趙學(xué)亮，劉曉磊，蘇 倩，王姝懿，孫 柯，王文龍

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動物疾病臨床診療技術(shù)重點實驗室，內(nèi)蒙古呼和浩特 010018）

察右后旗是內(nèi)蒙古重要的牧區(qū)之一，平均海拔1 400 m，是以草原畜牧業(yè)為主的傳統(tǒng)養(yǎng)殖大旗，曾被國家列為草食性動物養(yǎng)殖帶，是全國首批肉羊核心育種場之一。截止到2017年，全旗牲畜總存欄達(dá)130萬只（頭），其中綿羊100萬只。近年來，隨著我國飼養(yǎng)方式和養(yǎng)殖規(guī)模的改變，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲（Haemonchus contortus）的危害逐漸凸顯出來，阻礙當(dāng)?shù)仞B(yǎng)羊業(yè)的健康發(fā)展，給畜牧業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失[1]。并且當(dāng)?shù)剞r(nóng)牧民對寄生蟲病普遍認(rèn)識不足，又缺乏科學(xué)的用藥指導(dǎo)，因而盲目給藥現(xiàn)象較為嚴(yán)重，對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病防控工作帶來較大阻礙。

本研究通過對察右后旗綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲流行病學(xué)調(diào)查，并結(jié)合當(dāng)?shù)啬羺^(qū)草場類型、地形地貌及氣候等特點，對部分羊群進(jìn)行了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥性檢測。通過對該地區(qū)綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染率、感染強度和驅(qū)蟲試驗數(shù)據(jù)的分析，了解當(dāng)?shù)鼐d羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的流行現(xiàn)狀及對常用驅(qū)蟲藥物的耐藥性情況，從而根據(jù)調(diào)查結(jié)果提出行之有效的防控措施，以期為當(dāng)?shù)啬磙D(zhuǎn)血矛線蟲防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2018年3—10月，根據(jù)不同草場類型、不同養(yǎng)殖模式，在烏蘭察布市察右后旗賁紅、白音察干、大陸號、錫林郭勒、土牧爾臺等5個不同地點選擇16個試驗區(qū)（1～16號牧場），每個試驗區(qū)域隨機選擇15只綿羊，共240只。將每只綿羊打上耳標(biāo)，并直腸采集新鮮糞便樣品240份，每份10 g左右，裝于自封袋中；將自封袋中空氣盡可能排凈，標(biāo)記好置于冰盒中帶回實驗室檢測。若當(dāng)天未能檢測，則放置于4 ℃冰箱中冷藏保存，待檢。

1.2 主要試劑

飽和硫酸鎂溶液：將400 g粉狀硫酸鎂溶于1 000 mL煮沸的蒸餾水中，充分溶解并用15 cm定性濾紙過濾，室溫存放備用。

1.3 試驗儀器

OLYMPUS顯微鏡、體視鏡、電子天平、銅篩、一次性吸管、挑蟲針、青霉素小瓶等：由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)寄生蟲實驗室提供；麥克馬斯特（McMaster）蟲卵計數(shù)板：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所提供。

1.4 驅(qū)蟲藥物

阿苯達(dá)唑：FANGTONG吸滌凈阿苯達(dá)唑混懸液（500 L/瓶），重慶方通藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號為“獸藥字（2014）230036670”。

伊維菌素：紅旗乾興內(nèi)外蟲凈伊維菌素注射液（100 mL/瓶），四川乾興動科藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號為“獸藥字（2016）221281128”。

1.5 定性檢查

取樣品2 g，置于燒杯中，用玻璃棒壓碎，加入58 mL的硫酸鎂溶液，均勻攪拌后通過銅網(wǎng)篩過濾，用一次性吸管吸取過濾的糞液到青霉素小瓶中，使瓶內(nèi)的糞液平于瓶口并稍微隆起，但不要溢出，靜置20 min后用蓋玻片直接蘸取液面后鏡檢，統(tǒng)計感染率。感染率=感染只數(shù)/檢查只數(shù)×100%。

1.6 定量檢查

參考改良麥克馬斯特氏法（McMaster），定量檢查每克糞便中蟲卵數(shù)量（EPG）。取樣品2 g，放入燒杯中，加入58 mL硫酸鎂溶液，充分均勻攪拌后通過銅網(wǎng)篩過濾，用一次性吸管吸取少量濾液滴入麥克馬斯特計數(shù)板中，置于顯微鏡臺上，靜置后鏡檢；用低倍鏡將兩個計數(shù)室內(nèi)見到的蟲卵全部數(shù)完，取平均值，再乘以200，即為每克糞便中的蟲卵數(shù)（EPG）；將所有陽性綿羊EPG計算平均數(shù)，即為每個牧場的平均EPG。

