孫 梅 耿建利 曲業(yè)敏 王曉偉 姚繼承 邵淑麗 孫勝波 王明義*

威高AutolumiS 3000型全自動(dòng)免疫分析儀目前在國(guó)內(nèi)醫(yī)院檢驗(yàn)科使用廣泛，但對(duì)其性能進(jìn)行評(píng)價(jià)的研究相對(duì)缺少，也無(wú)對(duì)應(yīng)的驗(yàn)證方案提出。根據(jù)臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的要求，本研究實(shí)驗(yàn)室對(duì)新購(gòu)進(jìn)的AutolumiS 3000型全自動(dòng)免疫分析儀的技術(shù)性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，以丙型肝炎為檢測(cè)項(xiàng)目，定性檢測(cè)抗-丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)，以雅培i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑為參照，驗(yàn)證檢測(cè)AutolumiS 3000型全自動(dòng)免疫分析儀的精密度、檢出限、陰陽(yáng)性符合率等性能，為國(guó)產(chǎn)自動(dòng)免疫定量檢測(cè)系統(tǒng)的專業(yè)化技術(shù)評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2017年2月至2017年6月威海市立醫(yī)院住院及門診患者的血清標(biāo)本119份，其中無(wú)反應(yīng)性樣本40份、有反應(yīng)性樣本59份以及確診樣本20份，在-20 ℃條件下保存待測(cè)。批內(nèi)精密度樣本采用門診患者的新鮮血清稀釋一例吸光度值比臨界值(S/CO)為26.91的陽(yáng)性血清，配制濃度為臨界濃度(1±20)%。準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)樣本采用2018年山東省2次室間質(zhì)評(píng)留樣。

1.2 儀器和試劑

AutolumiS 3000型全自動(dòng)免疫分析儀(威海威高生物科技有限公司)及配套試劑微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析(microparticle chemiluminescence immunoassay，MCIA)，定性檢測(cè)抗-HCV，結(jié)果判斷以S/CO≥1.0為陽(yáng)性；雅培i2000型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀(美國(guó)雅培公司)及配套試劑，原理為化學(xué)發(fā)光微粒子免疫測(cè)定(chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA)法，定性檢測(cè)抗-HCV，結(jié)果判斷以S/CO≥1.0為陽(yáng)性。重組免疫印跡試驗(yàn)(recombinant strip immunoblot assay，RIBA)檢測(cè)試劑(新加坡MP生物學(xué)亞太有限公司)，出現(xiàn)一個(gè)條帶判為不確定，即(±)，出現(xiàn)兩個(gè)或兩個(gè)以上條帶判為陽(yáng)性?？?HCV標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，濃度1 NCU/ml，購(gòu)自北京康徹思坦生物公司。

1.3 檢測(cè)方法

參照全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程和美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(clinical and laboratory standards institute，CLSI)的要求，嚴(yán)格按照儀器的操作規(guī)程和試劑說明書操作，在室內(nèi)質(zhì)量控制結(jié)果允許范圍內(nèi)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。以雅培i2000型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑為參照。

1.4 觀察與評(píng)價(jià)指標(biāo)

(1)精密度驗(yàn)證。檢測(cè)臨界值±20%濃度的兩個(gè)樣本(L1，L2)，連續(xù)檢測(cè)20次，1 d內(nèi)完成，計(jì)算20個(gè)測(cè)定值CV評(píng)價(jià)批內(nèi)精密度；檢測(cè)配套陰性，弱陽(yáng)性質(zhì)控品(QCl，QC2)，每日1次，連續(xù)檢測(cè)20 d，計(jì)算20個(gè)測(cè)定值的CV，評(píng)價(jià)批間精密度。

(2)準(zhǔn)確度。檢測(cè)2018年2次的感染性疾病血清學(xué)標(biāo)志物系列A的EQA留樣(批號(hào)為182111-182115和182121-182125)。

(3)敏感性。依據(jù)CLSIEP12-A2[1]用已知標(biāo)準(zhǔn)值的抗-HCV標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，使用無(wú)反應(yīng)性標(biāo)本系列，稀釋濃度分別為0.5 NCU/ml、0.45 NCU/ml、0.4 NCU/ml、0.35 NCU/ml、0.3 NCU/ml、0.25 NCU/ml、0.2 NCU/ml、0.15 NCU/ml和0.1 NCU/ml。測(cè)定其濃度到不再產(chǎn)生變化為止，其不再產(chǎn)生變化的最低濃度即為最低檢測(cè)限。每個(gè)濃度重復(fù)檢測(cè)3次，取均值。

(4)陰陽(yáng)性符合率。AutolumiS 3000與雅培i2000分別檢測(cè)20份臨床已確診丙型肝炎的患者血清樣本和20名醫(yī)院健康體檢合格人員的20份樣本，統(tǒng)計(jì)檢測(cè)結(jié)果陰陽(yáng)性符合率。

(5)AutolumiS 3000不同檢測(cè)水平與i2000檢測(cè)結(jié)果一致性比較。AutolumiS 3000檢測(cè)的40份無(wú)反應(yīng)性樣本和59份有反應(yīng)性樣本，判斷結(jié)果的一致性，并對(duì)臨床22份抗-HCV反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)行重組免疫結(jié)合試驗(yàn)(RIBA)確證實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 精密度

AutolumiS 3000的批內(nèi)精密度良好，(臨界值+20)%濃度樣本100%為弱陽(yáng)性；(臨界值-20)%濃度樣本100%為陰性，而質(zhì)控批間精密度完全滿足要求，其精密度驗(yàn)證見表1。

