林小明，黃 敏，謝培德

0 引言

舒肝寧注射液(SGN)是以張仲景《傷寒論》中的名方“茵陳蒿湯”為基礎(chǔ)方，依據(jù)該方隨癥加減化裁而成，組方由茵陳、梔子、板藍(lán)根、靈芝等藥物的提取物及黃芩苷組成，具有清熱解毒、利濕退黃、益氣扶正、保肝護(hù)肝等功效，對(duì)機(jī)體免疫功能具有調(diào)節(jié)和增強(qiáng)作用[1]，對(duì)脂肪肝具有改善作用[2-3]，目前臨床上主要用于肝炎、高膽紅素血癥、肝功能損害、脂肪肝、膽管炎等的治療[4]。作為一種保肝護(hù)肝藥物，臨床上常將其與5%葡萄糖注射液(5%GS)、10%葡萄糖注射液(10%GS)、氯化鈉注射液(NS)配伍應(yīng)用。已有報(bào)道，舒肝寧注射液與NS配伍不溶性微粒符合規(guī)定[5]，但與5%GS配伍≥10 μm的微粒數(shù)不符合標(biāo)準(zhǔn)，而SGN與10%GS的配伍情況至今未見(jiàn)有報(bào)道。為此，我們以配伍溶液的外觀、pH值、不溶性微粒，以及綠原酸、梔子苷、黃芩苷、黃芩素、野黃芩苷含量的變化為指標(biāo)，考察其與10%GS配伍液的穩(wěn)定性，為臨床用藥提供參考。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(島津LC-10A Class-VP)，pHS-2C型精密酸度計(jì)(上海雷磁儀器廠)，GWF-5J 型微粒分析儀(天河醫(yī)療器械設(shè)備有限公司)，SW-CJ-1FD潔凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司)，獅鼎SHB循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城工貿(mào)有限公司)，津騰溶劑過(guò)濾器。SGN(貴州瑞和制藥有限公司，規(guī)格：2 ml，批號(hào)：20170312)，10%GS(廣東大冢制藥有限公司，規(guī)格：500、250、100 ml，批號(hào)：B1612082、E1611141、B1708071)。對(duì)照品：綠原酸(批號(hào)：LYS2017041901)、黃芩素(批號(hào)：HQS2017071302)、野黃芩苷(批號(hào)：YHQG2017032301)、梔子苷(批號(hào)：MUST-17020401)、黃芩苷(批號(hào)：MUST-17031811)均購(gòu)自南京春秋生物工程有限公司，所有對(duì)照品純度均>98%。甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)用水制備 取注射用水，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，初濾液棄去，得實(shí)驗(yàn)用水。經(jīng)檢測(cè)符合中國(guó)藥典2015年版(四部)通則項(xiàng)下微粒檢查用水有關(guān)規(guī)定。

2.2 試驗(yàn)用具準(zhǔn)備 于層流凈化臺(tái)上將實(shí)驗(yàn)用具用實(shí)驗(yàn)用水沖洗至潔凈，備用。

2.3 配伍溶液制備 模擬臨床用藥濃度及操作，于層流凈化臺(tái)上進(jìn)行配制。精密吸取規(guī)定量的SGN，置于規(guī)定的量瓶中，加10%GS 定容，搖勻，即得。配伍液的具體劑量和溶媒用量：①SGN 10 ml+10%GS至100 ml，②SGN 10 ml+10%GS至250 ml，③SGN 10 ml+10%GS至500 ml，④SGN 20 ml+10%GS至100 ml，⑤SGN 20 ml+10%GS至250 ml。上述溶液各5份。

2.4 穩(wěn)定性考察 取“2.3”項(xiàng)下的配伍液分別于0、2、4、6 h觀察溶液的外觀，測(cè)定溶液的pH 值、不溶性微粒及綠原酸、梔子苷、黃芩苷、黃芩素、野黃芩苷含量的變化情況。

2.5 不溶性微粒測(cè)定 按照《中國(guó)藥典》2015年版(四部)通則項(xiàng)下不溶性微粒檢查法，用GWF-5J型微粒分析儀測(cè)定。

2.5.1 空白試驗(yàn) 取試驗(yàn)用SGN 15支，10%GS每個(gè)規(guī)格取4袋,測(cè)定其不溶性微粒，取平均值。結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明，本次試驗(yàn)所用藥液均符合規(guī)定。

