亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        多指標(biāo)評價美拉德反應(yīng)產(chǎn)物的抑菌性能

        2019-05-25 07:10:32章銀良蔡亞玲
        肉類工業(yè) 2019年4期
        關(guān)鍵詞:精氨酸拉德恒溫

        章銀良 李 鑫 蔡亞玲

        1.鄭州輕工業(yè)學(xué)院 食品與生物工程學(xué)院 河南鄭州 450001 2.食品生產(chǎn)與安全河南省協(xié)同創(chuàng)新中心 河南鄭州 450001

        隨著食品行業(yè)迅猛發(fā)展,一些食品安全問題浮出水面,怎樣有效防止食品腐敗變質(zhì)成為食品企業(yè)首要解決的問題[1]。

        在現(xiàn)代食品工業(yè)中最常使用的食品保鮮技術(shù)有低溫保鮮、氣調(diào)保鮮,涂膜保鮮和化學(xué)保鮮。其中化學(xué)保鮮是使用化學(xué)藥劑對食品進行處理來達到防止食品腐敗變質(zhì)的目的,這些用于食品保鮮作用的化學(xué)制劑皆可稱之為防腐劑,食品防腐劑一般按照原料來源的不同可劃分為化學(xué)合成防腐劑和天然防腐劑兩種[2,3]。

        為防止或減少食品腐敗、變色和風(fēng)味惡化,在食品中常使用人工合成防腐劑(如山梨酸鉀、苯甲酸鈉等),其使用有一定的限量,并且化學(xué)合成抗菌防腐劑均有一定的毒副作用[4],因此對合成防腐劑的擔(dān)憂使得人們?nèi)ふ夷馨l(fā)揮同樣作用的替代品。美拉德反應(yīng)在食品加工和儲藏過程中是自然發(fā)生的一類非酶褐變反應(yīng)[5],由于其MRPs中含有大量的具有抑菌活性的物質(zhì)[6],所以將其應(yīng)用在食品中替代一些合成防腐劑成為日后研究工作的重點。

        隨著人們安全意識不斷提高,天然防腐劑受到國內(nèi)外的關(guān)注,Einarsson[7](1983)等人曾發(fā)現(xiàn)美拉德產(chǎn)物的抑菌效果與微生物的種類有關(guān)。因此,本文通過對L-賴氨酸和D-果糖MRPs、L-精氨酸和D-葡萄糖MRPs進行抑菌試驗來探索其對多種菌生長狀況的影響,研究其是否能夠抑制不同種菌的生長,為開發(fā)營養(yǎng)健康并具有獨特MRPs風(fēng)味的食品提供了一定的理論依據(jù)和試驗數(shù)據(jù),以期為延長食品的貨架期提供保障。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        L-賴氨酸、D-果糖、L-精氨酸、D-葡萄糖:Solarbio試劑公司。

        生化試劑,蛋白胨、氯化鈉、酵母粉、瓊脂:北京奧博星生物技術(shù)有限公司。

        無水乙醇,分析純,國藥集團有限公司。

        去離子水。

        1.1.1 指示菌

        枯草芽孢桿菌(BNCC188080 Bacillus subtilis)、大腸桿菌(Trans·T1、Top10、BL21)、酵母菌(MQ3-23、MQ3-11、MQ1-23、MQ3-21、MQ3-18、MQ2-6)、釀酒酵母(ACCC20032 Saccharomyces carlsbergensis),11種受試菌株來自于本實驗室保藏。

        菌懸液:細菌在37℃下?lián)u床培養(yǎng)約2h和真菌在28℃下?lián)u床培養(yǎng)約4.5h得到的濃度為(1.0~5.0)106CFU/mL菌液[8]。

