王蓮芝 張晶 李瑩瑩 郎臨川 江暉 孫郡 崔嵐巍 紀(jì)濱英

近年來(lái)，兒童結(jié)核病報(bào)告例數(shù)急劇增加[1]。WHO[2]全球結(jié)核病報(bào)告顯示，2017年全球新發(fā)結(jié)核病患兒約104萬(wàn)例，占新發(fā)結(jié)核病患者總數(shù)的10%；我國(guó)新發(fā)兒童結(jié)核病患者9.9萬(wàn)例，占新發(fā)結(jié)核病患者總數(shù)的11.1%，但是每年登記的患兒卻只有5000～8000例[3]，漏診、漏治情況十分嚴(yán)重。肺結(jié)核是兒童結(jié)核病的主要類(lèi)型，約占70%～80%，病原學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性是確診的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于兒童自主排痰能力欠缺、痰液載菌量低，常常導(dǎo)致留痰失敗或痰結(jié)核分枝桿菌檢出率低。據(jù)報(bào)道，兒童咳嗽反射弱，排痰量少，經(jīng)常將呼吸道分泌物直接下咽；嬰幼兒在入睡時(shí)，呼吸道的纖毛運(yùn)動(dòng)將含有MTB的痰液送至喉部，然后吞咽至胃內(nèi)，在整個(gè)夜間會(huì)咽下大量呼吸道分泌物，而且夜間胃液分泌量明顯減少，因此胃液被認(rèn)為是較好的診斷兒童肺結(jié)核的標(biāo)本類(lèi)型[4]。本研究應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time fluorescen quantitative PCR,FQ-PCR)、實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)(simultaneous amplification and testing,SAT)和耐藥基因芯片三種分子診斷技術(shù)分別檢測(cè)患兒胃液和痰液中的MTB，旨在為兒童肺結(jié)核的診斷尋求簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的新方法。

對(duì)象和方法

一、研究對(duì)象

搜集2016年9月至2018年6月哈爾濱市胸科醫(yī)院兒童結(jié)核科、哈爾濱市兒童醫(yī)院呼吸科、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科收治的2個(gè)月至14周歲的疑似肺結(jié)核患兒186例，平均年齡(8.4±1.5)歲，男102例、女84例，低齡兒(2個(gè)月至6周歲)85例，年長(zhǎng)兒(7～14周歲)101例。最終經(jīng)臨床診斷為肺結(jié)核患者119例，其中低齡兒54例(45.4%)，年長(zhǎng)兒65例(54.6%)；非肺結(jié)核患兒67例，其中低齡兒31例(42.3%)，年長(zhǎng)兒36例(53.7%)。非肺結(jié)核患兒中，細(xì)菌性肺炎38例，支原體肺炎25例，肺隱球菌病3例，特發(fā)性肺含鐵血黃素沉著癥1例。

二、肺結(jié)核診斷與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)：186例患兒均為HIV檢測(cè)陰性、未經(jīng)抗結(jié)核藥物治療且資料完整者。兒童肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《WS 288—2017肺結(jié)核診斷》[5]，均為臨床診斷。臨床診斷應(yīng)同時(shí)具備以下4條：(1)有呼吸系統(tǒng)癥狀、全身結(jié)核中毒癥狀或發(fā)育遲緩；(2)具有肺結(jié)核影像學(xué)檢查特征；(3)結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)中度陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性，或γ干擾素釋放試驗(yàn)陽(yáng)性；(4)排除其他肺部疾病。

2.肺結(jié)核排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)肺部病變經(jīng)應(yīng)用抗生素(非抗結(jié)核藥物治療)治療吸收；(2)結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)和γ干擾素釋放試驗(yàn)均陰性。符合以上任一條即可排除。

三、儀器和試劑盒

TL988Ⅳ Real-time PCR儀、TL-2000MM-1型微量振蕩儀(購(gòu)自姜堰市天力醫(yī)療器械有限公司)，TGL-16B臺(tái)式高速離心機(jī)(購(gòu)自湖南星科科學(xué)儀器有限公司)，K308干式恒溫器(購(gòu)自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)，F(xiàn)ZP-1型核酸提純儀(購(gòu)自上海仁度生物科技有限公司)，combi-H12型恒溫雜交儀和TC-96/G/H(b)基因擴(kuò)增儀(購(gòu)自杭州博日科技有限公司)，DK-8D型電熱恒溫水槽(購(gòu)自上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑盒(PCR熒光法)[購(gòu)自艾康生物技術(shù)(杭州)有限公司]，SAT試劑盒(購(gòu)自上海仁度生物科技有限公司)，耐藥基因芯片試劑盒(購(gòu)自深圳亞能生物技術(shù)有限公司)。

