趙 璞，楊軍峰，董冠中，何 苡

(河南省人民醫(yī)院 胸外一科,河南 鄭州450003)

長(zhǎng)期的流行病學(xué)研究證實(shí)，2010-2017年我國(guó)肺腺癌平均發(fā)病率可達(dá)2384-2483/10萬(wàn)人左右[1]。肺腺癌患者的五年生存率不足45%，中位生存時(shí)間不超過(guò)38個(gè)月[2]。在對(duì)于肺腺癌相關(guān)基因或者蛋白水平的研究中發(fā)現(xiàn)，不同腫瘤調(diào)控蛋白的表達(dá)，能夠通過(guò)影響肺部腺體上皮細(xì)胞的侵襲和增殖過(guò)程，進(jìn)而參與肺腺癌的發(fā)生發(fā)展。RNA結(jié)合蛋白(RNPC1)的表達(dá)能夠通過(guò)結(jié)合微RNA，進(jìn)而參與到腫瘤細(xì)胞的增殖調(diào)控、轉(zhuǎn)錄及癌細(xì)胞的分化誘導(dǎo)過(guò)程中。RNPC1的表達(dá)上升能夠?qū)е律掀ぜ?xì)胞DNA擴(kuò)增風(fēng)險(xiǎn)的顯著增加，并誘導(dǎo)其浸潤(rùn)臨近的正常上皮組織[3]；S100A6蛋白是鈣結(jié)合蛋白家族的成員，能夠通過(guò)結(jié)合鈣離子進(jìn)而促進(jìn)上皮細(xì)胞間質(zhì)成分的分解，提高癌細(xì)胞的變形和擴(kuò)散的能力[4]。部分研究者報(bào)道了S100A6蛋白在卵巢癌或者宮頸患者中的表達(dá)情況[5]，認(rèn)為S100A6蛋白的表達(dá)上升能夠顯著促進(jìn)宮頸癌的臨床分期進(jìn)展和臨床預(yù)后的惡化[6]，但在肺腺癌患者中的研究不足。為了深入揭示RNPC1、S100A6蛋白的表達(dá)與肺腺癌的關(guān)系，本研究選取2015年1月至2018年3月我院保存的肺腺癌組織標(biāo)本81例，探討RNPC1、S100A6蛋白的表達(dá)與肺腺癌的臨床病理特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用回顧性方法，選取2015年1月至2018年3月我院保存的肺腺癌組織標(biāo)本81例，其中男性55例，女性26例，年齡40-70歲，中位年齡57歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均經(jīng)病理組織學(xué)確診；(2)臨床病理資料保存完整；(3)患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)術(shù)前已行放化療等抗腫瘤治療；(2)合并其他惡性腫瘤。同時(shí)選取癌旁組織(距癌邊緣>5 cm)作為對(duì)照。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

所有組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4 mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復(fù)合體法 (strep avidin—biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。PNPC1、S100A6蛋白通用型二抗、SP試劑盒和DAB顯色盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。以陽(yáng)性片及PBS代替一抗分別作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照，在高倍顯微鏡下觀察PNPC1、S100A6蛋白的表達(dá)情況，具體染色步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果判斷

PNPC1、S100A6蛋白表達(dá)以胞內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性，采用半定量積分法，隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡下視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)價(jià)。陽(yáng)性細(xì)胞比例：<10%為0分，10%-49%為1分，50%-69%為2分，≥70%為3分；染色強(qiáng)度：無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕褐色為3分。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度評(píng)分之和，總分≥4分為陽(yáng)性表達(dá)，<4分為陰性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 19.0軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺腺癌組織和癌旁組織RNPC1、S100A6蛋白陽(yáng)性表達(dá)

肺腺癌組織RNPC1和S100A6蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.37%和81.49%，明顯高于癌旁組織的16.05%和27.17%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1、圖1。

表1 肺腺癌組織和癌旁組織RNPC1、S100A6蛋白陽(yáng)性表達(dá) 例(%)

2.2 RNPC1、S100A6蛋白表達(dá)與肺腺癌臨床病理特征的關(guān)系

RNPC1表達(dá)與肺腺癌患者吸煙、TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；S100A6蛋白表達(dá)與肺腺癌患者吸煙、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 相關(guān)性分析

RNPC1與S100A6蛋白表達(dá)雙陽(yáng)性55例，雙陰性13例，經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，RNPC1與S100A6蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.595，P<0.05)，見(jiàn)表3。

3 討論

在長(zhǎng)期吸煙的人群中，肺泡上皮細(xì)胞的癌變風(fēng)險(xiǎn)可顯著的上升。長(zhǎng)期外在的病理性刺激因素及內(nèi)在的遺傳易感基因的攜帶等，均能夠?qū)е路伟┌l(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的上升[7,8]。治療隨訪研究顯示，現(xiàn)階段臨床上肺癌手術(shù)治療后的病情緩解率較低，同時(shí)綜合性措施治療后的患者5年內(nèi)的病死率并無(wú)顯著的下降[9,10]。而免疫靶向治療能夠在輔助治療肺癌的過(guò)程中發(fā)揮一定的作用，本次研究對(duì)于肺癌病灶組織中的腫瘤相關(guān)蛋白的分析，能夠?yàn)榕R床上肺癌患者的免疫靶向治療提供理論作用靶點(diǎn)，并能夠?yàn)榉伟┗颊叩呐R床病情評(píng)估提供免疫組化分析指標(biāo)。

