué)分級及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）。（4）VEGF與腫瘤組織學(xué)分級、臨床分期及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）。進(jìn)一步Pearson相關(guān)分析顯示，ER和PR與乳腺癌組織分化程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.221，r=-0.258，P<0.05）;Her-2、p53、Ki67和VEGF與乳腺癌組織分化程度呈正相關(guān)（r=0.231，r=0.288，r=0.063，r=0.217，P<0.05）。

結(jié)論?通過檢測ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67多項(xiàng)免疫組化指標(biāo)的表達(dá)情況，可為臨床有效判斷乳腺癌患者的惡性程度及轉(zhuǎn)移情況提供參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】?乳腺癌;免疫組化;病理分析

中圖分類號：R737.9?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2019.03.002

【Abstract】?Objective?To investigate the analysis on expressions and clinicopathological significance of estrogen receptor（ER），progesterone receptor（PR），human epidermal growth factor receptor-2（Her-2），vascular endothelial growth factor（VEGF），p53 gene（p53） and Ki67 antigen（Ki67）.Methods?A total of 213 specimens of radical mastectomy were collected.And then，immunohistochemistry was used to detect the expressions of ER，PR，Her-2，VEGF，p53 and Ki67 in breast cancer，and relationship between these immunohistochemical parameters and clinicopathological features was explored.Results?（1）ER，PR and Ki67 were associated with histological grade and clinical stage（P<0.05）.（2） Her-2 were related to histological grade and histological classification（P<0.05）.（3） p53 was significantly associated with histological grade and lymph node metastasis（P<0.05）.（4） VEGF was associated with tumor histological grade，clinical stage and lymph node metastasis（P<0.05）.Further Pearson correlation analysis showed that ER and PR were negatively correlated with the differentiation degree of breast cancer（r=-0.221，r=-0.258，P<0.05）;Her-2，p53，Ki67 and VEGF were positively correlated with the differentiation of breast cancer（r=0.231，r=0.288，r=0.063，r=0.217，P<0.05）.

Conclusion?By detecting the expressions of multiple immunohistochemical indexes including ER，PR，Her-2，VEGF，p53 and Ki67，it can provide a reference basis for effectively judging the malignant degree and metastasis of breast cancer patients.

【Key words】?breast cancer;immunohistochemistry;pathological analysis

乳腺癌作為一種激素依賴性和異質(zhì)性腫瘤，是女性最常見的癌癥，其發(fā)病率逐年上升且呈年輕化的趨勢[1～3]。盡管相關(guān)研究取得了大量實(shí)質(zhì)性的研究成果，有望改善乳腺癌的化療、放療以及手術(shù)治療的療效，然而乳腺癌細(xì)胞仍然會(huì)擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移到機(jī)體的其他部位，這對于研究人員而言或許是一大挑戰(zhàn)。相關(guān)研究表明乳腺癌的發(fā)病機(jī)制是多基因、多因素和多階段演變的過程[4]。目前，對于雌激素受體（Estrogen receptor，ER）、孕激素受體（Progesterone receptor，PR）、原癌基因人類表皮生長因子受體-2（Human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、p53基因（p53 gene，p53）和增殖細(xì)胞核抗原（Ki67 antigen，Ki67）等腫瘤標(biāo)志物在乳腺癌中的研究受到學(xué)者的關(guān)注。本研究通過探討ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌中的表達(dá)及臨床病理意義，為臨床有效判斷乳腺癌患者的惡性程度及轉(zhuǎn)移情況提供參考依據(jù)。

1?資料與方法

1.1?研究對象

入選標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)病理診斷確診為乳腺癌的患者、術(shù)前無放療與化療者、具有完整的臨床病歷資料、具有可供研究的合適組織樣本、患者本人同意參加本次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)為：未經(jīng)病理組織診斷確認(rèn)者、術(shù)前有放化療史者、資料不完整者、無可用于研究分析的合適樣本者、不同意參加者。根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)，共收集符合要求的213例乳腺癌病例，收集所有研究對象的石蠟組織標(biāo)本用于檢測乳腺癌中ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67的表達(dá)，且均具有完整的臨床病歷資料;組織學(xué)分級根據(jù)改良Bloom-Richardson半定量組織學(xué)分級判定。213例乳腺癌患者中，乳腺浸潤性導(dǎo)管癌203例、乳腺浸潤性小葉癌9例、乳腺髓樣癌1例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移109例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移104例。

