陳彥潔，柳傳毅，呂滿霞，方瓊彤，吳新榮*

1華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣州510641；2中國(guó)人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院藥學(xué)部；3廣州市老年慢病患者合理用藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510010

體癬是最為常見(jiàn)的皮膚淺部真菌病，是除了頭部、手部、腳部和甲部外，發(fā)生在身體皮膚上的皮膚真菌感染。目前，約有40個(gè)不同種類的的皮膚癬菌，而根據(jù)其消化角質(zhì)能力的不同分為三大屬：毛癬菌屬(Trichophyton)、小孢子菌屬(Microsporum)和表皮菌屬(Epidermophyton)[1,2]。隨著廣譜抗生素的長(zhǎng)期使用，真菌耐藥菌株的出現(xiàn)，開(kāi)發(fā)天然無(wú)副作用的抗菌藥物有著重要的意義。蒺藜為蒺藜科蒺藜屬植物蒺藜(TribulustermtrisL.)的干燥成熟果[3]。甾體皂苷(Steroidalsaponins)為蒺藜的主要成分之一，現(xiàn)代研究表明，蒺藜皂苷類具有抗衰老、抗菌、抗癌等作用[4]。甾體皂苷通常都為很好的抗菌物質(zhì)[5]，甾體皂苷TTS-12是從蒺藜全草中分離純化得到的單體產(chǎn)物，屬于螺甾烷醇型甾體皂苷，其化學(xué)名為替告皂苷元3-O-β-D-吡喃木糖(1→2)-[β-D-吡哺木糖(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖(1→2)]-β-D-吡喃半乳糖苷[6]，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。前期研究表明，甾體皂苷TTS-12對(duì)常見(jiàn)的四種皮膚癬菌，紅色毛癬菌(Trichophytonrubrum)、須癬毛癬菌(T.mentagrophytes)、石膏樣小孢子菌(Microsporumgypseum)和犬小孢子菌(Microsporumcanis)均有較強(qiáng)的抗菌活性[7]。體外抗皮膚癬菌的效果決定了TTS-12是否具有成藥的潛質(zhì)，除了用CLSI的M38-A2方案對(duì)皮膚癬菌進(jìn)行最小抑菌濃度和最小殺菌濃度的檢測(cè)外[8]，本實(shí)驗(yàn)還選了多種指標(biāo)考察TTS-12對(duì)皮膚癬菌的抑菌作用，以此來(lái)充分證明TTS-12的抗皮膚癬菌效果。隨后采用自制的蒺藜TTS-12凝膠劑觀察其對(duì)感染須癬毛癬菌的豚鼠體癬治療效果，進(jìn)一步研究在動(dòng)物水平上，蒺藜TTS-12的抗菌效果，為蒺藜TTS-12開(kāi)發(fā)成新的抗真菌藥物提供科學(xué)理論依據(jù)。

圖1 蒺藜TTS-12化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 The chemical structures of compounds TTS-12

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

1.1 儀器

LRH-70生化培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)、BHC-IIB2生物安全柜(廣州蘇凈醫(yī)療設(shè)備有限公司)、YXQ-LS-18SI壓力蒸汽滅菌器(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)、OLYMPUS生物顯微鏡(奧利巴斯有限公司)、BP210S型電子天平(德國(guó)賽多利斯) LRH-70生化培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；SW-CJ-IF凈化工作臺(tái)(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)；移液槍(美國(guó)Thermo公司)。

1.2 材料

TTS-12對(duì)照品(純度：99.6%)由第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院天然藥化教研室提供、酮康唑(純度>98.0%，MACKLIN)；氟康唑(純度>98.0%，aladdin)；酵母粉(OXOID，批號(hào)：1338303-02)、YEAST EXTRACT(OXOID)；馬鈴薯葡萄糖瓊脂粉(廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號(hào)：3104890)、RPMI-1640 Medium(SIGMA公司)；二甲基亞砜分析純(天津大茂化學(xué)試劑廠)；3799-96孔板(COSTAR)；自制0.5%、0.8%、1%蒺藜TTS-12凝膠；鹽酸特比萘芬乳膏(中美天津史克制藥有限公司，批號(hào)：L07060A)；脫毛膏(薇婷，批號(hào)：20150321)。

