紀(jì)順利，宋帆帆，鄭 陽，丁 黎,*

(1中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室，南京 210009；2南京科利泰醫(yī)藥科技有限公司，南京 211100)

阿莫西林克拉維酸鉀(結(jié)構(gòu)式見圖1)是由阿莫西林和克拉維酸鉀組成的口服復(fù)方抗菌藥物。阿莫西林為廣譜的半合成青霉素，口服吸收好，抗菌作用強(qiáng)，但易被β-內(nèi)酰胺酶水解?？死S酸是一種不可逆的競(jìng)爭(zhēng)性β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，它具有與青霉素結(jié)構(gòu)類似的β-內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)，通過阻斷β-內(nèi)酰胺酶的活性位點(diǎn)來抑制其活性?？死S酸抗菌活性弱，與阿莫西林聯(lián)用時(shí)，抗菌作用增強(qiáng)，抗菌譜增大[1-4]，是臨床常用抗生素類藥物。

Figure 1 Structures of amoxicillin (1) and clavulanic acid (2)

目前文獻(xiàn)報(bào)道的同時(shí)檢測(cè)阿莫西林(amoxicillin,Amo)和克拉維酸(clavulanic acid,Cla)的方法主要有HPLC-UV、HPLC-FLD、HPLC-MS/MS。因克拉維酸只有末端紫外吸收，需經(jīng)衍生化后方可采用HPLC-UV測(cè)定，且該方法受血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)干擾較多，故應(yīng)用較少[5]。在使用HPLC-FLD測(cè)定克拉維酸時(shí)，需加入苯甲醛乙醇等溶劑才可形成熒光產(chǎn)物，此類溶劑毒性較大，易對(duì)實(shí)驗(yàn)人員健康造成危害[6]。HPLC-MS/MS[7]是目前應(yīng)用最為廣泛的方法，Gaikwad等[8]采用LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定人血漿中阿莫西林和克拉維酸含量，前處理中加入穩(wěn)定劑(2%磷酸)后進(jìn)行固相萃取，阿莫西林和克拉維酸的定量下限分別為50.43和25.28 ng/mL，但該方法前處理較為復(fù)雜且成本較高；沈錚等[9]采用LC-MS/MS測(cè)得的阿莫西林和克拉維酸的定量下限分別為40.0和20.0 ng/mL。然而，隨著新比例的阿莫西林克拉維酸鉀復(fù)方制劑的出現(xiàn)，此類制劑中克拉維酸的劑量較小，現(xiàn)有方法已不能滿足此類劑型中克拉維酸的檢測(cè)需要。針對(duì)此問題，本實(shí)驗(yàn)開發(fā)了一種前處理簡(jiǎn)便且靈敏度更高的檢測(cè)方法，使阿莫西林和克拉維酸的檢測(cè)限大大降低，可更好的滿足新劑型的檢測(cè)需求。

1 材 料

1.1 藥品與試劑

阿莫西林對(duì)照品(批號(hào)：130409-201512，純度86.9%，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；克拉維酸鉀對(duì)照品(批號(hào)：4-AAW-110-1，純度97.0%)、阿莫西林-d4對(duì)照品(批號(hào)：7-MOZ-67-2，純度96.0%)(美國(guó)TRC；乙腈和甲醇均為色譜純(德國(guó)Merck KGaA公司)；乙酸(ACS-Reagent，批號(hào)：STBG6315 ，美國(guó)Sigma-Aldrich公司)；去離子純凈水(實(shí)驗(yàn)室自制)；受試制劑阿莫西林克拉維酸鉀顆粒1袋(規(guī)格：125 mg/31.25 mg)；參比制劑阿莫西林克拉維酸鉀干混懸劑“Augmentin?” 5 mL(規(guī)格：125 mg/31.25 mg)。

1.2 儀 器

AB SCIEX ExionLC AD液相色譜-AB SCIEX Triple Quad TM 6500+質(zhì)譜(美國(guó)AB公司)，渦旋混合儀(美國(guó)Scientific Industries公司)；超純水系統(tǒng)(美國(guó)Millipore Milli-Q Gradient公司)；MSA6.6S-OCE-DM電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)； Heraeus Muitifuge X1R低溫離心機(jī)(美國(guó)Thermo Fisher公司)。

