劉旭燕，李葵秀，段連潔，劉冠澤

(云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，云南 昆明 650201)

灰霉病是世界性重要經(jīng)濟(jì)作物病害，主要由葡萄孢屬Botrytis真菌引起，灰葡萄孢Botrytis cinerea是本屬模式種[1]?；移咸焰呒闹鞣秶鷺O其廣泛，預(yù)測(cè)該菌可以寄生幾乎所有雙子葉植物[2]。百合是世界上最受歡迎的鮮切花之一[3]，在世界鮮切花貿(mào)易中具有重要地位，云南省是重要的百合種植基地。百合灰霉病是危害百合生產(chǎn)的重要病害之一[4—5]，主要由橢圓葡萄孢Botrytis elliptica和灰葡萄孢侵染致病。研究表明，百合不同品種對(duì)灰霉病抗性不同，大部分研究都是以孢子懸浮液或者菌絲塊接種百合葉片的方法來(lái)探究百合品種的抗病性[6—7]。作者認(rèn)為花瓣是病原菌侵染百合的重要部位，感病花瓣是影響百合鮮切花銷售的重要因素之一。尤其在云南省7～8月雨水充沛季節(jié)，孢子可借助雨水落到花瓣上引起病害。因此，本研究采用菌絲塊室內(nèi)離體接種法比較橢圓葡萄孢和灰葡萄孢對(duì)不同品種百合花瓣和葉片的侵染能力，為百合灰霉病田間控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

橢圓葡萄孢Botrytis elliptica和灰葡萄孢Botrytis cinerea均由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)李國(guó)慶教授課題組提供。

1.2 供試品種

百合品種 ‘索邦’(‘Sorbonne’)、‘木門’、‘薩曼莎’、‘卡羅琳’，購(gòu)自昆明市斗南花卉市場(chǎng)。

1.3 接種方法

百合盛花期每個(gè)品種選5株，每株選成熟葉片5片，選當(dāng)天完全開(kāi)花花朵3朵。用直徑0.5 cm打孔器分別在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)3 d的灰葡萄孢和橢圓葡萄孢邊緣取菌絲塊。每個(gè)葉片和花瓣分別接種1塊菌絲塊，接種后將葉片和花瓣置于搪瓷盤中，20 ℃下保濕培養(yǎng)，每隔24 h觀察病斑出現(xiàn)情況并記錄病斑大小。

1.4 調(diào)查方法

葉片或花瓣接種菌絲塊后，變色或者褐色斑點(diǎn)出現(xiàn)時(shí)間即為發(fā)病時(shí)間，每隔24 h測(cè)量病斑直徑，灰葡萄孢侵染葉片病斑擴(kuò)展速度為72 h病斑直徑除以3 d；灰葡萄孢侵染花瓣發(fā)病時(shí)間較短，病斑擴(kuò)展速度為48 h病斑直徑除以2 d。橢圓葡萄孢接種‘木門’葉片，觀察96 h，依然沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何病斑，因此病斑擴(kuò)展速度為0，橢圓葡萄孢侵染‘索邦’葉片72 h才出現(xiàn)病斑，因此病斑擴(kuò)展速度為96 h病斑直徑除以4 d，其余計(jì)算方法同灰葡萄孢侵染葉片；橢圓葡萄孢侵染‘薩曼莎’花瓣72 h才出現(xiàn)病斑，病斑擴(kuò)展速度為96 h病斑直徑除以4 d，其余計(jì)算方法同灰葡萄孢侵染花瓣。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種葡萄孢對(duì)不同品種百合葉片侵染能力比較

