許佳明 王婷 王夢(mèng)雅 王曉立 韓浩章

摘? 要：為了建立櫸樹(shù)無(wú)性繁殖體系，探討櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)的影響因素，以櫸樹(shù)含葉芽莖段作為外植體，采用75%乙醇（30s）、2%次氯酸鈉溶液（25min）消毒，接種于含不同激素種類(lèi)及濃度的MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)莖段葉芽萌發(fā)。結(jié)果表明：櫸樹(shù)莖段作為外植體可以啟動(dòng)葉芽的形成;在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，BA濃度為5mg/L、NAA濃度0.2mg/L的條件下，莖段葉芽誘導(dǎo)率最高。

關(guān)鍵詞：櫸樹(shù);外源激素;葉芽;誘導(dǎo)

中圖分類(lèi)號(hào) S79 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2019）08-0031-03

Abstract：In order to establish the asexual reproduction system of Zelkova schneideriana and explore the influencing factors of leaf bud induction of eucalyptus stems，we used Zelkova schneideriana leaf bud stem segments as explants，disinfected with 75% ethanol（30s）and 2% sodium hypochlorite solution（25min）. Leaf bud germination was induced on MS medium containing different hormone types and concentrations，and statistical culture results were observed. The results showed that the stem segment of Zelkova schneideriana can be used as an explant to initiate the formation of leaf buds. In the induction medium，the callus induction rate was the highest under the conditions of BA concentration of 5mg/L and NAA concentration of 0.2mg/L.

Key words：Zelkova schneideriana;Exogenous hormone;Leaf bud;Induction

櫸樹(shù)（Zelkova schneideriana）為榆科（Ulmaceae）櫸樹(shù)屬（Zelkova）落葉喬木，是國(guó)家重點(diǎn)的保護(hù)植物之一[1]。其株形高大、枝干優(yōu)美，秋季色彩艷麗，是觀賞價(jià)值較高的園林樹(shù)種[2]。近年來(lái)，由于野生資源日漸稀缺，對(duì)櫸樹(shù)的保護(hù)與開(kāi)發(fā)利用尤為重要[3]。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)櫸樹(shù)葉片在不同外源激素種類(lèi)以及濃度配比的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，從櫸樹(shù)莖段誘導(dǎo)葉芽，為進(jìn)一步研究櫸樹(shù)無(wú)性繁殖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料 取自校內(nèi)栽培櫸樹(shù)含葉芽莖段外植體。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)采用L9（34）正交設(shè)計(jì)，詳見(jiàn)表1。

1.3 試驗(yàn)方法 植物材料用75%乙醇浸泡15s，用2%次氯酸鈉浸泡25min，最后用無(wú)菌水沖洗3次。處理結(jié)束后，用鑷子取出材料放于托盤(pán)中，并用剪刀將莖段剪切含有1個(gè)芽的莖段，放于培養(yǎng)基上，每瓶5個(gè)莖段。將接種好的材料放于2000～3000lx光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，光暗周期為14∶10。溫度25℃。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析 采用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理后的結(jié)果如表2所示，水平極差（R）的大小可以說(shuō)明試驗(yàn)中TDZ、BA、NAA三者對(duì)櫸樹(shù)櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)的影響程度，其影響程度分別是BA>TDZ>NAA。各種因素的水平均值（k）的大小可以表現(xiàn)出個(gè)激素濃度的影響下對(duì)櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)的影響，分別表現(xiàn)為T(mén)DZ濃度0.01mg/L>0mg/L>0.02mg/L，BA濃度5mg/L>2mg/L>1mg/L，NAA濃度0.2mg/L>0.1mg/L>0.05mg/L。因此，最適宜的培養(yǎng)基組合是A1B3C3。