2 方 法

2.1 色譜與質(zhì)譜條件

色譜條件：色譜柱為Hedera ODS-2(2.1 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相：水相為含0.2%乙酸的水溶液，有機(jī)相為甲醇；流速為0.5 mL/min；柱溫：40 ℃。

質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子化方式(ESI)，在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式下同時(shí)對(duì)阿莫西林(364.1→223.1，去簇電壓DP為-15 V，碰撞電壓CE為-16 V)、克拉維酸(198.1→135.9，去簇電壓DP為-11 V，碰撞電壓CE為-11 V)和內(nèi)標(biāo)阿莫西林-d4(368.1→227.1，去簇電壓DP為-15 V，碰撞電壓CE為-16 V)進(jìn)行負(fù)離子檢測(cè)。

2.2 溶液的制備

2.2.1 阿莫西林、克拉維酸儲(chǔ)備液及工作溶液的配制 精密稱取適量阿莫西林對(duì)照品，經(jīng)質(zhì)量校正系數(shù)校正后，將其溶于50%甲醇水溶液中，得到最終質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL的儲(chǔ)備液。精密稱取適量的克拉維酸對(duì)照品，經(jīng)質(zhì)量校正系數(shù)校正后，將其溶于50%乙腈水溶液中，得到最終濃度為1.00 mg/mL的儲(chǔ)備液。用25%甲醇水溶液稀釋阿莫西林儲(chǔ)備液和克拉維酸儲(chǔ)備液制備質(zhì)量濃度為100/50.0、80.0/40.0、40.0/20.0、12.0/6.00、2.40/1.20、0.800/0.400、0.400/0.200 μg/mL的阿莫西林/克拉維酸標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品工作溶液；用25%甲醇水溶液稀釋阿莫西林儲(chǔ)備液和克拉維酸儲(chǔ)備液制備質(zhì)量濃度為200/100、76.0/38.0、16.0/8.00、1.00/0.500、0.400/0.200 μg/mL的阿莫西林/克拉維酸質(zhì)控樣品工作溶液。工作溶液配制于透明聚丙烯離心管中，于-20 ℃冰箱中保存待用。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)阿莫西林-d4儲(chǔ)備液及工作溶液的配制 取一支阿莫西林-d4對(duì)照品(規(guī)格：1 mg/支)，經(jīng)質(zhì)量校正系數(shù)校正后，將其溶于50%甲醇水溶液中，得到最終質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL的儲(chǔ)備液。以50%甲醇水溶液稀釋，配制質(zhì)量濃度為1 000 ng/mL的內(nèi)標(biāo)工作溶液。工作溶液配制于透明聚丙烯離心管中，于-20 ℃冰箱中保存待用。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及質(zhì)控樣品的配制 人血漿(以EDTA-2K作為抗凝劑)作為空白基質(zhì)，定量加入50%乙酸水溶液(血漿與50%乙酸水溶液體積比為100∶1)后，用于配制標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以及質(zhì)控樣品，配制過程在冰浴下進(jìn)行。最終配制成含阿莫西林/克拉維酸質(zhì)量濃度分別為20.0/10.0(LLOQ)、40.0/20.0、120/60.0、600/300、2 000/1 000、4 000/2 000、5 000/2 500 ng/mL(ULOQ)的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品和濃度分別為20.0/10.0 ng/mL(LLOQ QC)、50.0/25.0 ng/mL(LQC)、800/400 ng/mL(MQC)、3 800/1 900 ng/mL(HQC)的質(zhì)控樣品。

2.3 血漿樣品處理

在冰浴條件下，取含酸血漿樣品50 μL，加入沉淀劑乙腈200 μL，渦旋10 min，在4 ℃條件下以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液氮?dú)獯蹈珊笥贸兯?00 μL復(fù)溶，復(fù)溶液進(jìn)行LC-MS/MS定量分析。