1.2?研究方法

采用組織病理切片：用10%中性福爾馬林對標(biāo)本進(jìn)行固定、常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片厚度為4 μm，HE染色，鏡下觀察。IHC法：實(shí)驗(yàn)組所用一抗分別為ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67;對照組使用PBS緩沖液替代一抗作為陰性對照?？贵w和試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，所有操作步驟均按照說明書進(jìn)行。

1.3?免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷

免疫組化指標(biāo)陽性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：ER、PR、p53及Ki67定位為癌細(xì)胞核，陽性表達(dá)即細(xì)胞核有淡黃、棕黃色或者棕褐色顆粒，在隨意5個(gè)高倍鏡下觀察陽性細(xì)胞的比例[5]：陽性細(xì)胞比例不足10%為陰性，超過10%為陽性;Her-2定位于細(xì)胞膜，陽性表達(dá)時(shí)其細(xì)胞膜有棕黃色顆粒;VEGF染色的癌細(xì)胞胞漿呈棕褐色。

1.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，免疫組化指標(biāo)表達(dá)的差異比較采用卡方檢驗(yàn);采用Pearson進(jìn)行相關(guān)性分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2?結(jié)果

2.1?乳腺癌組織免疫組化指標(biāo)陽性率比較

ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌組織免疫組化陽性率分別為61.97%（132/213）、55.87%（119/213）、58.69%（125/213）、53.52%（114/213）、46.01%（98/213）、73.71%（157/213），各免疫組化指標(biāo)陽性率相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=37.749，v=5，P<0.001）。見表1;免疫組化陽性表達(dá)定位情況見圖1。

2.2?乳腺癌組織中ER、PR及Her-2表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系分析

ER、PR與臨床分期及組織學(xué)分級有關(guān)（P<0.05），與患者的年齡、腫瘤的大小、組織學(xué)類型及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性（P>0.05）;Her-2與組織學(xué)分級及組織學(xué)類型有關(guān)（P<0.05），與患者的年齡、臨床分期、腫瘤的大小及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性（P>0.05）。見表2。

2.3?乳腺癌組織中VEGF、p53和Ki67表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系分析

Ki67與組織學(xué)分級和臨床分期有關(guān)（P<0.05），與其他無相關(guān)性（P>0.05）;p53與組織學(xué)分級及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05），與其他無相關(guān)性（P>0.05）;VEGF與腫瘤組織學(xué)分級、臨床分期及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05），與其他無相關(guān)性（P>0.05）。見表3。

2.4?ER、PR、Her-2、p53、Ki67和VEGF表達(dá)與組織分化程度相關(guān)性分析

通過Pearson分析，免疫組化指標(biāo)與組織分化程度的相關(guān)性分析結(jié)果顯示：ER和PR與乳腺癌組織分化程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.221，r=-0.258，P<0.05）;Her-2、p53、Ki67和VEGF與乳腺癌組織分化程度呈正相關(guān)（r=0.231，r=0.288，r=0.063，r=0.217，P<0.05）。見表4。

3?討論

近年來，乳腺癌的發(fā)病率逐年上升，有關(guān)乳腺癌發(fā)生過程中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)是什么、哪些分子發(fā)揮著重要的作用以及有關(guān)乳腺癌的免疫逃逸療法尚未得到闡明。因此，如何早期診斷乳腺癌、有效評價(jià)治療效果、準(zhǔn)確判斷預(yù)后和早期發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)病例等已成為臨床關(guān)注的熱點(diǎn)問題[6]。

3.1?ER、PR與乳腺癌

乳腺癌是依賴激素生長的腫瘤，其生長與雌、孕激素的異常有著密切關(guān)系。據(jù)報(bào)道，70%的乳腺癌患者ER呈陽性。Xue等[7]認(rèn)為降低患者自身雌激素水平或阻斷ER介導(dǎo)的細(xì)胞信號被認(rèn)為是乳腺癌治療的有效方法。本研究發(fā)現(xiàn)，ER、PR在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率分別為61.97%（132/213）、55.87%（119/213），與腫瘤大小無顯著關(guān)系，此結(jié)果與余輝等人[8]的研究結(jié)果基本一致。此外，本研究發(fā)現(xiàn)ER、PR與組織學(xué)分級及臨床分期有關(guān)，表明乳腺癌患者的惡性程度與ER、PR在癌組織中的陽性表達(dá)率呈負(fù)相關(guān)，臨床病理分期Ⅰ～Ⅱ期ER、PR的陽性表達(dá)率較高，與腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)，與于喜法等[9]的研究結(jié)果相一致。目前，有文獻(xiàn)表明ER表達(dá)陽性者5年生存率較陰性者高，且ER陰性患者腫瘤復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移率均較陽性患者高。此外有文獻(xiàn)報(bào)道ER和PR均為陰性者，腫瘤侵襲性較強(qiáng)、惡性程度高，遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移概率大且預(yù)后較差，故ER和PR表達(dá)是判斷乳腺癌患者長期預(yù)后的重要指標(biāo)[10]。

