李春蕓 陳春燕 陳 彬

體液細(xì)胞常規(guī)檢驗(yàn)是鑒別滲出液與漏出液的重要方法之一，目前常規(guī)測(cè)定方法是用牛鮑氏手工鏡檢法計(jì)數(shù)，其存在的弊端是操作繁瑣，重復(fù)性差，且與檢驗(yàn)人員水平密切相關(guān)。因此，迫切需要一種更簡(jiǎn)單、快速、精密度高以及準(zhǔn)確度高的方法替代。血常規(guī)分析儀計(jì)數(shù)體液細(xì)胞是目前使用最多的一種替代方法，但由于大部分血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞(white blood cell，WBC)檢測(cè)下限為100×106/L，且間皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞對(duì)WBC的檢測(cè)易造成干擾，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性[1-2]。IRIS IQ200型全自動(dòng)尿沉渣分析儀(簡(jiǎn)稱(chēng)IQ200分析儀)主要用于尿液沉渣定量分析，其測(cè)定WBC和紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)的線(xiàn)性范圍大，且IQ200分析儀具有人工修飾功能，可任意地選取熒光屏上可疑的成分圖像，根據(jù)檢測(cè)人員經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行判斷，重新分類(lèi)。

本研究參照“2014版國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)體液細(xì)胞自動(dòng)化計(jì)數(shù)儀性能和驗(yàn)證指南”對(duì)IQ200分析儀計(jì)數(shù)體液WBC和RBC進(jìn)行性能評(píng)價(jià)[3-4]。評(píng)估IQ200分析儀計(jì)數(shù)體液WBC和RBC的各項(xiàng)性能指標(biāo)(精密度，攜帶污染率，檢出下限，相關(guān)性)，評(píng)價(jià)IQ200分析儀計(jì)數(shù)體液中WBC和RBC的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年1-6月?？卺t(yī)院住院的150例患者的150份體液(胸水、腹水及腦脊液)標(biāo)本，其中腦脊液33份，胸水67份，腹水50份。外觀正常標(biāo)本26份，微渾標(biāo)本38份，黃色渾濁標(biāo)本40份，血性46份。標(biāo)本立即送檢，并在2 h內(nèi)完成計(jì)數(shù)。

1.2 儀器與試劑

采用IQ200分析儀[美國(guó)國(guó)際遙控影像系統(tǒng)有限公司(International Remote Imaging System，IRIS)]及配套試劑、質(zhì)控品(美國(guó)IRIS公司)；牛鮑氏計(jì)數(shù)板(上海求精生化試劑儀器有限公司)；光學(xué)顯微鏡(日本OLYMPUS公司)；生理鹽水(自配)。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 標(biāo)本前期處理

對(duì)不同外觀的標(biāo)本進(jìn)行前期處理，外觀正常標(biāo)本直接計(jì)數(shù)，血性、渾濁標(biāo)本用生理鹽水按1∶5～1∶100倍稀釋。每份標(biāo)本分成兩份，一份用于手工計(jì)數(shù)，一份用于IQ200分析儀計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)即為最終細(xì)胞數(shù)，見(jiàn)表1。

表1 不同外觀標(biāo)本采用的稀釋倍數(shù)

1.3.2 空白實(shí)驗(yàn)

用去離子水作為樣本，分別使用儀器法和手工法檢測(cè)3次，計(jì)數(shù)WBC和RBC。由2名有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員采用雙盲方式完成，取2次測(cè)定結(jié)果的平均值進(jìn)行報(bào)告。

1.3.3 批內(nèi)精密度

選取WBC和RBC含量低值、中值及高值的3份體液標(biāo)本，每份分別使用儀器法和手工法連續(xù)計(jì)數(shù)11次，各剔除1個(gè)最差的結(jié)果，分別統(tǒng)計(jì)每組10個(gè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差(S)和變異系數(shù)(coefficient of variation，CV)。

1.3.4 攜帶污染率

分別取WBC和RBC高值體液標(biāo)本連續(xù)測(cè)定3次(H1、H2、H3)，然后再測(cè)定3次低值標(biāo)本(L1、L2、L3)，計(jì)算污染率，其計(jì)算為公式1：

污染率=(L1-L3)÷(H3-L3)×100% (1)

1.3.5 牛鮑氏手工計(jì)數(shù)法

標(biāo)本前期處理后，再手工顛倒15次充分混勻，然后用移液管吸取少量滴入牛鮑氏計(jì)數(shù)板稍待靜置5～10 min，低倍鏡下計(jì)數(shù)10個(gè)大方格內(nèi)RBC數(shù)和WBC數(shù)。由2名有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員采用雙盲方式完成，取2次測(cè)定結(jié)果的平均值進(jìn)行報(bào)告，上述所有標(biāo)本2 h內(nèi)測(cè)定完畢。

1.3.6 IQ200分析儀計(jì)數(shù)法

標(biāo)本前期處理后，再手工顛倒15次充分混勻后按照儀器說(shuō)明書(shū)上機(jī)檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)由有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員對(duì)可疑的成分圖像重新判斷，并記錄修飾后的定量計(jì)數(shù)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法空白實(shí)驗(yàn)

用去離子水作為樣本，手工法計(jì)數(shù)WBC和RBC均為0，儀器法計(jì)數(shù)WBC和RBC均為0。

因此IQ200分析儀計(jì)數(shù)體液WBC和RBC的檢測(cè)下限可達(dá)到0，同手工法計(jì)數(shù)。

2.2 兩種方法計(jì)數(shù)體液細(xì)胞精密度

兩種方法分別計(jì)數(shù)高值、中值及低值細(xì)胞11次后，各剔除一個(gè)最差結(jié)果，其平均值，標(biāo)準(zhǔn)差，變異系數(shù)見(jiàn)表2。

