曹清蕓，柏明見(jiàn)，何美琳，侯 芳，梁國(guó)威

(航天中心醫(yī)院a.檢驗(yàn)科；b.病理科,北京 100049)

B族鏈球菌(group BStreptococcus，GBS)又稱(chēng)無(wú)乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)，為革蘭氏陽(yáng)性球菌。美國(guó)疾病預(yù)防控制中心報(bào)告顯示，孕婦感染GBS后，導(dǎo)致早產(chǎn)、胎膜早破、產(chǎn)褥感染等疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加[1]，并可引起新生兒敗血癥、肺炎和腦膜炎[2]。部分國(guó)家已對(duì)孕35～37周的孕婦常規(guī)行GBS篩查，并對(duì)GBS陽(yáng)性的孕婦預(yù)防性使用抗生素[3]。妊娠期由于生理激素的改變，陰道微生態(tài)的構(gòu)成發(fā)生變化，同時(shí)陰道前庭腺體和陰道分泌物增加，外陰處于濕潤(rùn)狀態(tài)利于細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖。因此，妊娠期更容易發(fā)生各種陰道感染[4]。Nugent等人在1991年根據(jù)陰道分泌物涂片革蘭氏染色的結(jié)果提出了新的診斷標(biāo)準(zhǔn)被稱(chēng)為診斷細(xì)菌性陰道病(bacterial vaginosis，BV)的金標(biāo)準(zhǔn)[5]，目前，Nugent評(píng)分已被廣泛應(yīng)用于臨床診斷BV。BV是由陰道菌群紊亂引起，考慮GBS的陽(yáng)性率可能會(huì)受陰道菌群紊亂影響，因此本研究擬對(duì)妊娠末期孕婦GBS感染和Nugent評(píng)分[5]進(jìn)行相關(guān)性探討，為孕婦產(chǎn)前檢查提供更多的幫助。

1材料與方法

1.1 研究對(duì)象 本研究為回顧性研究，通過(guò)我院檢驗(yàn)科實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)(laboratory information system，LIS)進(jìn)行檢索，時(shí)間為2017年10月～2018年8月，檢索策略如下，初始內(nèi)容為GBS，共檢索出妊娠末期孕婦1 294例，進(jìn)一步對(duì)上述孕婦進(jìn)行檢索，其中673例孕婦未完善陰道微生態(tài)檢查排除在外，最終納入621例孕婦，平均年齡30.7±4.3歲。

1.2 試劑與儀器 GBS核酸檢測(cè)試劑盒來(lái)自博爾誠(chéng)(北京)科技有限公司，檢測(cè)儀器為實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析儀(ABI 7500，美國(guó))。Nugent評(píng)分用革蘭氏染液(梅里埃公司)及普通光學(xué)顯微鏡一臺(tái)。所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集：由我院產(chǎn)科醫(yī)生采集孕婦陰道分泌物標(biāo)本，共采集兩份陰道分泌物拭子并立即送檢，其中一份做Nugent評(píng)分，另一份做GBS核酸檢測(cè)，采樣孕婦納入標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)心血管、肝、腎及免疫系統(tǒng)嚴(yán)重疾??；無(wú)甲狀腺及妊娠并發(fā)糖尿??；取樣前2周內(nèi)無(wú)全身或陰道局部使用抗生素；取樣前24 h未使用過(guò)栓劑和洗液。

1.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR：利用TaqMan探針實(shí)時(shí)PCR技術(shù)，針對(duì)GBS基因組特異且無(wú)高頻SNP位點(diǎn)的序列區(qū)域CAMP因子，設(shè)計(jì)出特異性引物和探針，配以全封閉PCR體系，檢測(cè)標(biāo)本中的B族鏈球菌DNA。體系中通過(guò)加入內(nèi)參照系統(tǒng)排除PCR反應(yīng)過(guò)程中可能的假陰性結(jié)果，并通過(guò)加入U(xiǎn)NG避免可能的擴(kuò)增污染物造成的假陽(yáng)性結(jié)果。具體擴(kuò)增步驟為：①UNG反應(yīng)50℃ 2 min；②預(yù)變性95℃ 5 min；③PCR (95℃15s→60℃35s)45個(gè)循環(huán)。

