張 洋，王顯赫*,吳祥紅,王 影,常 璐

(1.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院 兒內(nèi)一科，黑龍江 佳木斯154000；2.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院 兒內(nèi)二科，黑龍江 佳木斯154000;3.佳木斯大學，黑龍江 佳木斯154007)

早產(chǎn)兒腦損傷(Brain damage of prematurity,BIPI)是嚴重威脅新生兒健康和導(dǎo)致其致殘、致死的主要原因[1]。通常，BIPI導(dǎo)致早產(chǎn)兒神經(jīng)發(fā)育障礙、運動功能缺損、認知及行為異常[2,3]。隨著圍產(chǎn)醫(yī)學的不斷進步，早產(chǎn)兒的存活率顯著提高，但BIPI的發(fā)生率也卻逐漸增加[4]。研究表明，胎齡、宮內(nèi)嚴重感染及剖宮產(chǎn)均是導(dǎo)致BIPI的重要因素[5]。

Toll樣受體4 (Toll-like receptor-4,TLR4)作為一種胞外富含亮氨酸重復(fù)域和細胞質(zhì)信號域的跨膜受體蛋白，能激活NF-kB、TNF-α、IL-1β等，從而引起炎癥級聯(lián)反應(yīng)和調(diào)節(jié)前炎癥因子的釋放[6,7]。Cui HX等發(fā)現(xiàn)花青素能夠通過抑制TLR4/NF-kB信號通路，從而促進腦缺血再灌注損傷神經(jīng)功能的恢復(fù)[8]。Sun Y等指出體育鍛煉將抑制TLR4/NF-kB信號通路的激活，從而減少炎癥因子的釋放，最終促進脊髓損傷患者神經(jīng)功能的恢復(fù)[9]。在本實驗中，我們通過聯(lián)合檢測BIPI患者TLR4與NF-kB的表達，分析兩者在BIPI診斷中的價值，從而為BIPI患者的臨床診斷提供重要依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年12月至2018年12月我院新生兒科收治的BIPI 患者30例作為實驗組。同時，選取同期住院的無腦損傷早產(chǎn)兒30例作為對照組。其中，所有入選研究對象均為男嬰，胎齡為30±2周，出生體重為1 500 g±200 g。此外，排除母親患甲狀腺疾病，胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形、、先天性心臟病、遺傳代謝紊亂、膽紅素腦病、TORCH感染等。

1.2 BIPI診斷標準

根據(jù)2012版《早產(chǎn)兒腦損傷診斷與防治專家共識》和結(jié)合頭顱MRI進行診斷。按照神經(jīng)病理學分類及方法，腦損傷納入標準為：①腦白質(zhì)損傷(whitematterdamage,WMD)，PVL、腦室周圍出血性梗死、缺血性腦梗死、晚期的腦室擴張；②非腦實質(zhì)區(qū)的出血及其他部位損傷，如GMH-IVH、IVH、蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage，SAH)、脈絡(luò)叢出血、小腦、基底節(jié)、腦干出血等。常規(guī)頭顱MRI表現(xiàn)：①白質(zhì)非出血性損傷：早期T1WI可見白質(zhì)區(qū)域的高信號，T2WI則為低信號或者等信號；后期白質(zhì)區(qū)域的T1WI信號消失或表現(xiàn)為低信號或白質(zhì)容積減少，T2WI呈現(xiàn)為高信號或者表現(xiàn)為彌漫性過度高信號，嚴重者有腦室形態(tài)改變。②出血在頭顱MRI的表現(xiàn)：早期出血呈現(xiàn)在T1WI上為高信號，T2WI上為低信號，后期在T1WI、T2WI上出血區(qū)均為高信號。根據(jù)頭顱MRI結(jié)果，分為腦損傷組及非腦損傷組，出現(xiàn)分類中任何一種形式即納入實驗組。

1.3 樣本采集

分別采集出生后1 d、3 d、7 d實驗組和對照組患者外周靜脈血5 ml，后置于高速冷凍離心機中離心10分鐘(3 000 r/min)。收集上清液于EP管內(nèi)，-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 檢測方法

采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)分別檢測實驗組和對照組樣本中TLR4與NF-kB的表達水平。試劑盒購買自美國RayBiotech公司，具體實驗方法按照說明書進行。

1.5 統(tǒng)計學方法

通過SPSS19.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，計量資料表示為均數(shù)±標準差。采用T檢驗進行比較，P<0.05表示有統(tǒng)計學差異。

2 結(jié)果

2.1 一般資料及常規(guī)生化指標結(jié)果

各組別之間進行比較，結(jié)果表明對照組和實驗組性別、胎齡、出生體重均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 不同組一般臨床資料及生化指標比較

2.2 TLR4和NF-kB的表達水平

為了調(diào)查TLR4和NF-kB在BIPI中的表達水平，我們利用ELISA法分別檢測實驗組和對照組1 d、3 d、7 d外周靜脈血中TLR4與NF-kB的含量。結(jié)果表明，1 d、3 d和7 d實驗組血清TLR4含量均明顯高于對照組(圖1A,P<0.05)。同時，1 d、3 d和7 d實驗組血清NF-kB表達水平均明顯高于對照組(圖1B,P<0.05)。

(A)TLR4在不同組的表達水平；(B)NF-kB在不同組的表達水平。*P<0.05，對照組與實驗組比較差異有統(tǒng)計學意義。

2.3 TLR4和NF-kB與BIPI的相關(guān)性分析

由表2可知，TLR4和NF-kB與BIPI呈正相關(guān)(P<0.05)。

表2 TLR4和NF-kB與BIPI相關(guān)性分析

3 討論

早產(chǎn)兒腦損傷(Brain damage of prematurity,BIPI)是一種好發(fā)于早產(chǎn)兒的臨床常見疾病，其主要由于胎兒出生時腦部組織發(fā)育不成熟，腦組織極易受到缺氧、缺血環(huán)境的影響，從而引起顱內(nèi)出血或腦白質(zhì)損傷[10]等。通常，BIPI將導(dǎo)致患兒神經(jīng)發(fā)育遲緩、智力低下、腦癱、言語障礙及行為異常等，甚至還會引起患兒急性死亡[2,3,11]。因此，對BIPI實施早期監(jiān)測和干預(yù)，避免或減輕后遺癥的發(fā)生，對改善患兒生活質(zhì)量和預(yù)后具有重要意義。

TLR4在中樞神經(jīng)系統(tǒng)高表達，其與相應(yīng)配體結(jié)合后將激活NF-KB，從而進一步調(diào)節(jié)多種細胞因子的表達[12]。研究表明，TLR4缺失將導(dǎo)致炎癥因子表達下調(diào)，從而減輕小鼠腦部缺血再灌注損傷[13]。在大腦中動脈閉塞小鼠模型中，NF-KB表達明顯上調(diào)，而在TLR4敲除后大腦中動脈閉塞小鼠中發(fā)現(xiàn)NF-KB表達降低，表明TLR4/NF-KB信號通路在腦缺血損傷過程中發(fā)揮重要作用[14]。Wang SL等發(fā)現(xiàn)右美托咪啶可以通過抑制TLR4/NF-KB 信號通路，從而在腦缺血再灌注損傷中發(fā)揮神經(jīng)保護作用[15]。

在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)實驗組1 d、3 d和7 d血清中TLR4和NF-kB表達水平均明顯高于對照組。該結(jié)果表明，TLR4和NF-kB共同參與了BIPI的發(fā)生與發(fā)展，血清中TLR4和NF-kB聯(lián)合檢測將有助于BIPI的早期診斷及病情嚴重程度的判斷。