1.7 驅(qū)蟲試驗

根據(jù)綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲檢查結(jié)果，選取感染率和感染強度都較大的羊群進(jìn)行驅(qū)蟲試驗。共選取6個試驗區(qū)的90只高感染率綿羊進(jìn)行驅(qū)蟲試驗；每個試驗區(qū)15只綿羊，其中5只飼喂阿苯達(dá)唑片劑（20 mg·kg-1），5只皮下注射伊維菌素注射液（0.2 mg·kg-1），剩余5只不給任何藥物，作為對照組。于給藥后第14 天清晨進(jìn)行直腸糞便采集，采樣方法與流行病學(xué)調(diào)查時的采樣方法相同，然后依照漂浮法和麥克馬斯法依次進(jìn)行蟲卵的種類鑒定和計數(shù)，最后將結(jié)果與給藥前的結(jié)果進(jìn)行比較，并根據(jù)給藥前后的平均EPG，統(tǒng)計糞便蟲卵減少率和驅(qū)凈率。根據(jù)世界獸醫(yī)寄生蟲促進(jìn)協(xié)會（WAAVP）規(guī)定的驅(qū)蠕蟲藥耐藥性檢測方法[2]，判定該地區(qū)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲是否存在耐藥性。

蟲卵減少率=（投藥前平均EPG-投藥后平均EPG）/投藥前平均EPG×100%；

驅(qū)凈率=（投藥前陽性數(shù)-投藥后陽性數(shù)）/投藥前陽性數(shù)×100%。

1.8 寄生蟲學(xué)剖檢

根據(jù)驅(qū)蟲試驗中蟲卵減少率和驅(qū)凈率的結(jié)果，確定1號試驗?zāi)翀鰹榘⒈竭_(dá)唑敏感種群，6號試驗?zāi)翀鰹榘⒈竭_(dá)唑耐藥種群。根據(jù)對照試驗結(jié)果，敏感蟲株選取1號牧場中空白對照蟲卵較多的2只綿羊進(jìn)行剖檢；耐藥蟲株選取6號牧場中阿苯達(dá)唑給藥后蟲卵較多的2只綿羊進(jìn)行剖檢。剖檢前，再次利用對照試驗確認(rèn)敏感蟲株及耐藥蟲株。根據(jù)藥物達(dá)峰時間，于次日清晨分別對4只綿羊（敏感和耐藥各2只）進(jìn)行剖檢。

2 結(jié)果與分析

2.1 感染率與感染強度

對烏蘭察布市察右后旗賁紅、白音察干、大陸號、錫林郭勒、土牧爾臺5個地區(qū)16個牧場的240只綿羊進(jìn)行捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染情況調(diào)查，發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲平均感染率為75%（180/240），其中1號、2號 牧場綿羊感染率最高，達(dá)到100%，16號牧場感染率最低，為20%。捻轉(zhuǎn)血矛線蟲平均感染強度14.8×200 個/g，最大感染強度達(dá)到29×200 個/g，最小感染強度為0.6×200 個/g（表1）。

2.2 驅(qū)蟲效果

驅(qū)蟲試驗結(jié)果顯示，阿苯達(dá)唑片劑和伊維菌素注射劑給藥后，1號牧場給藥前后蟲卵減少率和驅(qū)凈率均為100%，根據(jù)WAAVP規(guī)定，糞便中蟲卵減少率大于95%時無耐藥性，可見該牧場中捻轉(zhuǎn)血矛線蟲對阿苯達(dá)唑和伊維菌素沒有產(chǎn)生耐藥性。2～5號牧場蟲卵減少率和驅(qū)凈率均不明顯，甚至出現(xiàn)給藥后蟲卵數(shù)增加的現(xiàn)象，表明這幾個牧場的綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲正逐漸具有耐藥性。6號牧場的蟲卵減少率和驅(qū)凈率均為0，表明該牧場對阿苯達(dá)唑和伊維菌素均產(chǎn)生了嚴(yán)重耐藥性，且多重耐藥現(xiàn)象較為嚴(yán)重（表2）。