四、研究方法

186例患兒全部于晨起空腹(禁食水4 h以上)抽取胃液至少3 ml，置于普通的樣本瓶?jī)?nèi)，胃液收集后4 h內(nèi)可直接送檢，超過(guò)4 h需加入100 mg碳酸鈉中和胃酸。年長(zhǎng)兒同時(shí)留取痰液：上午8：00-9:00 通過(guò)超聲霧化吸入3%鹽水5 ml誘導(dǎo)排痰，每次吸入后，鼓勵(lì)患兒積極咳痰，1次或分次送檢痰標(biāo)本。采用FQ-PCR、SAT和耐藥基因芯片3種技術(shù)分別對(duì)胃液和痰液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。每種檢測(cè)技術(shù)約需要1 ml胃液或痰液標(biāo)本。FQ-PCR和SAT 1天內(nèi)報(bào)結(jié)果，耐藥基因芯片2天內(nèi)報(bào)結(jié)果。本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，186例患兒監(jiān)護(hù)人均簽署了知情同意書(shū)。

1.標(biāo)本前處理：3種檢測(cè)技術(shù)的前處理相同，用無(wú)菌吸管取1 ml胃液加入1 ml 4% NaOH于螺口管中，振蕩20 min；取混合后液體1.2 ml，12 000×g離心5 min，棄上清，再用1 ml 生理鹽水洗滌1次，備用。

2.FQ-PCR檢測(cè)：前處理后的樣品中加入50 μl 裂解液，沸水浴10 min，12 000×g離心2 min；取4 μl 上清液和35 μl擴(kuò)增檢測(cè)液，放入PCR擴(kuò)增儀，設(shè)置擴(kuò)增程序(95 ℃ 3 min；94 ℃ 15 s;60 ℃ 30 s，40個(gè)循環(huán))，選取實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的FAM通道。結(jié)果判讀：檢測(cè)樣本循環(huán)閾值(Ct值)≤38.0為陽(yáng)性,Ct值>38.0為陰性。

3.SAT檢測(cè)：前處理后的樣品中加入50 μl洗脫液，將混勻后的樣本放入分枝桿菌核酸提純儀內(nèi)，超聲處理15 min，12 000×g離心5 min，取2 μl上清液和30 μl擴(kuò)增檢測(cè)液，預(yù)熱60 ℃ 10 min，42 ℃ 5 min，加入10 μl逆轉(zhuǎn)錄酶和聚合酶；設(shè)置擴(kuò)增程序，42 ℃ 40 min，每分鐘采1次熒光，選取FAM通道。結(jié)果判讀：樣本曲線(xiàn)與閾值線(xiàn)相交點(diǎn)的橫坐標(biāo)讀數(shù)為Ct值，Ct值<40為陽(yáng)性，Ct值≥40為陰性。

4.耐藥基因芯片檢測(cè)：按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。前處理后的樣品中加入50 μl 裂解液破壞細(xì)胞膜，沸水浴10 min，12 000×g離心2 min；取上清4 μl上機(jī)擴(kuò)增DNA，設(shè)置擴(kuò)增程序(50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min，95 ℃ 45 s，68 ℃ 60 s，30個(gè)循環(huán)；95 ℃ 30 s，54 ℃ 30 s，68 ℃ 60 s，30個(gè)循環(huán)；68 ℃ 5 min)。洗液A、B、C由試劑盒中提供，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物和膜條放入6 ml 洗液A中，沸水浴10 min后，置于59 ℃雜交儀中1.5 h；用洗液B洗滌膜條5 min，用酶標(biāo)液孵育膜條30 min，棄酶標(biāo)液，再用洗液A洗滌膜條2次 5 min、用洗液C洗滌膜條2 min，最后加入顯色液，顯色5 min。結(jié)果判定：每張膜條在CC位點(diǎn)出現(xiàn)藍(lán)色雜交信號(hào)，其余任意一個(gè)位點(diǎn)顯色則代表樣本中含有結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群，具體耐藥性參照說(shuō)明書(shū)判定。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以“率(%)”表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算各方法的檢測(cè)效能指標(biāo)，采用Kappa檢驗(yàn)分析各方法與參照標(biāo)準(zhǔn)的一致性，Kappa>0.75為一致性較好，Kappa<0.4為一致性較差，0.4