2.5.2 配伍溶液放置不同時(shí)間點(diǎn)的不溶性微粒測(cè)定 對(duì)“2.3”項(xiàng)下的25個(gè)樣品溶液放置不同時(shí)間后，用GWF-5J 型微粒分析儀對(duì)溶液中的不溶性微粒進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的配伍液均重復(fù)測(cè)定5次，取平均值。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.6 配伍溶液放置不同時(shí)間點(diǎn)其外觀和pH值的檢查 對(duì)“2.3”項(xiàng)下25個(gè)樣品溶液不同時(shí)間點(diǎn)的溶液外觀進(jìn)行觀察，并按照《中國(guó)藥典》2015年版(四部)通則項(xiàng)下pH值測(cè)定法檢查其溶液pH值的變化。結(jié)果顯示，25個(gè)樣品溶液外觀放置6 h內(nèi)未發(fā)生變化，均為棕黃色透明液；溶液pH值變化均未超過(guò)0.2。見(jiàn)表3。

2.7 配伍液有效成分的含量測(cè)定[6]

表1 SGN和溶媒的不溶性微粒數(shù)測(cè)定結(jié)果(個(gè)/ml)

表2 配伍液不同時(shí)間點(diǎn)不溶性微粒的變化情況(n=5)

表3 配伍液不同時(shí)間點(diǎn)pH值的變化情況(n=5)

2.7.1 色譜分析條件 色譜柱：YMC-Pack ODS-A C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫30 ℃；流動(dòng)相：0.4%磷酸溶液(A)-甲醇(B)，梯度洗脫(0～23 min，75%→25%B)，流速1 ml/min；進(jìn)樣量10 μl；檢測(cè)波長(zhǎng)：238 nm(黃芩苷、梔子苷)、327 nm(黃芩素、野黃芩苷、綠原酸)。

2.7.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸14.12 mg、梔子苷70.65 mg、黃芩苷404.5 mg、黃芩素12.16 mg、野黃芩苷20.96 mg，置50 ml量瓶中,加甲醇25 ml溶解，加實(shí)驗(yàn)用水至刻度,搖勻。取此溶液25 ml，置500 ml量瓶中，加實(shí)驗(yàn)用水至刻度，搖勻即得對(duì)照品溶液。

2.7.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取“2.7.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液2、20、40、60、80、100 ml，分別置于100 ml量瓶中，加實(shí)驗(yàn)用水至刻度，搖勻，制成系列不同濃度(即綠原酸0.282 4、2.824、5.648、8.472、11.296、14.12 μg/ml，梔子苷1.413、14.13、28.26、42.39、56.52、70.65 μg/ml，黃芩苷8.090、80.90、161.8、242.7、323.6、404.5 μg/ml，黃芩素0.243 2、2.432、4.864、7.296、9.729、12.16 μg/ml，野黃芩苷0.419 2、4.192、8.394、12.58、16.77、20.96 μg/ml)的溶液。按“2.7.1”項(xiàng)下的色譜分析條件對(duì)上述溶液依次測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品的濃度X(μg/ml)為橫坐標(biāo)、峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得綠原酸、梔子苷、黃芩苷、黃芩素、野黃芩苷的回歸線方程分別為：Y=(39.52 X+3.016)×103(r=0.999 8)、Y=(21.91 X+1.016)×103(r=0.999 7)、Y=(19.62 X+4.523)×103(r=0.999 9)、Y=(38.25 X+3.152)×103(r=0.999 8)、Y=(29.51 X+1.765)×103(r=0.999 6)，線性范圍分別為：0.282 4～14.12 μg/ml、1.413～70.65 μg/ml、8.090～404.5 μg/ml、0.243 2～12.16 μg/ml、0.419 2～20.96 μg/ml。

2.7.4 精密度試驗(yàn) 精密量取“2.7.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液40 ml，置于100 ml量瓶中，加實(shí)驗(yàn)用水至刻度，搖勻,按“2.7.1”項(xiàng)下的色譜分析條件，測(cè)定其待測(cè)成分的含量，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果綠原酸、梔子苷、黃芩苷、黃芩素、野黃芩苷含量的RSD(n=6)分別為0.81%、1.21%、1.50%、0.96%、1.36%。

2.7.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取舒肝寧注射液10 ml，加入100 ml的5%GS中，搖勻。精密量取5 ml，6份，分別置于10 ml量瓶中，加實(shí)驗(yàn)用水至刻度，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，按“2.7.1”項(xiàng)下的色譜分析條件，測(cè)定其待測(cè)成分的含量。結(jié)果綠原酸、梔子苷、黃芩苷、黃芩素、野黃芩苷含量的RSD(n=6)分別為0.98%、1.51%、1.62%、0.86%、1.69%。