        1.1.2 指示菌培養(yǎng)基

        YPD培養(yǎng)基:蛋白胨2%,酵母粉1%,葡萄糖2%,瓊脂2%。

        LB培養(yǎng)基:Nacl 1%,蛋白胨1%,酵母粉0.5%,瓊脂1.5%~2%。

        1.2 儀器與設(shè)備

        牛津杯(內(nèi)徑6.0mm,外徑8.0mm,高10.0mm);檢測專用培養(yǎng)皿(內(nèi)徑90mm,高15mm);美國Rainin瑞寧Pipet-Lite XLS移液槍:梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;YZJ-SCT121超凈工作臺:東莞市華旗凈化工程有限公司;SQP電子天平:賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司;DNP-9162BS電熱恒溫培養(yǎng)箱:上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;HJ-3恒溫磁力加熱攪拌器:常州國華電器有限公司;LDZX-50KBS立式壓力蒸汽滅菌鍋:廣州越特科學(xué)儀器有限公司;pH計:瑞士梅特勒-托利多公司;T6新世紀紫外可見分光光度計:北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;HH-1智能型數(shù)顯恒溫油浴槽:鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司;101-2電熱鼓風(fēng)干燥箱:天津市泰斯特儀器有限公司;DNP-9162BS恒溫震蕩培養(yǎng)箱:上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司。

        1.3 試驗方法

        1.3.1 抑菌效果最佳的MRPs制備

        依據(jù)前期均勻試驗中優(yōu)化得出的制備MRPs的最佳反應(yīng)條件。準(zhǔn)確稱取D-葡萄糖3.6032g和L-精氨酸10.4520g(摩爾比1∶3),溶解于90mL的去離子水中,置于恒溫磁力攪拌器上攪拌至溶液清澈,再用3mol/L的HCl和3mol/L的NaOH調(diào)整溶液pH值至12.0,最后用事先調(diào)好的pH值為12.0的溶液定容到100mL,混合均勻后,取10mL反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到25mL具塞試管中,密封嚴實后,置于120℃恒溫油浴鍋中反應(yīng)210min。反應(yīng)結(jié)束后置于冰水中冷卻。再準(zhǔn)確稱取D-果糖10.8096g和L-賴氨酸2.9238g(摩爾比3∶1)溶解于90mL的去離子水中,制備條件為加熱時間90min、反應(yīng)初始pH值調(diào)至10.0、溫度120℃,余下制備步驟同上。

        1.3.2 MRPs抑菌效果的研究

        1.3.2.1 牛津杯法測定抑菌活性

        按照Huang TH(2012)[9]、李冬梅[10](2006)等的方法稍作改動,在無菌條件下,將經(jīng)過高壓蒸汽滅菌的固體培養(yǎng)基(酵母用YPD培養(yǎng)基,枯草芽孢桿菌和大腸桿菌用LB培養(yǎng)基)冷卻溫度至40~45℃之間,倒平板。取200μL濃度為(1.0~5.0)×106CFU/mL的菌液轉(zhuǎn)移至固體培養(yǎng)基平板表面并涂布均勻,將涂布棒灼燒殺菌然后冷卻,用于均勻涂布菌液。用經(jīng)滅菌的鑷子夾取已滅菌的牛津杯擺放于中央,用移液槍吸取200μLMRPs加入牛津杯內(nèi)(細菌加入果糖和賴氨酸MRPs,酵母菌加入葡萄糖和精氨酸MRPs),同時做試劑空白和陽性對照。酵母陽性對照試劑用乳酸,枯草芽孢桿菌和大腸桿菌用氯霉素,放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。測量抑菌圈直徑,并計算3次平行試驗的平均值。