表1 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染率和感染強度

表2 給藥后第14 天各組綿羊糞便蟲卵減少率

2.3 寄生蟲學(xué)剖檢

選取1號牧場空白對照中蟲卵較多的2只綿羊和6號牧場阿苯達(dá)唑給藥后蟲卵較多的2只綿羊進(jìn)行剖檢。剖檢前進(jìn)行2次給藥，根據(jù)藥物達(dá)峰時間對篩選出的4只綿羊進(jìn)行剖檢。結(jié)果顯示，4只綿羊混合感染了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲、細(xì)頸線蟲、擴展莫尼茨絳蟲和毛首線蟲4種寄生蟲，其中捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染強度均在500個以上，最大感染強度達(dá)2 000個以上。將捻轉(zhuǎn)血矛線蟲在體視鏡下逐條鑒別雌雄后，放入凍存管標(biāo)記好后存入液氮中，備用。本試驗成功分離出察右后旗綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲阿苯達(dá)唑敏感蟲株和耐藥蟲株。

3 討論

近年來，隨著我國飼養(yǎng)方式和養(yǎng)殖規(guī)模的改變，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲也出現(xiàn)新的流行特點和流行規(guī)律。與此同時，化學(xué)驅(qū)蟲藥物的長期頻繁使用，使得捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥情況日趨嚴(yán)重。據(jù)報道，新西蘭、澳大利亞、英國、巴西、阿哥廷等10多個國家均有捻轉(zhuǎn)血矛線蟲多重耐藥性[3-4]，包括對所有現(xiàn)用和已用過的抗蠕蟲藥物[5]，線蟲藥物的耐藥性已經(jīng)成為世界性問題，嚴(yán)重制約著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，由于采樣地點的放牧方式、草場類型及氣候條件不同，綿羊群捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染率和感染強度存在少許差異，但該地的綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲平均感染率為75%，其中有2個羊場平均感染率達(dá)到100%，說明察右后旗綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲流行情況較為普遍，流行情況較為嚴(yán)峻，而且部分捻轉(zhuǎn)血矛線蟲已產(chǎn)生了較為嚴(yán)重的耐藥性。

經(jīng)蟲卵形態(tài)學(xué)鑒定和寄生蟲學(xué)剖檢觀察成蟲形態(tài)結(jié)構(gòu)，共檢出捻轉(zhuǎn)血矛線蟲、細(xì)頸線蟲、擴展莫尼茨絳蟲和毛首線蟲等4種寄生蟲，而捻轉(zhuǎn)血矛線蟲為優(yōu)勢蟲種。這一結(jié)果與韓天龍等[6]對我國內(nèi)蒙古地區(qū)綿羊消化道線蟲感染情況調(diào)查的報道基本一致。由此可見，我國內(nèi)蒙古地區(qū)綿羊腸道寄生蟲感染情況較為普遍，且多呈混合感染。驅(qū)蟲試驗發(fā)現(xiàn)，在6個牧場中，有5個牧場的綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲已對阿苯達(dá)唑和伊維菌素產(chǎn)生了極強的耐藥性，這一結(jié)果與額葉勒德格等[7]在內(nèi)蒙古烏審旗地區(qū)綿羊消化道線蟲感染情況及耐藥性的調(diào)查的結(jié)果相一致，表明內(nèi)蒙古地區(qū)的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲已產(chǎn)生了多重耐藥。1號牧場綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲未產(chǎn)生耐藥的原因可能是，該場綿羊為圈養(yǎng)，近10年來未使用過化學(xué)驅(qū)蟲藥，因而導(dǎo)致捻轉(zhuǎn)血矛線蟲對阿苯達(dá)唑和伊維菌素均敏感。而其他牧場近10年以來一直使用伊維菌素和阿苯達(dá)唑進(jìn)行捻轉(zhuǎn)血矛線蟲防治，因而導(dǎo)致捻轉(zhuǎn)血矛線蟲產(chǎn)生了較強的耐藥性。因此，加強種群耐藥性的監(jiān)測，更新捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的驅(qū)蟲藥物，優(yōu)化驅(qū)蟲計劃措施，防止在羊群中盲目用藥，加強飼養(yǎng)管理，改善圈舍和牧地環(huán)境衛(wèi)生，依然是有效防控綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病的重要途徑。

4 結(jié)論

本次綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲流行病學(xué)調(diào)查及耐藥性檢測證實：烏蘭察布市察右后旗賁紅、白音察干、大陸號、錫林郭勒、土牧爾臺5個地區(qū)的綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染較為普遍，平均感染率為75%；感染較為嚴(yán)重，平均感染強度為14.8×200 個/g；大部分牧場的綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲對阿苯達(dá)唑、伊維菌素產(chǎn)生了較強耐藥性。今后需要加強捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥監(jiān)測，通過加強飼養(yǎng)管理和合理使用驅(qū)蟲藥物相結(jié)合，有效防控該地綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病。