2.7.6 回收試驗(yàn) 精密吸取已知含量的舒肝寧注射液(綠原酸33.56 μg/ml、梔子苷595.7 μg/ml、黃芩苷19563 μg/ml、黃芩素50.60 μg/ml、野黃芩苷139.5 μg/ml)1、2、4 ml，分別置于50 ml量瓶中，各精密加入“2.7.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1 ml，加實(shí)驗(yàn)用水至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，按“2.7.1”項(xiàng)下的色譜分析條件，測(cè)定其待測(cè)成分的含量。結(jié)果綠原酸、梔子苷、黃芩苷、黃芩素、野黃芩苷含量(低、中、高濃度)回收率分別為>99%、>99%、>99%、>98%、>99%，RSD(n=3)分別為<1.8%、<1.4%、<1.4%、<1.6%、<1.7%。

2.7.7 配伍液有效成分的含量測(cè)定 精密吸取“2.3”項(xiàng)下放置不同時(shí)間的配伍液適量(①、②、③取5 ml，④取2 ml，⑤取5 ml)，置于10 ml量瓶?jī)?nèi)，加實(shí)驗(yàn)用水定容，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，按“2.7.1”項(xiàng)下色譜分析條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算其含量，見(jiàn)表4。

3 討論

3.1 配伍溶媒的選擇 SGN說(shuō)明書于用法用量項(xiàng)下規(guī)定：靜脈滴注，10～20 ml/次，用10%GS 250 ～ 500 ml 稀釋后靜脈滴注。已有報(bào)道，舒肝寧注射液與NS配伍不溶性微粒符合規(guī)定，但同5%GS配伍≥10 μm的微粒數(shù)不符合標(biāo)準(zhǔn)[1]，而SGN與10%GS的配伍情況至今未見(jiàn)有報(bào)道，而且有少數(shù)醫(yī)生使用溶媒的用量?jī)H為100 ml。因此，本研究選擇10%GS為溶媒，且溶媒用量選擇在100～500 ml 范圍對(duì)其配伍穩(wěn)定性進(jìn)行研究。

3.2 配伍液的不溶性微粒 表2結(jié)果表明，SGN與10%GS配伍0～6 h內(nèi)配伍液的不溶性微粒均不符合規(guī)定，這可能與SGN pH值為6～8，而5%、10%GS pH值范圍均低于SGN，從而造成SGN不穩(wěn)定有關(guān)。另外，本研究結(jié)果提示，2 h內(nèi)配伍液的不溶性微粒不但未隨放置時(shí)間延長(zhǎng)而增加，相反還有下降趨勢(shì)；但4～6 h內(nèi)配伍液的不溶性微粒隨放置時(shí)間延長(zhǎng)而增加。究其原因可能是配伍液放置后不溶性微粒出現(xiàn)復(fù)溶現(xiàn)象，而隨著放置時(shí)間延長(zhǎng)，配伍液內(nèi)部又發(fā)生某些理化反應(yīng)的緣故。

表4 配伍液不同時(shí)間點(diǎn)有效成分含量的變化情況(μg/ml，n=5)

3.3 配伍液的外觀及pH值 結(jié)果表明，10～20 ml SGN用10%GS 100～500 ml稀釋后，0～6 h內(nèi)配伍液的外觀均為棕黃色透明液體，各配伍液的pH值變化均未超過(guò)0.2，說(shuō)明配伍液的pH值在6 h內(nèi)是穩(wěn)定的。但配伍液的pH值均不在SGN的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(6～8)內(nèi)。

3.4 有效成分含量 SGN是由茵陳、梔子、板藍(lán)根、靈芝的提取物和黃芩苷組成。茵陳、梔子、板藍(lán)根、靈芝的主要成分分別為綠原酸[7]，梔子苷[8]，尿苷、鳥苷、告依春和腺苷[9]，尿苷和腺苷[10]。但在預(yù)試驗(yàn)中一直未找到尿苷、鳥苷、告依春、腺苷等成分的測(cè)定方法，而且在檢測(cè)黃芩苷的同時(shí)檢測(cè)到了野黃芩苷和黃芩素。因此，本實(shí)驗(yàn)僅以配伍液中綠原酸、梔子苷、黃芩苷、黃芩素、野黃芩苷含量變化作為配伍液穩(wěn)定性的研究指標(biāo)。表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，配伍液各有效成分6 h內(nèi)其百分含量為98.5%～100.9%，說(shuō)明在考察時(shí)間內(nèi)各有效成分在配伍液中是穩(wěn)定的。

綜上所述，SGN與10%GS配伍后，配伍液的外觀、pH值、各有效成分含量于6 h內(nèi)無(wú)明顯變化，但不溶性微粒數(shù)量于0～6 h內(nèi)均不符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。因此，SGN與10%GS不宜配伍應(yīng)用。