2.4 生物等效性研究

2.4.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 文獻(xiàn)數(shù)據(jù)顯示，阿莫西林的個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)為20%～30%，而克拉維酸的個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)為25%～50%，克拉維酸的個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)大，若采用傳統(tǒng)的兩周期、雙交叉自身對(duì)照試驗(yàn)設(shè)計(jì)，預(yù)估的滿足生物等效條件所需的試驗(yàn)樣本量大，增加了試驗(yàn)的難度與成本。因此，根據(jù)FDA《Draft Guidance on Amoxicillin;Clavulanate Potassium》和CFDA《以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的建議，以及本藥物特點(diǎn)，選用總體設(shè)計(jì)為單中心、開放、隨機(jī)、單劑量、四周期、兩序列、重復(fù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，并確定空腹和餐后生物等效性研究試驗(yàn)的樣本量均為40例。

2.4.2 給藥方案及血漿樣品的采集和處理 空腹和餐后試驗(yàn)各入組受試者40例，按照隨機(jī)表，每名受試者將被隨機(jī)分配到兩組(TRTR和RTRT)中的某一組。每位受試者進(jìn)行4個(gè)試驗(yàn)周期，服用2次受試制劑和參比制劑，周期間設(shè)2天清洗期。

受試者在給藥前60分鐘內(nèi)(0 h)和給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.75、2、2.5、3、4、5、6、7和8 h，分別采集靜脈血約3 mL至含EDTA-2K抗凝劑的真空采血管中，全血樣品低溫離心5 min后，在冰浴條件下分離血漿，置于預(yù)先加入定量50%乙酸水溶液的樣品管中，混合均勻，于-70 ℃冰箱中保存待測(cè)。

3 結(jié) 果

3.1 專屬性

在本試驗(yàn)所采用的色譜條件下，阿莫西林保留時(shí)間在1.73 min左右，克拉維酸保留時(shí)間在1.79 min左右，內(nèi)標(biāo)阿莫西林-d4保留時(shí)間在1.72 min左右，無雜峰干擾測(cè)定，見圖2。

Figure 2 Chromatogram of blank plasma (A1:Amoxicillin;B1:Clavulanic acid;C1:Amoxicillin-d4) and chromatogram of blank plasma spiked with amoxicillin (A2),clavulanic acid (B2) and amoxicillin-d4 (C2)

3.2 線性范圍和定量下限

將阿莫西林克拉維酸血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品按照“2.3”項(xiàng)下血漿的前處理方法，進(jìn)行LC-MS/MS分析。分別以阿莫西林、克拉維酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X，ng/mL)，阿莫西林、克拉維酸與內(nèi)標(biāo)阿莫西林-d4的比值為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行加權(quán)線性回歸，得到阿莫西林的血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=9.19E-04+6.04E-04(r=0.999 6)，克拉維酸的的血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=3.57E-04+1.61-06(r=0.999 5)。結(jié)果表明，阿莫西林在20.0～5 000 ng/mL 的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，克拉維酸在10.0 ～2500 ng/mL 的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.3 精密度與準(zhǔn)確度

按照“2.2.3”項(xiàng)下配制4種不同濃度的阿莫西林/克拉維酸血漿質(zhì)控樣品，按照“2.3”血漿處理方法，進(jìn)行LC-MS/MS分析。每個(gè)濃度平行配制6份，并在兩天內(nèi)連續(xù)測(cè)定3次，分別計(jì)算批內(nèi)和批間精密度，見表1。結(jié)果表明，阿莫西林的批內(nèi)、批間準(zhǔn)確度偏差在-1.5%～6.4%范圍內(nèi)，批內(nèi)、批間精密度不超過3.7%，克拉維酸的批內(nèi)、批間準(zhǔn)確度偏差在-2.4%～3.3%范圍內(nèi)，批內(nèi)、批間精密度不超過3.9%，該分析方法的準(zhǔn)確度及精密度良好，均滿足生物樣品分析的要求。