1.3 菌株和動(dòng)物

須癬毛癬菌[Trichophytonmentagrophyton,CMCC(F)T5e]、近平滑菌念珠菌(Candidaparapsilosis，ATCC22019)購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所，21株須癬毛癬菌臨床分離菌株由廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院醫(yī)院檢驗(yàn)科惠贈(zèng)；普通級(jí)豚鼠，每只體重約200～250 g，雌雄各半，共56只。試驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(粵)2016-0002，NO.44007200002096。于廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院動(dòng)物中心普通環(huán)境飼養(yǎng)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 真菌的培養(yǎng)及菌液的配置

須癬毛癬菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種在PDA培養(yǎng)基上，于28 ℃的培養(yǎng)箱中活化7～14天。選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好，無(wú)污染的菌落作為受試菌株，于菌落上滴加適量0.85%無(wú)菌生理鹽水，用無(wú)菌棉棒輕輕反復(fù)刮擦菌落表面，使孢子充分與生理鹽水充分混合。用兩層紗布過(guò)濾菌懸液至離心管中，再放置于渦旋振蕩器震蕩15 s左右。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，用無(wú)菌生理鹽水調(diào)整菌液濃度至2～6×105CFU，最后用不含氮源RPMI-1640培養(yǎng)基稀釋10倍，備用。

2.2 TTS-12對(duì)皮膚癬菌標(biāo)準(zhǔn)菌株及臨床菌株最小抑菌濃度(MIC)

采用CLSI M38-2方案對(duì)MIC，MIC的測(cè)定方法如下：將適量TTS-12溶于DMSO中，使?jié)舛葹?.4 mg/mL，吹打均勻后用RPMI-1640液體培養(yǎng)基稀釋100倍。取96孔板，1～10孔加入100 μL RPMI-1640培養(yǎng)基，將100 μL藥液培養(yǎng)基加至第10孔中，用移液槍吹打均勻后轉(zhuǎn)移10 μL至第9孔，以此類推直至第1孔，舍棄最后100 μL。TTS-12的濃度范圍在0.062 5～32 μg/mL。1～10孔加入100 μL菌液。第11孔加入200 μL無(wú)菌培養(yǎng)基作為空白對(duì)照，第12個(gè)孔加入100 μL無(wú)菌培養(yǎng)基和100 μL菌液作為陰性對(duì)照。每組平行3次，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，4天后判讀結(jié)果，無(wú)菌生長(zhǎng)孔所對(duì)應(yīng)的最低藥物濃度為MIC。

2.3 TTS-12對(duì)皮膚癬菌標(biāo)株及臨床菌株的最小殺菌濃度(MFC)

從以上的藥敏板中轉(zhuǎn)移完全抑制真菌生長(zhǎng)的攜藥培養(yǎng)基至PDA平板培養(yǎng)基中，28 ℃培養(yǎng)5天，肉眼觀察有無(wú)真菌生長(zhǎng)，無(wú)真菌生長(zhǎng)菌液所對(duì)應(yīng)的的最小濃度為MFC。質(zhì)控實(shí)驗(yàn)在與上述實(shí)驗(yàn)平行操作的條件下進(jìn)行，近平滑念珠菌(ATCC 22019)作為質(zhì)控菌株，酮康唑作為質(zhì)控藥，按照以上的步驟步驟對(duì)質(zhì)控菌株進(jìn)行MIC測(cè)定，當(dāng)MIC落在0.062 5～0.5 μg/mL時(shí)數(shù)據(jù)可信有效。

2.4 TTS-12對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

配制TTS-12濃度為2、4、6、8、10 μg/mL的PDA平板培養(yǎng)基。用0.7 cm打孔器取生長(zhǎng)良好的菌塊作為菌餅，接種于載藥培養(yǎng)基上，于28 ℃的環(huán)境中培養(yǎng)15天，每24 h觀察一次，平行5次。