        1.3.2.2 菌落總數(shù)的測定

        參考GB4789.2-2016《食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定》進行。用100μL微量移液槍分別吸取培養(yǎng)好的菌液100μL,沿管壁緩慢注于盛有900μL稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管使其混合均勻,制成1∶10的樣品菌液。然后按照以上步驟制備10倍系列稀釋菌液。每種菌液分別得到以下七個濃度梯度:10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7。之后通過預(yù)試驗選擇適宜稀釋度(酵母菌稀釋10-4、細菌稀釋10-5)的菌液,分別吸取40μL菌液和200μLMRPs(細菌加入果糖和賴氨酸MRPs,酵母菌加入葡萄糖和精氨酸MRPs)混合后加入兩個培養(yǎng)基,用涂布棒涂布均勻。同時取40μL菌液分別加入另兩個培養(yǎng)基,涂布均勻作陰性對照。再分別取200μLMRPs加入兩個無菌培養(yǎng)基作空白對照。涂布結(jié)束后,將平板翻轉(zhuǎn),細菌移至37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)12h,酵母菌移至28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)36h。培養(yǎng)完成后,觀察菌的生長情況,進行菌落計數(shù)。

        1.3.2.3 抑菌率的測定

        參照黃國文[11](2017)、雷歡[12](2017)等的方法。取100mL液體培養(yǎng)基和100mL混合液體培養(yǎng)基(10mL MRPs+90mL液體培養(yǎng)基)分別作為A1、A2的空白對照組。然后用紫外分光光度計分別測試其吸光度(酵母菌培養(yǎng)液在560nm處測量,細菌培養(yǎng)液在600nm處測量),并記錄。取22支試管分成兩組(各11只),第一組每管加入5mL含有MRPs的液體培養(yǎng)基和40μL菌液,第二組每管加入5mL液體培養(yǎng)基與40μL菌液,分別貼上標(biāo)簽,塞上塞子用報紙包裹,放入恒溫震蕩培養(yǎng)箱里細菌37℃培養(yǎng)4h,酵母菌28℃培養(yǎng)8h,培養(yǎng)完成后分別用紫外分光光度計測量其吸光度,每對試管做3組平行(細菌組加入果糖和賴氨酸MRPs,酵母菌組加入葡萄糖和精氨酸MRPs)。

        抑菌率計算公式如下:

        抑菌率=(A1-A2)/A1

        式中:

        A1為不加MRPs組培養(yǎng)菌液的吸光度;

        A2為加入MRPs培養(yǎng)的菌液吸光度

        1.3.2.4 最小抑菌濃度(MIC)的測定

        參照Anis Ben Hsouna[13](2011),Sweetie R.Kanatt[14](2008)等的方法。采用二倍連續(xù)稀釋法測定[15]MRPs的最小抑菌濃度。取10支無菌試管編號,每支試管各加入5mL的液體培養(yǎng)基。無菌移液槍吸取5mLMRPs至1號試管,混勻后從1號試管吸取5mL至2號試管,以此類推,直至9號試管(棄去5mL),分別將MRPs稀釋2、4、8、16、32、64、128、256、512倍,除9號試管外各加入40μL制備好的菌懸液,9號作為陰性對照,10號作為陽性對照。搖床培養(yǎng)后,從每支試管各吸取40μL至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面,并用無菌涂布棒涂布均勻,每支試管做3個平行。上述操作完畢后,將所有平板放置于(細菌37℃,真菌28℃)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后,查看各平板內(nèi)各菌落的生長情況,其中完全沒有菌生長的平板對應(yīng)的最低稀釋濃度即為最小抑菌濃度(MIC)[16]。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 MRPs對不同菌種的抑菌活性的比較

        2.1.1 牛津杯法測定抑菌活性

        以抑菌圈直徑為測試指標(biāo),美拉德反應(yīng)產(chǎn)物對不同菌種的抑制效果分別用SPSS 19.0軟件處理數(shù)據(jù),試驗結(jié)果如表1和表2所示。

        表1 MRPs對不同真菌的抑菌作用

        如表1所示,通過方差分析和多重比較,得出葡萄糖和精氨酸MRPs對所測酵母菌均有不同程度的抑制,抑菌作用從大到小為MQ1-23>MQ3-18>MQ3-21>釀酒酵母>MQ3-11>MQ3-23>MQ2-6,其中對MQ1-23的抑制效果最好。因為牛津杯直徑為8mm,如果抑菌圈直徑小于8mm則代表無明顯的抑菌效果,所以從表2我們可以得出,果糖和賴氨酸MRPs對BL21抑制作用比較弱。同一濃度的MRPs對不同菌種的抑菌效果也不相同,其中抑菌作用從大到小為Trans·T1>TOP.10>枯草芽孢桿菌>BL21。