×400；A：肺腺癌組織RNPC1陽(yáng)性表達(dá)；B：肺腺癌組織S100A6蛋白陽(yáng)性表達(dá)；C：癌旁組織RNPC1陽(yáng)性表達(dá)；D：癌旁組織S100A6蛋白陽(yáng)性表達(dá)

表2 RNPC1、S100A6蛋白表達(dá)與肺腺癌臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

表3 相關(guān)性分析

RNPC1對(duì)于RNA的結(jié)合作用，能夠交錯(cuò)式激活患者體內(nèi)的癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，提高癌細(xì)胞DNA的擴(kuò)增速度。RNPC1對(duì)于微小RNA的調(diào)控作用，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞膜表面糖蛋白配體的激活，促進(jìn)癌細(xì)胞細(xì)胞周期調(diào)控依賴性蛋白激活的轉(zhuǎn)錄及翻譯，增加G1/S期比例[11]；S100A6蛋白能夠通過(guò)結(jié)合鈣離子，提高膠原蛋白酶的激活，促進(jìn)細(xì)胞間質(zhì)成分的分解。S100A6蛋白的表達(dá)還能夠提高癌細(xì)胞的突破基底膜的能力，導(dǎo)致癌細(xì)胞對(duì)于間質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力的顯著增強(qiáng)。同時(shí)基礎(chǔ)領(lǐng)域的研究也證實(shí)，S100A6蛋白的上升能夠影響上皮細(xì)胞的分化成熟過(guò)程，導(dǎo)致癌細(xì)胞低分化和中度分化比例的上升[12]。部分研究者報(bào)道了S100A6蛋白在肺癌患者中的表達(dá)情況，認(rèn)為S100A6蛋白的表達(dá)上升能夠顯著促進(jìn)肺癌的病情進(jìn)展，導(dǎo)致患者放化療敏感性的下降[4]，但在肺腺癌患者中的研究較少。

本次研究通過(guò)對(duì)于肺腺癌患者免疫組化的分析研究提示，RNPC1、S100A6蛋白在肺腺癌病灶組織中的表達(dá)陽(yáng)性率明顯的上升，高于癌旁組織，差異較為明顯，提示了RNPC1、S100A6蛋白的高表達(dá)均能夠影響到肺腺癌的病情進(jìn)展過(guò)程。通過(guò)匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要由于RNPC1、S100A6蛋白的下列的作用有關(guān)[13,14]：(1)RNPC1的表達(dá)上升，能夠影響到轉(zhuǎn)錄RNA的調(diào)控水平，導(dǎo)致下游肺泡上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄和增殖活性明顯的增強(qiáng)；(2)S100A6的表達(dá)上升，能夠通過(guò)促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程，進(jìn)而提高了肺泡上皮細(xì)胞的浸潤(rùn)能力。南巖東等[15]研究者在探討了不同病情的肺腺癌患者免疫組化資料的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，在肺腺癌患者中，S100A6的表達(dá)陽(yáng)性率可平均上升30%以上，特別是在短期內(nèi)病情進(jìn)展速度較快或者高腫瘤負(fù)荷較高的患者中，S100A6蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可進(jìn)一步的升高。免疫組化染色分析可見(jiàn)，在細(xì)胞異型性較為明顯的區(qū)域，RNPC1、S100A6蛋白的染色強(qiáng)度較深，推測(cè)二者可能在影響到癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變方面發(fā)揮了重要作用。在探討RNPC1、S100A6蛋白的表達(dá)與肺腺癌患者臨床病理特征的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、癌細(xì)胞分化程度較差或者臨床分期較晚的患者中，RNPC1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可顯著的上升，提示了RNPC1蛋白對(duì)于肺腺癌臨床病理特征進(jìn)展的影響，這主要由于RNPC1的表達(dá)能夠提高癌細(xì)胞粘附淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的能力，促進(jìn)癌細(xì)胞對(duì)于臨近正常肺泡上皮組織的浸潤(rùn)過(guò)程；而在臨床分期較晚或者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，S100A6蛋白的表達(dá)也明顯的上升，但并未發(fā)現(xiàn)S100A6蛋白的表達(dá)與癌細(xì)胞分化程度的關(guān)系，提示S100A6蛋白并不能誘導(dǎo)癌細(xì)胞分化成熟過(guò)程。相關(guān)關(guān)系分析也可見(jiàn)，RNPC1與S100A6蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，提示RNPC1、S100A6在促進(jìn)肺腺癌的病情進(jìn)展過(guò)程中可能發(fā)揮了一定協(xié)同作用。

綜上所述，RNPC1、S100A6在肺腺癌患者中的表達(dá)陽(yáng)性率明顯的上升，RNPC1、S100A6的表達(dá)與肺腺癌患者臨床病理特征的進(jìn)展密切相關(guān)。后續(xù)臨床相關(guān)研究可以深入探討RNPC1、S100A6的表達(dá)與肺腺癌患者的臨床轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。