菌落直徑(cm)=測(cè)量菌落直徑﹣0.7

菌絲生長(zhǎng)抑制率=[(對(duì)照組菌落直徑-處理組菌落直徑)/ 對(duì)照組菌落直徑]×100%

2.5 TTS-12對(duì)孢子萌發(fā)動(dòng)力學(xué)的影響

TTS-12用DMSO溶解后，再用100倍生理鹽水溶解，使終濃度為1、2、4、8 μg/mL。接種10 μL 1～4×108spores/mL菌液，斡旋震蕩后，分別置于室溫處理30、60、90、120、150、180 min，10 000 rpm離心5 min，用無(wú)菌生理鹽水沖洗孢子，重懸于100 μL無(wú)菌水中，取10 μL置于含PDA的凹玻片中，置于濕盒中于28 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，顯微鏡觀察孢子萌發(fā)情況，平行5次。

孢子萌發(fā)率=(發(fā)芽孢子數(shù)/孢子總數(shù))×100%

2.6 豚鼠體癬模型制備

取豚鼠56只，每只豚鼠后背部用剃毛刀剃毛(2.5 cm×2.5 cm)，然后輕涂適量脫毛膏，5 min后用滅菌水清理干凈背部的毛并擦干，用手術(shù)刀刮傷皮膚至有針狀血出現(xiàn)為止，隨機(jī)取8只(雌雄各半)作為空白組，其余48只豚鼠用制備好的菌懸液(濃度調(diào)節(jié)為1×107CFU/mL)涂抹于創(chuàng)面上0.4 mL/d，空白組用無(wú)菌生理鹽水涂抹于創(chuàng)面上0.4 mL/d，每天觀察并且重復(fù)染菌至第5天，取背部接種處皮屑用 10% 氫氧化鉀進(jìn)行鏡檢，以鏡檢陽(yáng)性為造模成功。

2.7 分組給藥及評(píng)價(jià)方法

成功造模后，將豚鼠隨機(jī)分為模型組、陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組及低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組10只?？瞻捉M、模型組給予無(wú)菌生理鹽水，陰性對(duì)照組給予空白凝膠基質(zhì)、陽(yáng)性對(duì)照組給予鹽酸特比萘芬乳膏、低中高劑量組組分別給予0.5%、0.8%、1%的蒺藜TTS-12凝膠。48小時(shí)內(nèi)開(kāi)始給藥，每只豚鼠背部給于0.4 mL/天，每天一次，連續(xù)給藥7天。開(kāi)始給藥后每天觀察并對(duì)背部病變程度進(jìn)行評(píng)分[9]，具體評(píng)分見(jiàn)表1。

表1 豚鼠背部病變程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

給藥7天后，第8天將豚鼠處死，用無(wú)菌生理鹽水清洗背部皮膚，取病灶部位皮膚，每只豚鼠病灶皮膚處取5塊5×5 mm組織，2塊皮膚放置于10%甲醛溶液中，做HE染色切片，用顯微鏡觀察病灶皮膚炎性發(fā)生情況。剩余3塊放入70%乙醇中浸泡2～3 min，殺滅雜菌，經(jīng)無(wú)菌生理鹽水清洗后接種到含青霉素和放線菌酮的PDA培養(yǎng)基中，培養(yǎng)在28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，7天后觀察須癬毛癬菌生長(zhǎng)情況，計(jì)算病灶皮膚真菌培養(yǎng)的陰性率。

2.8 統(tǒng)計(jì)方法及數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)使用軟件SPSS20.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組豚鼠背部病變程度評(píng)分比較采用單因素方差分析，各組病灶皮膚真菌培養(yǎng)陰性率比較采用χ2檢驗(yàn)，設(shè)P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 結(jié)果