        表2 MRPs對不同細菌的抑菌作用

        注:1.表中“-”表示抑菌圈直徑≤8mm,無明顯抑菌作用。

        2.同一行中,具有不同字母的表示差異顯著(p<0.05),具有相同字母的表示差異不顯著(p>0.05)。

        從試驗結(jié)果中可以看出美拉德反應(yīng)產(chǎn)物對真菌和細菌均有一定的抑菌效果。其中葡萄糖精氨酸MRPs對MQ1-23酵母菌的抑制作用最強,抑菌圈直徑為25.58±0.49mm;果糖賴氨酸MRPs對大腸桿菌Trans·T1的抑制作用最強,抑菌圈直徑為21.69±0.47mm。

        2.1.1 菌落總數(shù)法測定結(jié)果分析

        以菌落總數(shù)為指標(biāo),美拉德反應(yīng)產(chǎn)物對不同菌種的抑制效果如圖1所示。

        圖1 不同MRPs對細菌和真菌的抑菌作用Fig.1 The bacteriostatic effects to bacereia and fum juus from

        從圖1中我們可以看到在加入美拉德反應(yīng)產(chǎn)物后大腸桿菌Trans·T1從66減少到7,酵母菌MQ3-18從107減少到24,這兩種菌的菌落總數(shù)減少的幅度最大分別為89.39%和77.57%,酵母菌MQ1-23加入MRPs后菌落總數(shù)從79下降至19,減少幅度也很可觀為75.95%且僅次于MQ3-18位居第二。從圖1中我們還可以看出MRPs對這11種指示菌皆有不同程度的抑制作用,這與Einarsson[7](1983)等人曾提出的美拉德產(chǎn)物的抑菌效果與微生物的種類有關(guān)這一發(fā)現(xiàn)相符。

        2.1.2 抑菌率法測定結(jié)果分析

        以吸光度為指標(biāo),美拉德反應(yīng)產(chǎn)物對不同菌種的抑制效果如圖2所示。

        圖2 不同MRPs對細菌和真菌的抑制效果Fig.2 The bacteriostatic effests to bacreria and fum jus from differemt MRPs

        由圖2可得不管是細菌還是真菌,抑菌培養(yǎng)完成后,不添加美拉德反應(yīng)產(chǎn)物時菌液的吸光度均高于添加美拉德反應(yīng)產(chǎn)物時菌液的吸光度,說明MRPs對這些菌的生長是有抑制作用的。從圖2中我們可以得出如下結(jié)論:美拉德反應(yīng)產(chǎn)物對以上11種菌抑制強度存在差異,其中葡萄糖精氨酸對MQ2-6、MQ3-23、MQ3-11的抑菌率偏小,可能是因為在菌液培養(yǎng)的開始階段MRPs中未反應(yīng)完全的葡萄糖促進了酵母菌的生長[17]。另外葡萄糖精氨酸MRPs對MQ1-23抑制作用最強,抑菌率為68.15%;果糖賴氨酸MRPs對大腸桿菌Trans·T1的抑制效果最好,抑菌率為78.60%。

        2.1.3 最小抑菌濃度(MIC)法測定結(jié)果分析

        按照1.3.2.4所述試驗方法及步驟,采用二倍連續(xù)稀釋法測定MRPs對11種常見腐敗菌的最小抑菌濃度(MIC)結(jié)果見表3。

        如表3所示,MRPs對這11種指示菌均有不同程度的抑制作用。當(dāng)MRPs濃度在稀釋16倍以下時,Trans·T1、TOP.10、枯草芽孢桿菌均不生長;當(dāng)MRPs濃度在稀釋倍數(shù)在4倍以下時,BL21、MQ3-11、MQ3-23、MQ3-18、MQ3-21、釀酒酵母均不生長;其中抑制酵母菌MQ1-23所需MRPs最小抑菌濃度最小為稀釋倍數(shù)在32倍時。