3.4 基質(zhì)效應(yīng)與提取回收率

按照“2.2.3”項(xiàng)下配制低、中、高3種不同濃度的阿莫西林/克拉維酸血漿質(zhì)控樣品，按照“2.3”血漿處理方法，進(jìn)行LC-MS/MS分析。分別記錄阿莫西林、克拉維酸和阿莫西林-d4的峰面積Aamo、Acla和AIS；將空白血漿與相應(yīng)工作溶液進(jìn)樣記為Bamo、Bcla和BIS；將相應(yīng)工作溶液直接進(jìn)樣記為Camo、Ccla和CIS。阿莫西林、克拉維酸及阿莫西林-d4的提取回收率分別為Aamo/Bamo×100%、Acla/Bcla×100%、AIS/BIS×100%，基質(zhì)效應(yīng)為Bamo/Camo×100%、Bcla/Ccla×100%、BIS/CIS×100%，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，阿莫西林、克拉維酸及內(nèi)標(biāo)阿莫西林-d4的提取回收率均在85%以上，基質(zhì)效應(yīng)不影響對(duì)待測(cè)物的測(cè)定。

3.5 穩(wěn)定性考察

按照“2.2.3”項(xiàng)下配制低、中、高3種不同濃度的阿莫西林/克拉維酸血漿質(zhì)控樣品，經(jīng)考察，含酸血漿樣品在室溫條件下放置4.5 h、在冰浴條件下放置16.5 h、在-70 ℃下經(jīng)過7次凍融循環(huán)、-20 ℃ 冷凍8 d、-70 ℃冷凍92 d后穩(wěn)定性良好，具體結(jié)果見表3。

Analystc/(ng/mL)Intra precisionAccuracy deviation/%CV/%Inter precisionAccuracy deviation/%CV/%Amo20.0-1.5-5.01.4-2.43.03.750.0-1.0-5.20.5-1.32.62.78001.9-6.40.8-1.74.12.23 8001.1-1.81.0-1.41.31.2Cla10.0-2.1-3.02.9-3.61.03.925.0-2.4-1.23.2-3.7-0.43.5400-1.5-3.30.2-2.31.52.51 900-1.1 -1.11.3-1.70.01.7

Amo:Amoxicillin;Cla:Clavulanic acid;CV:Coefficient of variation

Analystc/(ng/mL)Martix effect/%CV/%Recovery/%CV/%Amo50.098.3±7.37.485.0±1.61.880096.0±1.21.388.6±2.22.53 80096.8±1.31.387.8±1.82.0Cla25.097.2±6.97.190.8±3.94.340096.6±1.01.095.1±1.81.91 90097.0±1.51.593.9±1.92.1Amo-d41 00097.0±2.12.288.3±2.22.5

Stock conditionAnalystc/(ng/mL)Measured concentration/(ng/mL)Deviation/%CV/%Room temperature 4.5 hAmo50.052.0±0.54.01.03 8003 920±753.21.9Cla25.025.2±0.90.83.61 9001 887±45-0.72.4Ice temperature 16.5 hAmo50.050.2±0.20.40.43 8003 753±59-1.21.6Cla25.024.5±0.5-2.02.01 9001 793±51-5.62.8Cycle freezling (-70 °C,7 times)Amo50.051.8±1.23.62.33 8003820±200.50.5Cla25.025.8±0.73.22.71 9001 880±40-1.12.1Long term stability (-20 °C)Amo50.050.0±0.60.01.23 8003 777±31-0.60.8Cla25.023.9±1.5-4.46.31 9001 803±21-5.11.2Long term stability (-70 °C)Amo50.053.4±0.36.80.63 8003 980±794.72.0Cla25.025.6±0.92.43.51 9001 927±291.41.5

3.6 阿莫西林克拉維酸在健康人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)

40名健康受試者空腹和餐后口服受試制劑和參比制劑后，阿莫西林和克拉維酸的血藥濃度-時(shí)間曲線見圖3和圖4。

R:Reference;T:Test product

采用WinNonlin 6.4 軟件計(jì)算參比制劑的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) AUC0-t、AUC0-∞、cmax的個(gè)體內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差SWR。SWR與CVW%存在以下?lián)Q算關(guān)系：