2.2 不同濃度的TDZ對(duì)櫸樹(shù)莖段葉芽的誘導(dǎo) 從圖1可以看出，當(dāng)TDZ濃度在0mg/L時(shí)，櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)均值為0.5;當(dāng)TDZ濃度在0.01mg/L時(shí)，誘導(dǎo)均值約為0.535;當(dāng)TDZ濃度在0.02mg/L時(shí)，誘導(dǎo)均值為0.36?？梢?jiàn)，TDZ濃度在0～0.01mg/L，櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)均值逐漸增大，而TDZ的濃度大于0.01mg/L后，櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)均值反而降低。

2.3 不同濃度的BA對(duì)櫸樹(shù)莖段葉芽的誘導(dǎo) 從圖2可以看出：當(dāng)BA濃度在1～5mg/L時(shí)，櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)均值呈上升趨勢(shì);當(dāng)BA濃度在1mg/L時(shí)，莖段葉芽誘導(dǎo)均值約為0.315;當(dāng)BA濃度在1mg/L時(shí)，誘導(dǎo)均值約為0.424;當(dāng)BA濃度在5mg/L時(shí)，誘導(dǎo)均值約為0.655。當(dāng)BA濃度在1～2mg/L時(shí)，誘導(dǎo)均值上升的幅度不及BA濃度在2～5mg/L時(shí)。

2.4 不同濃度的NAA對(duì)櫸樹(shù)莖段葉芽的誘導(dǎo) 從圖3可以看出，當(dāng)NAA濃度為0.2mg/L時(shí)，櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)均值最高，達(dá)到0.509;而NAA濃度在0.05mg/L和0.1mg/L時(shí)，誘導(dǎo)均值分別為0.438和0.448。并且NAA濃度在0.1～0.2mg/L時(shí)，誘導(dǎo)均值遠(yuǎn)大于NAA濃度在0.05～0.1mg/L時(shí)的。

2.5 不同的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類(lèi)對(duì)櫸樹(shù)莖段葉芽的誘導(dǎo)由圖4可知，TDZ對(duì)櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)影響為0.18，BA為0.34，NAA為0.07?？梢?jiàn)，BA對(duì)櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)的影響最大，NAA最小。

3 討論與結(jié)論

3.1 討論 在櫸樹(shù)的各類(lèi)繁殖方式中，組織培養(yǎng)應(yīng)用前景廣闊。雖然鐘飛霞[4]、金曉玲[5]等對(duì)櫸樹(shù)無(wú)性繁殖做了很多工作，但對(duì)櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)的研究還有待進(jìn)一步深入。本研究通過(guò)正交試驗(yàn)探討了最適合櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基組合，分析了櫸樹(shù)莖段葉芽誘導(dǎo)過(guò)程中的各種影響因素，大大提高了試驗(yàn)效率。不同的植物生長(zhǎng)物質(zhì)具有不一樣的作用，同一種激素的不同濃度的作用也不同，使用時(shí)一定要合理使用，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果做出正確的選擇[6]。TDZ在許多植物組織培養(yǎng)中具有明顯的促進(jìn)植物生長(zhǎng)的作用，尤其是對(duì)木本植物具有突出的效果[7]。TDZ能夠顯著促進(jìn)桑樹(shù)愈傷組織的產(chǎn)生和生長(zhǎng)[8]。一定濃度范圍的BA有利于葉芽的萌發(fā)，唐國(guó)濤研究表明，BA濃度在2mg/L時(shí)萌發(fā)出的芽的持續(xù)時(shí)間達(dá)到最高峰，此時(shí)是最適宜的濃度[9]。NAA是廣譜型植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，能促進(jìn)細(xì)胞的分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)不定根的形成等。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)NAA對(duì)櫸樹(shù)葉芽誘導(dǎo)影響較小。

3.2 結(jié)論 本試驗(yàn)結(jié)果表明，最適宜櫸樹(shù)莖段葉芽愈傷處理組合是A1B3C3，即最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為BA5mg/L+NAA0.2mg/L。

參考文獻(xiàn)

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（責(zé)編：張宏民）