        表3 MRPs對供試菌的最小抑菌濃度

        注:“—”表示無供試菌生長;“+”表示有供試菌生長;9號試管為陰性對照;10號試管為陽性對照。

        3 結(jié)論

        我們用抑菌圈、菌落總數(shù)、抑菌率、最小抑菌濃度四個指標(biāo)來檢測MRPs對食物中常見細菌和真菌的抑制效果,并從4組數(shù)據(jù)中可以得出MRPs對大腸桿菌BL21的抑制效果比較弱,但對其它十種供試菌均有不同程度的抑制作用,并且綜合分析四個指標(biāo)可以得出MRPs對酵母菌MQ1-23和大腸桿菌Trans·T1的抑制效果是最明顯的。此外,由最小抑菌濃度分析可知,隨著MRPs添加量的增大,抑菌作用會逐漸增強。因此可以考慮MRPs作為一種防腐劑添加入食品中,提高其抑菌能力、保持其感官特性并延長貨架期。

        猜你喜歡
        精氨酸拉德恒溫
        基于PLC及組態(tài)技術(shù)的恒溫控制系統(tǒng)開發(fā)探討
        古斯塔夫·拉德布魯赫——法哲學(xué)家與政治家
        法律史評論(2020年2期)2020-04-13 05:56:12
        拉德布魯赫和康特洛維茨
        法律史評論(2020年2期)2020-04-13 05:56:08
        基于PID控制的一體化恒溫激光器系統(tǒng)設(shè)計
        一口袋的吻(上)
        簡論嘎拉德瑪之歌產(chǎn)生的思想根源
        理想氣體恒溫可逆和絕熱可逆過程功的比較與應(yīng)用
        基于單片機的恒溫自動控制系統(tǒng)
        電子制作(2017年24期)2017-02-02 07:14:16
        精氨酸聯(lián)合谷氨酰胺腸內(nèi)營養(yǎng)對燒傷患者的支持作用
        精氨酸、可樂定、精氨酸聯(lián)合左旋多巴不同激發(fā)試驗對GH分泌的影響
        内射后入在线观看一区| 精品国产成人av久久| 亚洲色大成网站www永久网站| 久久亚洲中文字幕无码| 亚洲无线码1区| 久久综合伊人有码一区中文字幕 | 国产精品国产三级国产专播| av在线资源一区二区| 丰满人妻熟妇乱又仑精品| 亚洲国产精品日韩av专区| 久久精品国产亚洲AV无码不| 激情免费视频一区二区三区| 色翁荡息又大又硬又粗视频| 国产丝袜视频一区二区三区| 伊人亚洲综合网色AV另类| 蜜桃视频永久免费在线观看 | 欧美黄色免费看| 久久亚洲精精品中文字幕早川悠里 | 亚洲福利天堂网福利在线观看| 能看不卡视频网站在线| 亚洲成av人片天堂网无码| 亚洲av无码久久寂寞少妇| 日本一区免费喷水| 精品人妻一区二区三区视频| 人妻aⅴ中文字幕| 亚洲天堂资源网| 天堂精品人妻一卡二卡| 国产成人精品久久亚洲高清不卡 | 国产一区二区三区探花| 国内精品久久久久影院优| 国产又黄又大又粗视频| 中文字幕五月久久婷热| 日韩精品免费一区二区三区观看 | 射精区-区区三区| 少妇熟女视频一区二区三区| 精品国产亚洲av成人一区| 蜜桃视频在线观看免费亚洲| 国产影片中文字幕| 亚洲av午夜成人片精品| 亚洲精品一区三区三区在线| 午夜成人鲁丝片午夜精品 |