黃仁武，胡利平,2，張茵，楊璐瑜，張秀峰,2，聶勝潔,2，劉林林,2＊

（1.昆明醫(yī)科大學(xué)司法鑒定中心，云南昆明 650500；2.昆明醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650500；3.廣東西湖司法鑒定所，廣東深圳 518000）

在法醫(yī)學(xué)實(shí)際檢案中, Amelogenin基因是對生物樣本的性別鑒定的主要依據(jù)，該基因座中Amelogenin-X比Amelogenin-Y小6bp，但個(gè)體的Amelogenin基因發(fā)生突變時(shí),致Amelogenin-X或Amelogenin-Y特異片段擴(kuò)增失敗,則可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的性別判定，從而干擾性別鑒定造成誤判?，F(xiàn)將作者工作中所見兩例男性個(gè)體染色體Amelogenin、DYS456、DYS570及DYS576缺失及分析報(bào)道如下。

1 案例資料

1.1 樣本

案例1：父親王某小、兩個(gè)兒子王某勇和王某偉、母親楊某的血樣各一份；案例2：父親黃某萬、女兒黃某仙、母親馬某瓊的血樣各一份。

1.2 檢測過程

采用Chelex-100法（Bio-Rad，美國）從采集的血樣中提取DNA。并采用PowerPlex-21（Promega，美國）試劑盒對提取的DNA模板進(jìn)行PCR復(fù)合擴(kuò)增，并使用3130XL（ABI，美國）遺傳檢測分析儀對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測分析。

依據(jù)我中心昆明醫(yī)科大學(xué)司法鑒定中心現(xiàn)有技術(shù)和條件，對DNA檢測結(jié)果的分析表明：在不考慮同卵多胞胎和近親的前提下，支持所檢血樣的所屬個(gè)體王某小和楊某是所檢血樣的所屬個(gè)體王某勇和王某偉的生物學(xué)父母親（累積親權(quán)指數(shù)如下，CPI：1.4761×1010，親權(quán)相對機(jī)會(huì) RCP：99.9999%；CPI：8.9787×1011，親權(quán)相對機(jī)會(huì) RCP：99.9999%）；支持所檢血樣的所屬個(gè)體黃某萬和馬某瓊是所檢血樣的所屬個(gè)體黃某仙的生物學(xué)父母親（累積親權(quán)指數(shù)，CPI：2.7720×1011，親權(quán)相對機(jī)會(huì)RCP：99.9999%）。但是Amelogenin基因座上（圖1），王某小父子三人均只顯示X等位基因，Y等位基因缺失；父親黃某萬只顯示X等位基因，Y等位基因缺失。同時(shí)采用了GoldeneyeTM20A（基點(diǎn)認(rèn)知，中國）試劑盒進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果一致。

圖1 王某小父子三人（A）和黃某萬（B）的Amelogenin基因座檢測結(jié)果

為驗(yàn)證受檢者性別，采用Goldeneye?26Y（基點(diǎn)認(rèn)知，中國）試劑盒對王某小父子三人和黃某萬進(jìn)行Y-STR的檢驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)父子三人和黃某萬均為男性，分型結(jié)果如圖2，均顯示DYS456、DYS570及DYS576的缺失。同時(shí)采用了PowerPlex Y23 System（Promega，美國）試劑盒進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果一致。

圖2 王某小父子（ABC）三人和黃某萬（D）的DYS456、DYS570及DYS576基因座檢測結(jié)果

2 討論

性別鑒定是法醫(yī)物證學(xué)的一項(xiàng)重要檢驗(yàn)，目前常用的性別鑒定方法是針對編碼牙釉質(zhì)蛋白的基因Amelogenin X染色體內(nèi)含子1區(qū)中的6bp缺失特性設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增X和Y染色體的特異性片段分別為106bp和112bp[1-2]。該方法靈敏度高，被廣泛應(yīng)用于法醫(yī)親子鑒定、個(gè)體識(shí)別等。

