朱 倩，黃啟龍，張春磊，曹征宇

(中國藥科大學江蘇省中藥評價與轉化重點實驗室，南京 211198)

大花紫玉盤(Uvariagrandiflora)又名山椒子、川血烏,是番荔枝科紫玉盤屬的一種攀援灌木[1]，屬于熱帶植物，廣泛分布于東南亞，包括越南中部、印度、緬甸、斯里蘭卡、馬來西亞和印度尼西亞。在我國主要分布于海南、廣東和廣西等地，民間主要用其治療咽喉腫痛[2]。番荔枝科(Annonaceae)是熱帶和亞熱帶地區(qū)一大植物種群，包含了約120屬2 100余種植物。其中紫玉盤屬植物在民間多做藥用，該屬植物化學成分類型豐富、結構新穎[3]，具有多方面的生物活性，如抗風濕、抗菌、抗腫瘤、抗瘧等[4]。目前國內外學者對大花紫玉盤的化學成分已有一些報道，主要的化學成分有兩大類，分別是多氧取代的環(huán)己烯和番荔枝內酯，此外還報道有生物堿、黃酮、萜類，以及一些其他類型的化合物[5]。近年來，大花紫玉盤因從中分離得到多種多氧取代環(huán)己烯類化合物，且藥理活性研究證實有良好抗炎、抗腫瘤活性而受到廣泛關注[6]。本課題組前期對大花紫玉盤中分離得到的化合物進行活性篩選，發(fā)現(xiàn)一些多氧取代環(huán)己烯化合物對鈉通道NaV1.7具有抑制活性，該類化合物有望開發(fā)成為作用于NaV1.7的新型鎮(zhèn)痛藥物。為了獲取更多活性化合物進行構效關系研究，本研究通過硅膠、D101大孔吸附樹脂、凝膠、制備HPLC等多種現(xiàn)代色譜分離方法對大花紫玉盤根醇提物進行系統(tǒng)性的化學成分研究，分離得到并鑒定了12個化合物的結構，分別為：epicatechin-(4β→1′,2→O→2′)-phloroglucinol(1)，proanthocyanidin A-1(2)， proanthocyanidin A-2(3)，表兒茶素(epicatechin)(4)，phlorizin(5)，圣草酚(eriodictyol)(6)，erythro-guaiacylglycerol-8-O-4′- (coniferyl alcohol) ether(7)，threo-guaiacylglycerol-8-O-4′-(coniferyl alcohol) ether(8)，erythro-guaiacylglycerol-8-O-4′-(sinapyl alcohol) ether(9)，threo-syringylglycerol-8-O-4′-(sinapyl alcohol) ether(10)，burselignan(11)，icariol A2(12)?；衔?～12均為首次從該植物中分離得到，其中化合物1作為合成中間體被報道，尚未有天然來源的報道，文獻尚未對其核磁共振光譜數據進行歸屬，本論文首次通過2D NMR技術對其核磁共振光譜數據進行了完整歸屬。

1 材 料

1.1 儀 器

超導核磁共振波譜儀(瑞士Bruker公司)；Agilent6250 Accurate-MassQ-TOF LC/MS；半制備HPLC(日本島津公司)；RE-2000B旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；ZF-2型三用紫外光譜分析儀(上海市安亭電子儀器廠)；AB135-S電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2 藥材與試劑

藥材于2016年11月采自廣西壯族自治區(qū)貴港市，由中國醫(yī)學科學院藥物研究所劉彥飛副研究員鑒定為大花紫玉盤(Uvariagrandiflora)的干燥根，標本存放于中國藥科大學江蘇省中藥評價與轉化重點實驗室。

Welch Ultimate系列AQ-C18色譜柱及反相柱色譜硅膠(上海Welch公司)；柱色譜硅膠及薄層色譜硅膠(青島海洋化工有限公司)；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(GE Healthcare BioSciences AB，Sweden)；所用試劑為市售分析純或色譜純。

2 提取與分離

大花紫玉盤干燥根30 kg，劈成細條狀，以95%乙醇回流提取4次，每次4 h，提取液減壓濃縮合并，得總浸膏1.9 kg。適量水混懸，依次用乙酸乙酯，正丁醇萃取。其中得乙酸乙酯萃取部位243.4 g。將乙酸乙酯萃取部位上D101大孔樹脂柱，用乙醇-水(10%，25%，40%，55%，70%，95%)為洗脫劑梯度洗脫，減壓濃縮，得到6個組分，f1～f6。將各部位經硅膠柱色譜，ODS柱色譜，凝膠柱色譜以及重結晶，高效液相等技術分離得到化合物1(7.6 mg)、化合物2(4.5 mg)、化合物3(2.8 mg)、化合物4(3.7 mg)、化合物5(10.9 mg)、化合物6(12.6 mg)、化合物7(8.8 mg)、化合物8(9.2 mg)、化合物9(8.4 mg)、化合物10(6.3 mg)、化合物11(4.5 mg)、化合物12(8.3 mg)。結構式見圖1。