結(jié) 果

一、3種技術(shù)檢測(cè)186例患兒胃液的情況

經(jīng)臨床診斷的119例肺結(jié)核患兒中，F(xiàn)Q-PCR、SAT、耐藥基因芯片檢測(cè)胃液的陽(yáng)性例數(shù)分別為97例、93例、87例，陰性例數(shù)分別為 22例、26例、32例；67例非肺結(jié)核患兒中，3種技術(shù)檢測(cè)的陽(yáng)性例數(shù)分別為9例、1 例、5例，陰性例數(shù)分別為 58例、66例、62例；FQ-PCR法檢測(cè)的敏感度最高，SAT法檢測(cè)的特異度最高，Kappa值為0.603～0.709，見(jiàn)表1。

二、采用3種技術(shù)檢測(cè)年長(zhǎng)兒不同樣本的結(jié)果

101例年長(zhǎng)兒中，F(xiàn)Q-PCR、SAT、耐藥基因芯片3種技術(shù)檢測(cè)胃液的敏感度分別為80.00%、73.85%、67.69%，檢測(cè)痰液的敏感度分別為47.69%、41.54%、36.92%，各方法敏感度胃液均高于痰液，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為14.696、13.898、12.334，P值均為0.000)；特異度方面差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為2.347、0.000、0.158，P值分別為0.126、1.000、0.691)，見(jiàn)表2，3。檢測(cè)胃液總的陽(yáng)性檢出率為87.69%(57/65)，檢測(cè)痰液總的陽(yáng)性檢出率為58.46%(38/65)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.114，P=0.000)。

討 論

兒童結(jié)核病疫情嚴(yán)重，發(fā)病率、死亡率居高不下。2014年WHO出版了兒童結(jié)核病處理指南[6]，同時(shí)從戰(zhàn)略上提出了“全球兒童結(jié)核病零死亡率”藍(lán)圖。但是兒童結(jié)核病缺乏典型癥狀，病變部位標(biāo)本獲取困難，MTB檢出率低。痰涂片陽(yáng)性率一般低于15%[4]，培養(yǎng)陽(yáng)性率一般低于30%[7]，且培養(yǎng)耗時(shí)較長(zhǎng)，需1～2個(gè)月。核酸檢測(cè)技術(shù)是目前兒童結(jié)核病檢測(cè)的研究熱點(diǎn)，在兒童結(jié)核病中檢測(cè)的敏感度可達(dá)40%～60%[8]；但筆者檢索發(fā)現(xiàn)，有關(guān)兒童胃液或痰液MTB核酸檢測(cè)的報(bào)道卻非常少。本研究采用3種分子生物學(xué)方法檢測(cè)胃液和年長(zhǎng)兒痰液，檢出率較高，時(shí)間卻縮短至2天內(nèi)， 國(guó)內(nèi)尚無(wú)報(bào)道。

表1 以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)3種分子檢測(cè)技術(shù)對(duì)186例患兒胃液檢測(cè)MTB效能的比較

注表中“陽(yáng)性”表示檢測(cè)出MTB；“陰性”表示沒(méi)有檢測(cè)出MTB。敏感度=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%,特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%,陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%

表2 以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)3種分子檢測(cè)技術(shù)對(duì)年長(zhǎng)兒胃液檢測(cè)MTB效能的比較

注敏感度=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%,特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%,陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%

表3 以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)3種分子檢測(cè)技術(shù)對(duì)年長(zhǎng)兒痰液檢測(cè)MTB效能的比較

注敏感度=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%,特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%,陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%