在實(shí)際檢案中，如果送檢樣本Amelogenin基因性別檢測只檢出X片段，則認(rèn)為是女性分型，本檢案中父子三人Amelogenin基因座分型結(jié)果與實(shí)際樣本來自男性表現(xiàn)不符。性染色體檢驗(yàn)異常可分為兩種原因：（1）該個(gè)體是46，XX性反轉(zhuǎn)男性，這種個(gè)體因缺乏Y染色體，故Amelogenin基因只能檢測X片段。46，XX性反轉(zhuǎn)男性的表型為男性，但是染色體核型為女性，無生育能力，是一種少見的染色體畸形，發(fā)病率約為1/20000[3]。（2）該個(gè)體是46，XY男性，可能由于Y染色體上的引物結(jié)合區(qū)域發(fā)生突變，引物擴(kuò)增效率受到嚴(yán)重影響、模板DNA降解及某些PCR抑制劑導(dǎo)致擴(kuò)增失敗或大片段的基因組DNA缺失[4]。

兩個(gè)案例中父王某小和父黃某萬的第二性征表現(xiàn)明顯，分別育有兩子和一女，且Y-STR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)僅有DYS456、DYS570及DYS576三個(gè)基因座的等位基因缺失，據(jù)此分析王某小和黃某萬具有Y染色體，為46，XY男性。兩個(gè)案例中檢材良好，電泳熒光峰高（RFU值）大于500且重復(fù)擴(kuò)增結(jié)果一致，因此在實(shí)驗(yàn)結(jié)果中等位基因的缺失可以排除模板質(zhì)量和某些PCR抑制劑導(dǎo)致擴(kuò)增失敗的原因。本實(shí)驗(yàn)室通過不同引物設(shè)計(jì)的試劑盒分別檢驗(yàn)，均出現(xiàn)相同結(jié)果，排除引物結(jié)合區(qū)域發(fā)生突變而導(dǎo)致無法擴(kuò)增的可能性。因此，推測王某小父子三人和黃某萬Amel Y無擴(kuò)增產(chǎn)物和DYS456、DYS570及DYS576三個(gè)基因座的等位基因缺失因Y染色體的部分缺失導(dǎo)致，且考慮本檢案中的家系在Yp11.2發(fā)生了大片段的丟失。

Amelogenin基因性別檢測簡便、靈敏、快捷，在法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中具有較高的應(yīng)用價(jià)值，是DNA性別鑒定的主要依據(jù)[2]，但是人的Amelogenin基因突變或缺失的個(gè)體，常規(guī)的檢測手段可能會(huì)造成誤判，更甚者會(huì)誤導(dǎo)偵查方向。近年來Amelogenin基因缺失的案例在國內(nèi)外已有大量報(bào)道[3-12]。

Y-STR位于Y染色體非重組區(qū)，為男性個(gè)體所特有的遺傳標(biāo)記，與X染色體不發(fā)生重組，符合單倍體連鎖遺傳。父子三人的Y-STR檢測結(jié)果相同，且都發(fā)現(xiàn)DYS456、DYS570及DYS576基因座的等位基因缺失，反映出該家族的重要父系特征。類似的父系特征在犯罪嫌疑人的家系排查中具有重大的應(yīng)用意義，可以極大限度的縮小偵查范圍，為偵查提供有效線索節(jié)約辦案經(jīng)費(fèi)和時(shí)間，在日常的檢案中應(yīng)注意收集。

綜上所述 ，在實(shí)際檢案中若發(fā)現(xiàn)Amelogenin對性別的判定結(jié)果與其他證據(jù)或線索不符，應(yīng)考慮Y等位基因丟失的可能性，基因分型缺失應(yīng)受到足夠重視，為提高法醫(yī)應(yīng)用的信息量，隨著Y-STR技術(shù)的廣泛應(yīng)用，在實(shí)際檢案中可通過檢測Y-STR并結(jié)合Y-SNP等其他遺傳標(biāo)記進(jìn)行綜合分析對AMEL Y缺失的個(gè)體進(jìn)行性別判定，以免引起錯(cuò)誤判斷。