3.1 最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定

用肉眼觀察，與生長(zhǎng)對(duì)照組孔相比，約抑制80%真菌生長(zhǎng)的孔所對(duì)應(yīng)的的最低濃度為最小抑菌濃度。TTS-12對(duì)須癬毛癬菌及其臨床菌株均有較好的抑菌活性，對(duì)須癬毛癬菌的MIC值為1 μg/mL，對(duì)兩者種的臨床菌株MIC范圍為1～8 μg/mL和0.5～8 μg/mL。其抑菌活性高于抗真菌常用藥物氟康唑，與酮康唑相似。實(shí)驗(yàn)中質(zhì)控菌株的MIC落在有效范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)可信有效(表2，3)。

表2 TTS-12及3種藥物對(duì)21株須癬毛癬菌臨床菌株的MIC(μg/mL)

表3 TTS-12及3種藥物對(duì)21株須癬毛癬菌臨床菌株的MIC(μg/mL)

3.2 最小殺菌濃度(MFC)的測(cè)定

TTS-12對(duì)須癬毛癬菌的MFC為8 μg/mL，對(duì)臨床菌株的的MFC在4～32 μg/mL。結(jié)果表明，TTS-12對(duì)須癬毛癬菌標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株均有較好的殺菌作用(表4，5)。

3.3 TTS-12對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

TTS-12對(duì)皮膚癬菌的菌絲抑制程度隨濃度遞增，如圖2所示，在第15天時(shí)，濃度4 μg/mL的TTS-12對(duì)須癬毛癬菌的菌絲生長(zhǎng)抑制率已經(jīng)高于60%，蒺藜TTS-12對(duì)須癬毛癬菌菌絲生長(zhǎng)有良好的抑制效果。

表4蒺藜TTS-12及常用藥物對(duì)須癬毛癬菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的MFC值(μg/mL)

Table 4 MFC of TTS-12 and common antifungal drug against two standard strains ofT.mentagrophytes(μg/mL)

藥物Drugs須癬毛癬菌T.mentagrophytesTTS-128氟康唑Fluconazole64酮康唑Ketoconazole8鹽酸特比萘芬Terbinafine hydrochloride0.25

表5 TTS-12及3種藥物對(duì)21株須癬毛癬菌臨床菌株的MFC(μg/mL)

3.4 TTS-12對(duì)孢子萌發(fā)動(dòng)力學(xué)的影響

TTS-12 對(duì)須癬毛癬菌的孢子萌發(fā)動(dòng)力學(xué)如圖3所示，用不同濃度的TTS-12(1～8 μg/mL)處理須癬毛癬菌，其可以抑制皮膚癬菌的孢子萌發(fā)，其抑制孢子萌發(fā)的效果與TTS-12的濃度和時(shí)間呈正相關(guān)。

3.5 豚鼠背部病變程度評(píng)分

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，在接種菌液的第5天后，各組均出現(xiàn)有紅斑及白色或淡黃色的鱗屑，并伴有出血的病變情況，在給藥的期間，除了模型組和陰性對(duì)照組外，其余各組均顯著降低豚鼠背部病變程度評(píng)分，對(duì)背部體癬癥狀有一定的改善，紅斑減少，厚皮脫落皮膚變光滑，各組一般背部病變情況可見(jiàn)圖4。給藥第1天，和空白對(duì)照組比較，模型組及各給藥組豚鼠背部病變程度評(píng)分顯著增加且皮屑鏡檢為陽(yáng)性，表明造模成功并且各給藥組評(píng)分無(wú)差異說(shuō)明各組豚鼠分配均勻；和模型組相比，給藥的第1、4、8天，陰性對(duì)照組豚鼠背部病變程度評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明陰性對(duì)照組的空白凝膠劑基質(zhì)對(duì)體癬模型背部病變情況沒(méi)有明顯改善。給藥第4天，和模型組相比，低劑量組能降低豚鼠背部病變程度評(píng)分并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，中劑量組、高劑量組能顯著性降低豚鼠背部病變程度評(píng)分(P<0.01)，陽(yáng)性對(duì)照組未見(jiàn)顯著降低豚鼠背部病變程度評(píng)分，在給藥第8天中劑量組、高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組相比效果相當(dāng)，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)(圖5)。

