劉淼

摘 要：為明確戊唑醇與丙森鋅聯(lián)合作用性質(zhì)并篩選混用的最佳配比，本文采用菌絲生長速率法測定不同配比的藥劑對蘋果斑點落葉病菌的抑制率。室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，兩者分別以1：4、1：6混配時表現(xiàn)出一定的增效作用，且以1：4時增效比值最大。

關(guān)鍵詞：菌絲生長速率法；戊唑醇；丙森鋅；蘋果斑點落葉病；抑制率

中圖分類號：S432.4+4 文獻標識碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20190515005

蘋果斑點落葉病也被稱作是早期落葉病，其是蘋果經(jīng)常出現(xiàn)的病害，此病害涵蓋了全部蘋果產(chǎn)區(qū)，在發(fā)病較為嚴重的時候，常常出現(xiàn)蘋果樹提前落葉的現(xiàn)象，進而對蘋果樹的正常生長產(chǎn)生嚴重的影響，導致蘋果果實的產(chǎn)量降低。

丙森鋅為丙撐雙二硫代氨基甲酸鋅的聚合物，是一種廣譜的保護性有機硫殺菌劑，作用的靶標位點較多，產(chǎn)生抗藥性的風險較低，且含有易被葉片吸收的鋅元素，可以提高果實品質(zhì)和坐果率。戊唑醇主要是幽醇生物經(jīng)過合成形成的抑制劑，其屬于三唑類殺菌劑，可以有效制約C-14α-脫氧甲基酶的具體火星，進而對真菌的生物合成作用產(chǎn)生干擾作用，充分發(fā)揮出自身的抗真菌作用，然而，三唑類殺菌劑的位點較為簡單，如若長時間進行使用會導致病原真菌出現(xiàn)抗藥性。為延緩抗藥性的產(chǎn)生，本文將戊唑醇和丙森鋅混配，采用菌絲生長法測定混配藥劑對蘋果斑點落葉病菌的抑制率，并找出最佳配比，為田間使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試靶標及培養(yǎng)條件

蘋果斑點落葉病菌（Alternaria mali），主要是實驗室分離之后進行儲存，把冰箱4℃儲存的病菌菌種轉(zhuǎn)移到PDA培養(yǎng)基當中，并且在28℃的培養(yǎng)箱當中進行培養(yǎng)，保證其活性，通過2次轉(zhuǎn)接之后進行備用。

1.2 試驗藥劑

戊唑醇原藥（tebuconazole），含量97%（百農(nóng)思達（山東）農(nóng)用化學品有限公司提供）。

丙森鋅原藥（propineb），含量85%（百農(nóng)思達（山東）農(nóng)用化學品有限公司提供）。

藥劑配制方法：取0.103g戊唑醇原藥溶解于20g二甲基甲酰胺，加入0.1%的NP-10水溶液定容至1000mL，制成濃度為100mg/L的透明乳液。

丙森鋅原藥用行業(yè)標準推薦的方法不能配出試驗所需劑量，所以采用以下方法配制。

將丙森鋅配制成1%懸浮劑母液，配方是：原藥1.176g，農(nóng)乳500 1.00g，乳化劑1602 2.00g，黃原膠0.20g，去離子水95.62g，砂磨機研磨1h。

空白對照：乳化劑1602 2.00g，農(nóng)乳500 1.00g，黃原膠0.20g，二甲基甲酰胺2.00g，用含0.1%的NP-10的水溶液定容至100mL當做空白比對。

1.3 試驗處理

1.3.1 劑量設(shè)置

經(jīng)過相應(yīng)的預試明確各個藥劑制約濃度范圍之后，各個藥劑要根據(jù)其成分的實際含量設(shè)置5個劑量，其劑量處理情況如下：

戊唑醇：0.01、0.05、0.5、2、10mg/L

丙森鋅：50、100、200、400、600mg/L

[戊唑醇：丙森鋅（1：1）]：0.1、0.5、1、5、50mg/L

[戊唑醇：丙森鋅（1：2）]：0.1、0.5、2、10、50mg/L

[戊唑醇：丙森鋅（1：4）]：0.1、0.5、5、10、50mg/L

[戊唑醇：丙森鋅（1：6）]：0.1、1、2、10、100mg/L

[戊唑醇：丙森鋅（1：8）]：0.5、1、5、10、100mg/L

空白對照：空白對照母液稀釋10倍。

1.3.2 試驗重復

每個濃度處理重復4次。

1.3.3 試驗時間和次數(shù)