表1 AutolumiS 3000檢測(cè)抗-HCV精密度

2.2 準(zhǔn)確度

AutolumiS 3000檢測(cè)感染性疾病血清學(xué)標(biāo)志物系列A的抗-HCV結(jié)果，在2018年山東省2次室間質(zhì)評(píng)中，符合率均為100%，表明抗-HCV檢測(cè)的準(zhǔn)確度符合要求。

2.3 最低檢出限

AutolumiS 3000的檢出限濃度為0.15 NCU/ml；i2000的檢出限濃度為0.3 NCU/ml，表明AutolumiS 3000分析有較高的靈敏度。稀釋標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果見表2。

表2 AutolumiS 3000與i2000對(duì)稀釋標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果

2.4 符合率

20份臨床確診丙型肝炎標(biāo)本，2臺(tái)儀器抗-HCV檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，陽(yáng)性符合率為100%；20份健康體檢者樣本，2臺(tái)儀器抗-HCV檢測(cè)結(jié)果均為陰性，陰性符合率為100%，見表3。

表3 AutolumiS 3000不同檢測(cè)水平與i2000的符合率

2.5 AutolumiS 3000不同檢測(cè)水平與i2000檢測(cè)結(jié)果一致性比較

AutolumiS 3000復(fù)測(cè)雅培i2000弱反應(yīng)性樣本22份，結(jié)果相符的有3份。RIBA確證試驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果3份與AutolumiS 3000相符，其余為不確定或陰性，見表4。

表4 22份抗-HCV反應(yīng)性標(biāo)本RIBA確證結(jié)果

3 討論

丙型肝炎是由HCV引起的傳染病，全球的HCV感染率約為3%，中國(guó)是HCV感染高發(fā)國(guó)家，且感染率逐年增加[2-3]。中國(guó)一般人群抗HCV流行率為3.2%，估計(jì)有3800萬(wàn)HCV感染者[4]。丙肝病毒感染發(fā)病隱匿，癥狀不典型，往往發(fā)現(xiàn)的時(shí)候，已經(jīng)出現(xiàn)了肝硬化甚至肝癌，因此被冠以“沉默殺手”的稱號(hào)[5]。為此，篩查的重?fù)?dān)落在檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，須通過檢驗(yàn)方法來篩查丙肝[6]。丙肝抗體測(cè)定是常用于判斷丙肝病毒是否感染的初篩試驗(yàn)，其測(cè)定的正確性具有重要的臨床意義[7]。AutolumiS 3000采用微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析(MCIA)技術(shù)，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速、穩(wěn)定、易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，然而必須對(duì)其進(jìn)行性能驗(yàn)證以判斷其檢測(cè)性能是否滿足臨床需求。

精密度是反映儀器性能的基本指標(biāo)之一，CLSIEP5-A2要求采用較長(zhǎng)的周期進(jìn)行儀器精密度評(píng)價(jià)，從而客觀、真實(shí)地反映儀器長(zhǎng)期的工作性能。本研究結(jié)果顯示，AutolumiS 3000型分析儀檢測(cè)批內(nèi)和批間精密度變異系數(shù)(CV%)均良好，表明本研究的檢測(cè)系統(tǒng)穩(wěn)定、可靠；感染性疾病血清學(xué)標(biāo)志物系列A的抗-HCV再檢測(cè)結(jié)果，符合率為100%，表明抗-HCV檢測(cè)的準(zhǔn)確度符合要求；檢出限評(píng)價(jià)是評(píng)估檢驗(yàn)方法能檢測(cè)到的分析物的最低濃度，而AutolumiS 3000的檢出限為0.15 NCU/ml；陰陽(yáng)性符合率均為100%，表明檢測(cè)系統(tǒng)滿足臨床要求。

表3顯示，AutolumiS 3000檢測(cè)的抗-HCV值S/CO為1.01～4.0時(shí)與i2000符合率非常低，為13.3%；當(dāng)S/CO為4.01～8.0時(shí)，與i2000符合率的符合率為55.6%；當(dāng)S/CO≥8.0時(shí)，符合率為100%，與趙喬妹等[8]的研究基本一致。由此可見，反應(yīng)性弱這部分結(jié)果，一致性較差，隨著反應(yīng)性增強(qiáng)，一致性不斷提高，表明AutolumiS 3000在S/CO 1.01～8.0存在一定的假陽(yáng)性，可能由于丙肝病毒抗原難以提取，因此用于抗-HCV檢測(cè)的試劑均采用重組抗原作為包被抗原，在提高檢測(cè)靈敏性的同時(shí)，也容易出現(xiàn)假陽(yáng)性[9]。實(shí)際工作中，數(shù)量眾多的“低值陽(yáng)性”，或稱為“弱反應(yīng)性”的結(jié)果，給檢驗(yàn)人員以及臨床醫(yī)生造成極大的困惑。因此，本研究收集22份雅培i2000檢測(cè)抗-HCV有反應(yīng)性的標(biāo)本，用AutolumiS 3000進(jìn)行復(fù)測(cè)，并用RIBA做了確證試驗(yàn)，確認(rèn)陽(yáng)性3例，不確定8例，其余為陰性。

本研究結(jié)果表明，AutolumiS 3000的特異性、靈敏度都很高，能滿足臨床需求，適用于臨床標(biāo)本的常規(guī)檢測(cè)。AutolumiS 3000的使用可以解決國(guó)外同類產(chǎn)品價(jià)格昂貴和技術(shù)封鎖問題，同時(shí)也為患者減輕了負(fù)擔(dān)，有望成為取代進(jìn)口產(chǎn)品的民族品牌。