FQ-PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。與普通PCR相比，F(xiàn)Q-PCR檢測(cè)的敏感度、特異度均較高，污染少，自動(dòng)化程度高。楊睿[9]利用此技術(shù)檢測(cè)涂陰肺結(jié)核痰標(biāo)本，陽(yáng)性檢出率為60.5%，遠(yuǎn)高于涂片法和培養(yǎng)法(分別為21.5%和34.0%)。除了對(duì)痰標(biāo)本具有較高的陽(yáng)性檢出率之外，F(xiàn)Q-PCR對(duì)肺外標(biāo)本包括腹腔積液、淺表淋巴結(jié)等仍然具有較好的敏感度。何紅彥等[10]應(yīng)用FQ-PCR法對(duì)60例結(jié)核性腦膜炎患者的腦脊液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，陽(yáng)性檢出率為48.3%，對(duì)骨關(guān)節(jié)結(jié)核石蠟包埋標(biāo)本檢測(cè)的敏感度明顯高于抗酸染色法[11-12]。本研究以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)Q-PCR法檢測(cè)186例兒童胃液的敏感度為81.51%，檢測(cè)年長(zhǎng)兒胃液的敏感度為80.00%，明顯高于上述結(jié)果，提示兒童胃液載菌量較高；FQ-PCR法檢測(cè)年長(zhǎng)兒誘導(dǎo)痰的敏感度為47.69%,與何紅彥等[10]結(jié)果一致，與嚴(yán)明[13]報(bào)道誘導(dǎo)排痰其痰涂片陽(yáng)性率(47.62%)的結(jié)果相似，高于兒童自然排痰痰涂片及痰培養(yǎng)結(jié)果，說(shuō)明誘導(dǎo)排痰可提高檢出率，但仍低于楊睿[9]的研究結(jié)果，分析與兒童痰液載菌量低有關(guān)。

SAT技術(shù)是新一代核酸檢測(cè)技術(shù)，具有高敏感度、高特異度、低污染、反應(yīng)穩(wěn)定、活菌檢測(cè)、及時(shí)判愈等優(yōu)點(diǎn)。范琳等[14]和秦志華等[15]對(duì)涂陰疑似肺結(jié)核患者支氣管肺泡灌洗液進(jìn)行檢測(cè)，SAT檢測(cè)結(jié)核病患者的敏感度、特異度與BACTEC MGIT 960培養(yǎng)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Tiwari等[16]報(bào)道SAT法在BACTEC MGIT 960陽(yáng)性者痰液、支氣管沖洗液標(biāo)本的敏感度分別為84%、89%，其檢測(cè)支氣管沖洗液診斷結(jié)核病的敏感度與Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)相似。張海晴等[17]應(yīng)用SAT法對(duì)兒童腦脊液進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果證明SAT在檢測(cè)兒童結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中的MTB時(shí)，具有快速、敏感度和特異度較高等優(yōu)點(diǎn)。本研究以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用SAT法檢測(cè)兒童胃液，也表現(xiàn)出了較好的敏感度與特異度(分別為78.15%和98.51%)，與Yan等[18]對(duì)2457例肺結(jié)核患者SAT檢測(cè)痰液的敏感度為75.8%，特異度為100.0%的結(jié)果一致，但SAT法檢測(cè)年長(zhǎng)兒誘導(dǎo)痰的敏感度(41.54%)仍然較低。

耐藥基因芯片技術(shù)具有檢測(cè)通量大，快速、準(zhǔn)確、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)，不但能快速檢測(cè)樣本中的MTB，還能同時(shí)判斷耐藥性。一些研究結(jié)果表明，與藥物敏感性試驗(yàn)相比，基因芯片檢測(cè)MTB對(duì)利福平和異煙肼耐藥性具有較好的一致性[19-20]，基因芯片對(duì)利福平耐藥性檢測(cè)的符合率為97.46%，對(duì)異煙肼耐藥性檢測(cè)的符合率為96.19%[21]。由于樣本量小，且沒(méi)有其他方法比較，本研究沒(méi)有觀察耐藥基因芯片檢測(cè)異煙肼和利福平耐藥率的差異。本研究耐藥基因芯片法檢測(cè)兒童胃液的敏感度(73.11%)，明顯高于林秀華等[22]利用基因芯片檢測(cè)結(jié)核性膿胸膿液的敏感度(48.9%)，而特異度(92.54%)與其95.7%的特異度結(jié)果一致。