若SWR≥0.294，即CVW%≥30%，采用RSABE方法進(jìn)行等效性評(píng)價(jià)(應(yīng)用于AUC、cmax兩者之中任意一個(gè)或全部采用)。若SWR<0.294，即CVW%<30%，則采用ABE方法評(píng)價(jià)生物等效性。結(jié)果顯示，空腹阿莫西林和克拉維酸的個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)均小于30%，而餐后阿莫西林個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)小于30%，克拉維酸的個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)均大于30%。因此空腹阿莫西林和克拉維酸、餐后阿莫西林采用ABE方法進(jìn)行等效性評(píng)價(jià)，而餐后狀態(tài)下克拉維酸采用RSABE方法進(jìn)行等效性評(píng)價(jià)。主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC0-t、AUC0-∞、cmax結(jié)果分別見表4和表5。

4 討 論

4.1 流動(dòng)相的選擇

采用LC-MS/MS負(fù)離子模式檢測(cè)含羧基等基團(tuán)的的酸性物質(zhì)時(shí)，可調(diào)低水相的pH，使流動(dòng)相保持微弱的酸性，這樣可提高化合物的離子化效率。實(shí)驗(yàn)中分別比較了水相中加入0.2%乙酸、0.2%乙酸和1 mmol/L醋酸銨、0.2%甲酸條件下阿莫西林和克拉維酸的峰形、保留及響應(yīng)，見圖5及圖6。發(fā)現(xiàn)加乙酸后阿莫西林和克拉維酸鉀響應(yīng)增大，保留時(shí)間延長(zhǎng)，加入醋酸銨后阿莫西林和克拉維酸響應(yīng)降低，保留減弱；換用甲酸后，阿莫西林和克拉維酸保留時(shí)間提前，克拉維酸的峰形差，最終選擇在水相中加入0.2%乙酸。

ParameterTestFastingFedReferenceFastingFedcmax/(ng/mL)3 110±7881 720±3733 120±8351 700±351AUC0-t/(h·ng/mL)6 620±1 1805 770±9416 720±1 2205 460±849AUC0-∞/(h·ng/mL)6 740±1 2106 020±9636 830±1 2405 690±906tmax/h0.975±0.2832.68±0.3120.953±0.3212.82±0.461t1/2/h1.26±0.2271.27±0.2521.26±0.1981.24±0.205

ParameterTestFastingFedReferenceFastingFedcmax(ng/mL)922±392252±128964±429198±122AUC0-t/(h·ng/mL)1 900±728705±3711 990±799542±359AUC0-∞/(h·ng/mL)2 000±697736±3712 060±800590±357tmax/h1.23±0.7852.09±0.6231.19±0.6272.29±0.709t1/2/h1.13±0.3631.04±0.1531.08± 0.1921.02±0.15

Figure 5 Chromatogram of amoxicillin on different conditions of Hedera ODS-2 column

AA:Acetic acid;FA:Formic acid

Figure 6 Chromatogram of clavulanic acid on different conditions of Hedera ODS-2 column

4.2 阿莫西林和克拉維酸在血漿中的不穩(wěn)定性及其解決方法

阿莫西林和克拉維酸結(jié)構(gòu)中含有β-內(nèi)酰胺環(huán)，β-內(nèi)酰胺環(huán)不穩(wěn)定，在酸、堿、水分子、分子內(nèi)親核基團(tuán)的進(jìn)攻下極易發(fā)生開環(huán)[10]。阿莫西林結(jié)構(gòu)中含有酸性的羧基和堿性的氨基，調(diào)節(jié)合適的pH會(huì)使測(cè)定成分保持更穩(wěn)定的狀態(tài)。常溫下克拉維酸在血漿中不穩(wěn)定，其降解原因與水分、溫度、溶質(zhì)及pH有關(guān)[1]。

針對(duì)阿莫西和克拉維酸不穩(wěn)定的問題，本試驗(yàn)中分別考察了室溫和冰浴條件下阿莫西林和克拉維酸的低、高兩個(gè)濃度下在不含酸血漿、含0.5%乙酸的血漿、含1.0%乙酸的血漿和含2.0%乙酸的血漿中的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，血漿中不加酸，加酸過多，阿莫西林和克拉維酸的含量均會(huì)下降?？死S酸的血漿樣品在室溫下穩(wěn)定較差，在冰浴含0.5%乙酸的血漿中穩(wěn)定性最好，所以最終確定樣品的前處理?xiàng)l件為：在冰浴條件下，采用50%乙酸水溶液作為穩(wěn)定劑(血漿與50%乙酸水溶液體積比為100∶1)，測(cè)定血漿中阿莫西林和克拉維酸含量。