本試驗于2018年12月21日用藥1次。

2 試驗方法

試驗依據(jù)中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準（殺菌劑）NY/T 1156.2-2006、NY/T 1156.6-2006進行。該試驗主要使用菌絲生長方法明確藥劑是否可以限制蘋果出現(xiàn)斑點落葉，并且制約病毒的活性，其步驟如下：通過轉(zhuǎn)接火花之后的蘋果病菌菌株使用PDA培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，在其菌株成長到3/4的時候，使用內(nèi)徑是8mm的打孔器在邊緣位置上進行打孔操作，之后的菌絲塊當做是接種體。選擇配置好的濃度是設(shè)計10倍的藥液5mL以及45mL的PDA培養(yǎng)基進行混合，之后倒進4個培養(yǎng)皿當中，在其冷卻之后支撐相應(yīng)的平板，使用藥劑空包比對和培養(yǎng)基之間進行混合，然后進行對照，把經(jīng)過接種的菌絲塊放入到平板的中間位置，然后放進28℃的培養(yǎng)箱當中進行培養(yǎng)。

3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

3.1 調(diào)查方法

在空白對照的相應(yīng)培養(yǎng)皿當中，在其菌絲成長到2/3的時候，要及時調(diào)整菌絲的實際生長情況，使用直尺對其菌落直徑進行測量工作，其單位主要使用mm，各個菌落使用十字交叉方法測量其直徑，之后選擇器平均數(shù)值。

3.2 調(diào)查時間和次數(shù)

在2018年12月26日的時候進行調(diào)查。

3.3 計算方法

依照實際調(diào)查結(jié)果，根據(jù)下面的共識對菌絲生長抑制率進行計算，其單位主要是%，而計算結(jié)果應(yīng)保留到小數(shù)點的后2位數(shù)值。

凈生長量（mm）=測量菌落直徑-8

菌生抑制率（%）=照生量-理生量照生量×100

3.4 統(tǒng)計分析

使用DPS軟件依照藥劑的實際濃度回歸分析菌絲的生長抑制率，計算各個藥劑的EC50值、EC90值、95%置信限和相應(yīng)的b值、標準誤（SD）。

SR=EC50（理值）EC50（察值）

EC50（理值）=a+baA的EC50+bB的EC50

其中：a、b分別為戊唑醇和丙森鋅在組合中的百分含量

A為戊唑醇；B為丙森鋅

依照Wadley方法對兩個藥劑經(jīng)過配比之后的聯(lián)合增效比值（SR）進行對比，SR<0.5代表具備拮抗作用，0.5≤SR≤1.5代表具備相加作用，SR>1.5代表具備增效作用。

4 結(jié)果與分析

試驗結(jié)果表明：空白對照盤內(nèi)菌絲擴展至培養(yǎng)皿的2/3時，與清水對照盤內(nèi)處理相比，菌絲生長無明顯差異，說明本配方篩選試驗為有效試驗。

戊唑醇、丙森鋅及戊唑醇與丙森鋅的各個占比混配情況對蘋果病菌生長抑制率的結(jié)果如下表1，每個藥劑的EC50值、EC90值及95%置信限和相應(yīng)的b值、標準誤差（SD）見表1。

由表1可知，戊唑醇、丙森鋅對蘋果斑點落葉病菌的EC50分別為0.28mg/L和195.73mg/L。戊唑醇、丙森鋅對蘋果斑點落葉病菌的EC90分別為54.61mg/L和1283.25mg/L。戊唑醇與丙森鋅配比1：1、1：2、1：4、1：6、1：8的增效比值分別為1.08、1.24、1.90、1.68和1.41，雙方使用1：4以及1：6的混配方法展現(xiàn)出相應(yīng)的增效作用，且以1：4時增效比值最大，其增效機理、作用方式及田間藥效尚待進一步驗證。

戊唑醇為三唑類內(nèi)吸性殺菌劑，具有保護、治療和鏟除作用，是真菌麥角甾醇生物合成抑制劑，用于防治多種植物的各種高等真菌病害，現(xiàn)已經(jīng)登記用于蘋果斑點落葉病防治。丙森鋅是一種速效、長殘留的重要殺菌劑。其所具備的殺菌機制并不明確與特定，可以使用的位置比較多，主要用來制約病原菌當中的丙酮酸氧化現(xiàn)象，對作物真菌引起的多種病害具有很好的防治效果。本試驗結(jié)果表明，戊唑醇對蘋果斑點落葉病菌的毒力要高于丙森鋅，但戊唑醇對病原菌作用位點單一，容易產(chǎn)生抗藥性。因此將內(nèi)吸性與保護性殺菌劑混合使用，可有效延緩病原菌抗藥性的產(chǎn)生，減少用藥量，降低用藥成本，是藥劑開發(fā)的一個重要途徑。

參考文獻

[1] 馬銀蕊.蘋果斑點落葉病的發(fā)生與防治[J].河北林業(yè)科技，2006（1）：29-30.

[2] 中國標準出版社總編室.中國國家標準匯編·6 （2003年修訂）[M].中國標準出版社，2005.