國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究結(jié)果表明，胃液檢測(cè)是目前診斷兒童肺結(jié)核最敏感、快捷的方法。國(guó)外有文章報(bào)道[23-24]，通過(guò)支氣管肺泡灌洗液進(jìn)行培養(yǎng)的陽(yáng)性率為28%～44%，對(duì)肺結(jié)核和支氣管結(jié)核診斷非常有幫助，但氣管鏡很難作為兒童常規(guī)檢查，且陽(yáng)性率并無(wú)顯著升高。糞便標(biāo)本檢測(cè)簡(jiǎn)單易行，但敏感度低于胃液[25]。胃液中MTB含量較高，檢測(cè)胃液的敏感度高于誘導(dǎo)痰、支氣管鏡刷液、鼻咽吸取物和糞便標(biāo)本[26-28]。2014年WHO[6]《兒童結(jié)核病處理指南》及2017年公布的《WS 288—2017肺結(jié)核診斷》[5]中也都強(qiáng)調(diào)了兒童胃液檢測(cè)的重要性。本研究3種技術(shù)檢測(cè)胃液的敏感度達(dá)73.11%～81.51%，明顯高于胃液涂片檢查的陽(yáng)性率(35.7%)[29]及培養(yǎng)陽(yáng)性率(25%～60%)[30]，也高于國(guó)外報(bào)道的其他樣本的檢測(cè)結(jié)果[23-25]；以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)，3種方法的Kappa值在0.603～0.709之間，均接近較好水平，SAT法的一致性最好，進(jìn)一步說(shuō)明3種分子技術(shù)檢測(cè)兒童胃液的重要價(jià)值。

本研究186例患兒全部于晨起空腹(禁食水4 h以上)抽取胃液，3 ml即可滿(mǎn)足診斷要求。如超過(guò)4 h 送檢，樣本瓶中需加入100 mg碳酸鈉用于中和胃酸，可有效降低胃酸對(duì)MTB的破壞降解[31]。SAT法是活菌檢測(cè)，F(xiàn)Q-PCR和耐藥基因芯片技術(shù)無(wú)法區(qū)分死菌和活菌，在檢測(cè)胃液樣本時(shí)，SAT法的敏感度介于FQ-PCR和耐藥基因芯片之間，說(shuō)明胃液中MTB活性受胃酸影響不顯著，可能與MTB細(xì)胞壁富含脂質(zhì)保護(hù)膜，不易受胃酸侵蝕，加上夜間胃液分泌量少，胃腸蠕動(dòng)使MTB在胃內(nèi)停留時(shí)間短等因素有關(guān)，這與國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道[14]不一致。

在年長(zhǎng)兒中，3種技術(shù)檢測(cè)胃液的敏感度及總的陽(yáng)性檢出率胃液均高于痰液，進(jìn)一步說(shuō)明胃液檢測(cè)價(jià)值好于痰液；本研究中檢測(cè)年長(zhǎng)兒誘導(dǎo)痰的敏感度與嚴(yán)明[13]的一項(xiàng)研究結(jié)果相當(dāng)，與Ruiz等[32]報(bào)道的患兒誘導(dǎo)痰得到的陽(yáng)性細(xì)菌學(xué)結(jié)果與胃液相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果不一致，考慮與患兒非晨起排痰、誘導(dǎo)咳痰后不會(huì)吐痰，仍將部分痰液下咽有關(guān)；但誘導(dǎo)痰的檢測(cè)敏感度高于痰涂片(一般低于15%[4])，也高于痰培養(yǎng)結(jié)果(一般低于30%[7])，總的陽(yáng)性檢出率達(dá)58.46%，且簡(jiǎn)單、快捷、可重復(fù)性好、無(wú)明顯不適，仍然是很有價(jià)值的輔助診斷方法。

本研究不足之處：沒(méi)有觀察耐藥基因芯片檢測(cè)耐藥率的差異性，這將成為今后的研究方向；分子技術(shù)均存在假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果，應(yīng)結(jié)合其他檢測(cè)結(jié)果綜合分析判斷病情；3種方法聯(lián)合檢測(cè)準(zhǔn)確、快捷，但費(fèi)用相對(duì)較高，因此從經(jīng)濟(jì)角度考慮，可選其單一方法檢測(cè)胃液，敏感度、特異度均較高，費(fèi)用卻明顯降低。

總之，兒童結(jié)核病診斷困難，多種標(biāo)本類(lèi)型、聯(lián)合檢測(cè)及提高檢測(cè)技術(shù)有望提高確診率。FQ-PCR、SAT、耐藥基因芯片3種分子方法檢測(cè)MTB敏感度高、特異度強(qiáng)，對(duì)兒童肺結(jié)核的診斷具有重要價(jià)值。

志謝首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心結(jié)核病防治臨床中心唐神結(jié)教授對(duì)本研究進(jìn)行了精心指導(dǎo)！