4.3 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，飲食可通過延遲胃排空、刺激膽汁分泌、改變胃腸道pH、增加內(nèi)臟的血流量、改變藥物的代謝和與制劑或藥物發(fā)生物理和化學(xué)反應(yīng)等改變藥物的生物利用度，影響其吸收，造成達(dá)峰時(shí)間延遲或提前，增加或減少藥物的暴露量，也有可能對(duì)藥物的吸收速度和程度有明顯影響[2]。

試驗(yàn)結(jié)果表明，兩復(fù)方制劑在空腹試驗(yàn)下等效。與空腹相比，高脂餐后阿莫西林和克拉維酸生物利用度均有所降低，降低幅度約為15%；阿莫西林和克拉維酸的cmax分別降低約50%和75%；阿莫西林和克拉維酸t(yī)max均延遲約1 h；同樣的飲食對(duì)受試制劑與參比制劑的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)cmax、AUC0-t和AUC0-∞影響存在差異。

Augmentin?說明書顯示，食物不影響本試驗(yàn)藥物的吸收。Staniforth等[13]采用18例受試者進(jìn)行雙交叉自身對(duì)照試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)食物確實(shí)不影響本試驗(yàn)藥物的吸收，但當(dāng)受試者例數(shù)增加至45人進(jìn)行重復(fù)交叉試驗(yàn)時(shí)，食物降低了試驗(yàn)藥物的吸收；周瑩等[4]對(duì)阿莫西林/克拉維酸鉀緩釋片(16∶1)進(jìn)行空腹、餐前和餐后3種給藥方式的研究也發(fā)現(xiàn)餐后克拉維酸的生物利用度明顯降低，空腹阿莫西林的生物利用度略低。本研究也得到與以上文獻(xiàn)相似的試驗(yàn)結(jié)論，推測(cè)餐后試驗(yàn)下不等效的可能原因有：餐后飲食食物的差異、樣本量差異、人種的差異、給藥劑量差異(本試驗(yàn)受試者服用的阿莫西林/克拉維酸劑量為125 mg/31.25 mg，文獻(xiàn)中無該劑量的飲食影響相關(guān)的報(bào)道)等。

5 結(jié) 論

本試驗(yàn)建立了一種同時(shí)測(cè)定人血漿中阿莫西林和克拉維酸濃度的LC-MS/MS方法，該方法前處理便捷，靈敏度高，定量下限可分別低至20.0和10.0 ng/mL，檢測(cè)時(shí)間短，可在4 min完成對(duì)阿莫西林和克拉維酸的同時(shí)檢測(cè)。該方法首次應(yīng)用于阿莫西林克拉維酸顆粒(125 mg/31.25 mg)在中國(guó)受試者體內(nèi)的血藥濃度測(cè)定，并通過計(jì)算比較受試者空腹和餐后服用受試制劑阿莫西林克拉維酸鉀顆粒1袋(125 mg/31.25 mg)和參比制劑阿莫西林克拉維酸鉀干混懸劑Augmentin?5 mL(125 mg/31.25 mg/5 mL)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，對(duì)兩復(fù)方制劑進(jìn)行生物等效性評(píng)價(jià)，評(píng)估飲食對(duì)阿莫西林克拉維酸藥代動(dòng)力學(xué)的影響，為臨床用藥提供參考。試驗(yàn)結(jié)果說明兩復(fù)方制劑在空腹試驗(yàn)下等效，在餐后試驗(yàn)下不等效。餐后服用受試制劑與參比制劑后，阿莫西林和克拉維酸的AUC0-t和AUC0-∞在給藥制劑間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明餐后兩復(fù)方制劑不等效可能與制劑因素有關(guān)；與此同時(shí)，與空腹相比，餐后受試制劑和參比制劑cmax、AUC0-t和AUC0-∞降低幅度不一致，說明了食物也會(huì)對(duì)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)產(chǎn)生影響。