圖2 不同濃度的TTS-12分別對(duì)須癬毛癬菌絲生長(zhǎng)的影響(n=5，x±s)Fig.2 Effect of different concentrations of TTS-12 for T.mentagrophytes(n=5，x±s)

圖3 TTS-12對(duì)須癬毛癬菌的孢子萌發(fā)動(dòng)力學(xué)影響(n=5，x±s)Fig.3 Effect of kinetics of T.mentagrophytes spores by TTS-12(n=5，x±s)

3.6 豚鼠病灶皮膚病理變化

病灶皮膚HE染色切片結(jié)果表明，模型組和陰性對(duì)照組病灶真皮層中可以見(jiàn)到有大量的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，棘層肥厚，有明顯的炎性，角質(zhì)層可見(jiàn)有菌絲，低中高劑量組有一定程度的棘層肥厚，但厚度小于模型組，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較模型組輕，但比陽(yáng)性對(duì)照組嚴(yán)重，其中高劑量組的角質(zhì)層正常，炎癥情況比較輕。各組HE染色病理結(jié)果見(jiàn)圖6。

3.7 豚鼠病灶皮膚真菌培養(yǎng)陰性率

造模成功后，病灶背部皮膚皮屑鏡檢下可以觀察到有大量的菌絲，給藥處理后取病灶皮膚進(jìn)行真菌培養(yǎng)，其陰性率能一定程度反映藥物的殺菌效果。病灶皮膚真菌培養(yǎng)結(jié)果顯示各組真菌培養(yǎng)陰性率分別為：空白組100%、模型組20.83%、陰性對(duì)照組25%、陽(yáng)性對(duì)照組75%、低劑量組41.67%、中劑量組54.17%、高劑量組66.67%，其中空白組背部皮膚的真菌培養(yǎng)未見(jiàn)有須癬毛癬菌的生長(zhǎng)，模型組大多數(shù)病灶皮膚的真菌培養(yǎng)可見(jiàn)有須癬毛癬菌的生長(zhǎng)。結(jié)果表明，與模型組相比，中劑量組皮膚真菌培養(yǎng)陰性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，陽(yáng)性對(duì)照組、高劑量組皮膚真菌培養(yǎng)陰性率有明顯的差異(P<0.01)，且兩者皮膚真菌培養(yǎng)陰性率相當(dāng)，說(shuō)明高劑量組表現(xiàn)出一個(gè)比較好的殺菌作用，具體結(jié)果見(jiàn)表6。

圖4 各組豚鼠背部病變情況(n=10)Fig.4 Groups of guinea pig lesions(n=10)注：A模型組，B陰性對(duì)照組，C低劑量組，D中劑量組，E高劑量組，F(xiàn)陽(yáng)性對(duì)照組。Note:A:Model group,B:Negative group,C:Low-dose group,D:Middle-dose group,E:High-dose group,F:Positive group.

圖5 給藥后各組豚鼠背部癥狀評(píng)分圖(n=10,x±s)Fig.5 Lesion score of guinea pig after treatment(n=10,x±s)注：與模型組相比，*表示P<0.05，** P<0.01。Note:Compare with control,*P < 0.05;** P < 0.01.

4 討論

蒺藜被分離鑒定出含有載體皂苷、黃酮、糖苷、植物甾醇、單寧酸等化合物。皂苷和黃酮作為蒺藜中的主要代謝產(chǎn)物，因其具有多種生物活性，成為蒺藜研究的主要對(duì)象。學(xué)者發(fā)現(xiàn)其甾體皂苷種類豐富，多達(dá)108種[10]，蒺藜TTS作為一種螺甾烷醇型甾體皂苷具有良好的抗菌活性。

隨著越來(lái)越多的研究從中藥或植物中尋找有效抗真菌成分，這些新型抗真菌成分藥效的評(píng)價(jià)和檢測(cè)方法也隨之發(fā)展和系統(tǒng)化。對(duì)活性成分進(jìn)行體外抗真菌和毒性評(píng)價(jià)是篩選的第一步，隨后進(jìn)行體內(nèi)動(dòng)物模型試驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證。

圖6 各組HE染色病理切片(×400)Fig.6 HE pathological section(×400)注：A空白組，B模型組，C陰性對(duì)照組，D陽(yáng)性對(duì)照組，E低劑量組，F(xiàn)中劑量組，G高劑量組。Note:A:Blank group,B:Model group,C:Negative group,D:Positive group,E:Low-dose group,F:Middle-dose group,G:High-dose group.