3.2?VEGF與乳腺癌

在腫瘤生長過程中，新生毛細(xì)血管具有為腫瘤提供營養(yǎng)和協(xié)助癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移等功能。VEGF是腫瘤毛細(xì)血管形成的關(guān)鍵因子之一，參與新血管生成。因此，如何抑制腫瘤的新生毛細(xì)血管形成是目前腫瘤新的研究方向[11]。王偉等人[12]通過免疫組化法檢測50例乳腺癌患者根治手術(shù)切除的癌組織標(biāo)本和癌旁標(biāo)本中的VEGF表達(dá)情況，結(jié)果表明VEGF在乳腺癌中陽性表達(dá)顯著高于癌旁組織，其表達(dá)強(qiáng)度與組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，本研究結(jié)果與其基本一致。另外研究發(fā)現(xiàn)，VEGF與乳腺癌組織的發(fā)生、浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[13]，表明VEGF亦是臨床判斷乳腺癌轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)之一[14]。綜上文獻(xiàn)所述，VEGF在乳腺癌發(fā)展過程中起著重要作用，與腫瘤的惡性程度、浸潤和轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)系。

3.3?Her-2、p53與乳腺癌

隨著學(xué)者對Her-2研究的深入，發(fā)現(xiàn)其與機(jī)體多種惡性腫瘤有著密切的關(guān)系，尤其是與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[15]。研究發(fā)現(xiàn)Her-2被認(rèn)為是判斷乳腺癌患者預(yù)后和分子靶向治療的關(guān)鍵標(biāo)志物[16]，Her-2過表達(dá)時(shí)乳腺癌預(yù)后較差[17]。有文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)Her-2陽性表達(dá)的腫瘤多同步伴隨p53基因突變，在腫瘤耐藥性方面具有協(xié)同效應(yīng)，共同影響患者的病情、預(yù)后及化療效果[18]。由于當(dāng)前對p53和Her-2相互協(xié)同作用的認(rèn)識依然有限，尚需進(jìn)一步深入探討。本研究結(jié)果顯示Her-2與組織學(xué)分級及組織學(xué)類型有關(guān)（P<0.05），p53與組織學(xué)分級及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性（P<0.05），組織學(xué)分級越高，兩者在乳腺癌患者癌變組織中的陽性表達(dá)率越高，猜測Her-2、p53是重要的乳腺癌生物學(xué)行為及預(yù)后評估指標(biāo)。

3.4?Ki67與乳腺癌

學(xué)者將Ki67的表達(dá)強(qiáng)度分為低度、中度和高度，以此指導(dǎo)臨床治療[19]。Tobin等人[20]發(fā)現(xiàn)Ki67與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。Denkert等[21]發(fā)現(xiàn)組織學(xué)分級越高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，Ki67陽性表達(dá)率越高，其癌細(xì)胞增殖活性越高、預(yù)后越差，推測Ki67參與了乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)Ki67陽性表達(dá)與組織學(xué)分級和臨床分期有關(guān)（P<0.05），組織學(xué)分級越高、臨床分期越高的乳腺癌患者，其Ki67陽性表達(dá)率越高。

綜上所述，通過Pearson分析，ER和PR與乳腺癌組織分化程度呈負(fù)相關(guān)，Her-2、p53、Ki67和VEGF與乳腺癌組織分化程度呈正相關(guān)。因此，通過檢測ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67多項(xiàng)免疫組化指標(biāo)的表達(dá)情況，可為臨床有效判斷乳腺癌患者的惡性程度及轉(zhuǎn)移情況提供參考依據(jù)。

參?考?文?獻(xiàn)

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（收稿日期：2018-12-26?修回日期：2019-02-26）

（編輯：潘明志）