表2顯示，在兩種方法檢測(cè)中，細(xì)胞數(shù)越少，精密度越差。儀器法和手工法比較，IQ200分析儀計(jì)數(shù)體液WBC、RBC變異系數(shù)均＜10%，比手工法低，可見(jiàn)IQ200分析儀計(jì)數(shù)體液細(xì)胞精密度高，適用于體液細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.3 IQ200分析儀攜帶污染率

WBC攜帶污染率為0.03%，RBC攜帶污染率為0。IQ200分析儀計(jì)數(shù)體液WBC和RBC的攜帶污染率較低，在計(jì)數(shù)體液細(xì)胞時(shí)，可以不必清洗后再測(cè)定，見(jiàn)表3。

2.4 兩種方法計(jì)數(shù)體液細(xì)胞的相關(guān)性分析

IQ200分析儀與手工法計(jì)數(shù)體液WBC相關(guān)性呈高度相關(guān)r=0.943，如圖1所示。

表2 手工法和IQ200分析儀計(jì)數(shù)體液細(xì)胞的變異系數(shù)CV(%，

表2 手工法和IQ200分析儀計(jì)數(shù)體液細(xì)胞的變異系數(shù)CV(%，

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表3 IQ200分析儀攜帶污染率

圖1 IQ200分析儀與手工法計(jì)數(shù)體液WBC相關(guān)性散點(diǎn)圖

IQ200分析儀與手工法計(jì)數(shù)體液RBC相關(guān)性呈高度相關(guān)r=0.982，如圖2所示。

圖2 IQ200分析儀與手工法計(jì)數(shù)體液RBC相關(guān)性散點(diǎn)圖

3 討論

牛鮑氏手工鏡檢法計(jì)數(shù)是計(jì)數(shù)體液細(xì)胞的常規(guī)方法和金標(biāo)準(zhǔn)，但存在的缺點(diǎn)是操作繁瑣，重復(fù)性差，耗時(shí)長(zhǎng)，對(duì)檢驗(yàn)人員水平要求較高。2014版國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)體液細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀性能和驗(yàn)證指南建議自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀準(zhǔn)確計(jì)數(shù)體液細(xì)胞的驗(yàn)證方法[4]。

目前，有多種血液分析儀應(yīng)用于漿膜腔積液細(xì)胞的計(jì)數(shù)，但體液中間皮細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞對(duì)WBC的檢測(cè)造成干擾，特別是間皮細(xì)胞，有些分析儀會(huì)把間皮細(xì)胞歸類(lèi)在WBC中計(jì)數(shù)，造成WBC計(jì)數(shù)增加，而影響結(jié)果[5-6]。一些血液分析儀由于其背景計(jì)數(shù)高，對(duì)體液細(xì)胞計(jì)數(shù)有一定的局限性，尤其當(dāng)?shù)图?xì)胞濃度時(shí)影響更加明顯[7]。低細(xì)胞數(shù)導(dǎo)致了自動(dòng)化檢測(cè)的精密度下降，其CV甚至＞20%，越接近自動(dòng)化分析儀的最低檢出限，細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性和精密度越差[8-9]。由于低值細(xì)胞計(jì)數(shù)常見(jiàn)于各種體液，尤其是腦脊液，因此必須驗(yàn)證儀器準(zhǔn)確計(jì)數(shù)低值細(xì)胞的性能[4]。IQ200分析儀空白試驗(yàn)WBC可達(dá)到0，其最低檢出限可達(dá)到0。當(dāng)體液細(xì)胞過(guò)少時(shí)，IQ200分析儀比血液分析儀更有優(yōu)勢(shì)，血液分析儀在細(xì)胞＜1×106/L時(shí)，儀器不能準(zhǔn)確測(cè)出。許多研究報(bào)道顯示，血液分析儀僅用于漿膜腔積液細(xì)胞的計(jì)數(shù)，不能用于腦脊液的計(jì)數(shù)。IQ200分析儀不僅適用于漿膜腔積液，而且也適用于腦脊液的計(jì)數(shù)，但其不足之處在于不能對(duì)WBC進(jìn)行分類(lèi)。

IQ200分析儀使用流式細(xì)胞原理和先進(jìn)的自動(dòng)粒子識(shí)別(APR)分析系統(tǒng)。應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)，每個(gè)檢測(cè)樣本在鞘液包裹下進(jìn)入一個(gè)流動(dòng)樣本室，再進(jìn)行連續(xù)攝影成像，將攝像所得的有形成分與記憶庫(kù)中有形成分進(jìn)行對(duì)比，從而判斷有形成分的種類(lèi)及精確計(jì)數(shù)有形成分的數(shù)量。同時(shí)IQ200分析儀具有人工修飾功能，可任意地選取熒光屏上可疑的成分圖像，根據(jù)檢測(cè)人員對(duì)形態(tài)判定的經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行判斷，重新分類(lèi)，并且可以計(jì)算出對(duì)應(yīng)的數(shù)量，修飾功能可以極大提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。

IQ200分析儀具有很好的精密度，無(wú)論是高值、中值及低值體液細(xì)胞數(shù)，其變異系數(shù)均＜10%。IQ200分析儀還具有較低的互染率，RBC互染率為0，WBC互染率為0.03%；與手工計(jì)數(shù)法之間均呈高度相關(guān)(WBC r=0.943、RBC r=0.982)。故IQ200分析儀計(jì)數(shù)體液WBC和RBC具有檢出下限低、精密度高及攜帶污染率低，與手工計(jì)數(shù)法相關(guān)性高的特點(diǎn)，且簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，適用于體液WBC和RBC計(jì)數(shù)。