表6 病灶皮膚真菌培養(yǎng)陰性率

注：與模型組相比，*表示P<0.05；**P<0.01；與陽(yáng)性對(duì)照組相比，#表示P<0.05。

Note:Compare with control,*P< 0.05;**P< 0.01;Compare with positive,#P<0.05.

在標(biāo)準(zhǔn)化的體外抗菌藥敏實(shí)驗(yàn)方案中，美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLinical and Standards Institute，CLSI)制定的M27-A3、M38-A2就為我們提供了一個(gè)快速、簡(jiǎn)單、可靠的測(cè)量方法，方案提出后眾多學(xué)者都采取此方法進(jìn)行抗菌藥物篩選[11]。體外實(shí)驗(yàn)中測(cè)得TTS-12對(duì)須癬毛癬菌的標(biāo)株菌株的MIC≤4 μg/mL，MFC≤32 μg/mL，且TTS-12能夠顯著抑制須癬毛癬菌的菌絲生長(zhǎng)，孢子萌發(fā)，說(shuō)明蒺藜TTS-12有較強(qiáng)的體外抗菌活性。本次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)選取了標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床分離菌株測(cè)定其抗菌作用，使數(shù)據(jù)具有一定的代表性和可信服性。

而對(duì)于動(dòng)物感染體癬模型的研究從很早就已見(jiàn)報(bào)道，最早可見(jiàn)1908年Bloch建立體癬動(dòng)物模型的報(bào)道，隨后越來(lái)越多的學(xué)者對(duì)動(dòng)物體癬模型進(jìn)行探討，包括對(duì)動(dòng)物的選擇，感染菌株的選擇，預(yù)處理和處理方法的比較及接種范圍等[12]。動(dòng)物體癬模型的造模在感染菌株的選取上，可選用紅色毛癬菌、須癬毛癬菌或犬小孢子菌，但由于犬小孢子菌產(chǎn)孢較少，菌懸液濃度達(dá)不到高濃度，紅色毛癬菌為親人性菌株，它在自然環(huán)境下極少感染動(dòng)物，因此需要使用免疫抑制劑干預(yù)才能造模成功，須癬毛癬菌同時(shí)具有親人和親動(dòng)物的特點(diǎn)，使其成為造模更理想的選擇。

此外，豚鼠感染皮膚癬菌病理進(jìn)程也是可預(yù)測(cè)的：豚鼠在接種菌株之后的4到6天會(huì)有短暫的紅斑或丘疹出現(xiàn)，并在7到8天之間反應(yīng)達(dá)到高峰期，隨后紅斑或丘疹就會(huì)逐漸增加并融合在一起。在接種的4周內(nèi)，這些病變情況逐漸發(fā)生后，大多數(shù)豚鼠會(huì)自愈，所以試驗(yàn)中建議在豚鼠感染后3～5天給藥，觀察時(shí)間控制在2周內(nèi)[13]。

本試驗(yàn)從豚鼠背部病變程度評(píng)分、病灶皮膚真菌培養(yǎng)陰性率及病灶皮膚病理變化來(lái)綜合評(píng)價(jià)低中高劑量的蒺藜TTS-12凝膠對(duì)豚鼠感染須癬毛癬菌體癬模型的作用，從試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，相對(duì)于模型組，低中高劑量的蒺藜TTS-12凝膠對(duì)于病灶皮膚出現(xiàn)的紅斑、出血、瘙癢有一定程度的緩解作用，能不同程度地殺滅侵襲皮膚的須癬毛癬菌，并呈一定的量效關(guān)系，其中高劑量組的治療效果最佳，與陽(yáng)性對(duì)照組相當(dāng)，以上研究為蒺藜TTS-12凝膠以后臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。