1.3.3 Nugent評(píng)分：將陰道分泌物涂片經(jīng)革蘭染色后，在油鏡下觀察四種優(yōu)勢(shì)菌形態(tài)并計(jì)數(shù)，即乳酸桿菌、陰道加德納菌、普雷沃菌和動(dòng)彎桿菌，以半定量評(píng)估法對(duì)陰道分泌物標(biāo)本進(jìn)行評(píng)分，標(biāo)本分值為四種細(xì)菌形態(tài)分值之和[5]。正常為0～3分，疑似為4～6分，BV患者為7～10分，見(jiàn)表1。

表1正常人和BV患者陰道分泌物革蘭染色Nugent計(jì)分

每個(gè)油鏡視野定量菌體數(shù)定量分值乳酸桿菌陰道加德納菌/普雷沃菌動(dòng)彎桿菌>306～301～5<10012344321022110

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 16.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，組間率的比較采用卡方檢驗(yàn)(χ2)，組間量的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，雙側(cè)P值<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 高齡孕婦組與低齡孕婦組GBS陽(yáng)性率比較 以35歲為界進(jìn)行分組，分為低齡孕婦組(≤35歲)與高齡孕婦組(>35歲)，其中，低齡孕婦組497例，GBS陽(yáng)性66例，陽(yáng)性率為13.30%，高齡孕婦組124例，GBS陽(yáng)性14例，陽(yáng)性率11.29%，組間陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.350，P>0.05)。

2.2 GBS陰性組、陽(yáng)性組Nugent評(píng)分 GBS結(jié)果陰性組(n=541)與陽(yáng)性組(n=80)Nugent評(píng)分水平分別為4.07±1.11 vs 4.66±1.49，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-3.380，P<0.001)。

2.3 Nugent評(píng)分分組組間GBS陽(yáng)性率比較 以Nugent評(píng)分進(jìn)行分組，Nugent≤3分為正常組，4分≤Nugent≤6分為疑似組，Nugent≥7分為BV患者組，三組GBS陽(yáng)性率分別為9.14%(17/186)，11.81%(45/381)和33.33(18/54)。對(duì)三組陽(yáng)性率進(jìn)行比較，正常組與疑似組間GBS陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.916，P=0.339)，正常組與BV組GBS陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=19.665，P<0.001)，疑似組與BV組GBS陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.689，P<0.001)。

3討論西方國(guó)家在近幾十年對(duì) GBS感染進(jìn)行了大量研究，現(xiàn)已證實(shí)GBS為圍產(chǎn)期感染的主要致病菌之一，占圍產(chǎn)期感染的首位。國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的妊娠婦女 GBS帶菌率為10.1%～32.4%[6]。時(shí)春艷等[7]研究顯示，北京地區(qū)孕婦GBS陰道帶菌率為13%。本研究入組人群亦為北京地區(qū)孕婦，結(jié)果顯示在621例孕婦中GBS陽(yáng)性率為12.88%，與時(shí)春艷等研究結(jié)果接近。同時(shí)本研究顯示GBS感染在高齡組與低齡組孕婦間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。GBS為革蘭陽(yáng)性球菌，是健康婦女陰道菌群的常駐菌。妊娠期由于體內(nèi)雌激素水平升高，利于細(xì)菌的滋生和繁殖，引起陰道菌群紊亂，進(jìn)而誘發(fā)下生殖道細(xì)菌感染。將陰道分泌物經(jīng)革蘭染色后進(jìn)行Nugent評(píng)分是診斷BV的主要方法之一。本研究發(fā)現(xiàn)GBS陽(yáng)性組的Nugent評(píng)分高于GBS陰性組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同時(shí)，以Nugent評(píng)分分組后，BV患者組GBS陽(yáng)性率高于正常組與疑似組。因此，我們考慮妊娠末期孕婦GBS陽(yáng)性率與Nugent評(píng)分有一定相關(guān)性，提示當(dāng)患者處于BV狀態(tài)時(shí)，GBS感染的陽(yáng)性率增高的幾率增大，有一定的提示作用。經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)檢索，目前相關(guān)研究較少，而本研究的樣本量相對(duì)較少，在今后的工作中需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步驗(yàn)證該結(jié)論的可靠性。

綜上所述，GBS感染與陰道微生態(tài)紊亂有一定的相關(guān)性，Nugent評(píng)分越高，GBS感染率越高，有一定的臨床提示意義。