4個(gè)百合品種離體葉片接種兩種病原菌后發(fā)病情況見(jiàn)表1。4個(gè)百合品種離體葉片接種灰葡萄孢后病斑出現(xiàn)時(shí)間無(wú)差異，均在接種48 h后出現(xiàn)變色或斑點(diǎn)。接種橢圓葡萄孢的4個(gè)百合品種葉片病斑出現(xiàn)時(shí)間差異顯著，‘薩曼莎’和‘卡羅琳’最早出現(xiàn)病斑，均在接種48 h后出現(xiàn)病斑，與接種灰葡萄孢的離體葉片病斑出現(xiàn)時(shí)間一致；‘索邦’則在接種72 h后出現(xiàn)病斑；而‘木門’在接種96 h后依然沒(méi)有病斑出現(xiàn)。病斑擴(kuò)展速度比較分析，灰葡萄孢侵染不同品種百合葉片病斑擴(kuò)展速度差異不顯著，約為0.15 cm·d-1；橢圓葡萄孢侵染不同品種百合葉片病斑擴(kuò)展速度差異顯著，‘木門’無(wú)病斑出現(xiàn)，出現(xiàn)病斑最早的‘卡羅琳’病斑擴(kuò)展速度與‘索邦’差異顯著。

2.2 兩種葡萄孢對(duì)不同品種百合花瓣侵染能力比較

從表1得知，‘木門’、‘薩曼莎’、‘卡羅琳’離體花瓣在接種灰葡萄孢24 h后有病斑出現(xiàn)，‘索邦’離體花瓣病斑出現(xiàn)時(shí)間比前3個(gè)品種晚12 h，從病斑擴(kuò)展速度來(lái)看百合品種之間差異顯著。不同品種百合離體花瓣接種橢圓葡萄孢病斑出現(xiàn)時(shí)間差異明顯，‘卡羅琳’離體花瓣接種橢圓葡萄孢與接種灰葡萄孢病斑出現(xiàn)時(shí)間一致，均在 24 h有病斑出現(xiàn)，病斑擴(kuò)展速度最快，但是接種灰葡萄孢病斑擴(kuò)展速度為1.40 cm·d-1，明顯高于接種橢圓葡萄孢；‘木門’、‘索邦’均在接種48 h后出現(xiàn)病斑；最晚出現(xiàn)病斑的是‘薩曼莎’，但其接種后病斑擴(kuò)展速度與‘索邦’差異不顯著。

表1 兩種葡萄孢屬真菌侵染不同品種百合花和葉片能力比較Table 1 Comparison of infectivity of two Botrytis species on petals and leaves of different Lilium varieties

3 結(jié)論與討論

灰葡萄孢的寄主相當(dāng)廣泛，百合屬只是其寄主之一，橢圓葡萄孢則專一性侵染百合。大部分報(bào)道認(rèn)為百合灰霉病病原為橢圓葡萄孢。但是作者認(rèn)為灰葡萄孢同樣是危害百合田間生產(chǎn)的重要病原菌。云南省昆明市常年溫度20 ℃左右，氣候濕潤(rùn)，非常適宜兩種病原菌的侵染與繁殖。研究顯示，兩種葡萄孢屬真菌對(duì)不同品種百合花瓣和葉片的侵染能力不同，品種間存在差異；對(duì)同一百合品種花瓣和葉片的侵染能力也不同，灰葡萄孢對(duì)百合的侵染能力明顯強(qiáng)于橢圓葡萄孢。

百合品種‘木門’是由東方百合與喇叭百合雜交獲得的品種[8]，是我國(guó)引進(jìn)的百合新品種，但是其抗性評(píng)價(jià)未做系統(tǒng)研究。引種是豐富我國(guó)百合種質(zhì)資源的重要手段[9—11]，抗病性鑒定是引種后的重要研究?jī)?nèi)容。本研究發(fā)現(xiàn)，‘木門’葉片接種橢圓葡萄孢96 h后仍未出現(xiàn)病斑，花瓣接種48 h出現(xiàn)病斑；‘木門’葉片和花瓣接種灰葡萄孢病斑出現(xiàn)時(shí)間和其他品種無(wú)差異，表明 ‘木門’對(duì)橢圓葡萄孢有一定抗性，對(duì)灰葡萄孢則無(wú)抗性(圖1)。

本研究為百合的引種及田間百合灰霉病的控制提供了科學(xué)基礎(chǔ)，建議實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)在百合不同生育期采取不同防病策略，重點(diǎn)控制灰葡萄孢引起的灰霉病病害。

圖1 ‘木門’花瓣和葉片接種灰葡萄孢和橢圓葡萄孢Fig. 1 Petals and leaves of the lily variety ‘Conca D’Or’inoculated by Botrytis cinerea and B. elliptica