3 結構鑒定

化合物1黃色油狀固體，溶于甲醇。在13C NMR(125 MHz，CD3OD)譜中出現(xiàn)了21個碳信號，結合分子量ESI-MSm/z412.9[M+H]+推斷分子式為 C21H16O9。在1H NMR(500 MHz，CD3OD)中芳香區(qū)出現(xiàn)了7個質子信號，其中δH7.16(1H，d，J=2.1 Hz)，δH6.83(1H，d，J=8.3 Hz)，δH7.05(1H，dd，J=8.3，2.1 Hz)為苯環(huán)ABX自旋系統(tǒng)質子信號。碳譜中出現(xiàn)的δC67.7和δC29.3是黃烷醇類化合物C-3，C-4位的特征碳信號，對比分離得到的表兒茶素(化合物4)碳譜核磁數據，推測出該化合物中含有表兒茶素的結構單元。碳譜中δC95～160的芳香區(qū)共有19個碳信號，除去表兒茶素母環(huán)中的12個碳，還有7個碳，結合氫譜數據推測該結構可能還含有1個四取代苯環(huán)。表兒茶素C-2的化學位移為δC79.9，化合物1碳譜中C-2的化學位移向低場位移至δC100.4，推測C-2應與2個氧原子相連。表兒茶素C-4位碳的2個氫化學位移分別為δH2.86、2.75，化合物1的HSQC圖譜顯示C-4僅有1個氫質子，且質子向低場位移至δH4.26，而在HMBC中出現(xiàn)H-4與2組苯環(huán)碳相關信號，除去母環(huán)中苯環(huán)，因此推測C-4與另一苯環(huán)相連。通過上述分析結合2D NMR數據，確定該化合物的結構為epicatechin-(4β→1′,2→O→2′)-phloroglucinol。經文獻檢索，該化合物作為合成中間體報道過，尚未見天然產物來源的報道，為一個新的天然產物。該化合物的核磁數據和文獻[7]報道的比較接近，發(fā)現(xiàn)文獻羅列的碳譜數據缺少了C-4的碳信號，多余一個δC60.6的碳信號，文獻中所用的試劑是氘代丙酮，可能是C-4的信號被溶劑峰掩蓋。文獻中沒有對該化合物的核磁數據進行歸屬，本論文通2D NMR分析對化合物1核磁數據進行了完整歸屬(表1)。

Figure 1 Structures of compounds 1- 12 isolated fromUvariagrandiflora

Table 11H NMR (500 MHz) and13C NMR (125 MHz) spectral data of compound 1 in CD3OD

PostionδHδC2100.634.12(1H,d,J=3.6 )67.744.26(1H,d,J=3.5)29.34α104.55155.866.02(1H,br.s)97.77158.086.09(1H,br.s)96.78α154.09132.2107.16(1H,d,J=2.1)115.811146.812145.6136.83(1H,d,J=8.3)115.7147.05(1H,dd,J=8.3,2.1)119.91′107.62′154.13′96.34′5.97(1H,br.s)158.05′97.66′6.00(1H,br.s)154.5

化合物2黃色粉末，mp:280 ℃，分子式為C30H24O12。ESI-MSm/z577[M+H]+。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.15(1H，d，J=2.1 Hz，H-10)，7.03(1H，dd，J=8.3，2.1 Hz，H-14)，6.97(1H，d，J=1.4 Hz，H-10′)，6.86(1H，dd，J=1.6 Hz，H-14′)，6.85(1H，d，J=7.8 Hz，H-13′)，6.82(1H，d，J=8.3 Hz，H-13)，6.06(1H，s，H-6′)，6.06(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，5.90(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，4.75(1H，d，J=8.0 Hz，H-2′)，4.25(1H，d，J=3.5 Hz，H-4)，4.14(1H，d，J=3.5 Hz，H-3)，4.06(1H，m，H-3′)，2.96(1H，dd，J=16.3，5.4 Hz，H-4′b)，2.56(1H，dd，J=16.3，8.7 Hz，H-4′a)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：158.1(C-7)，156.9(C-5)，156.1(C-5′)，154.2(C-8α)，152.2(C-7′)，150.8(C-8′α)，146.8(C-11，11′)，146.4，(C-12)，145.7(C-12′)，132.3(C-9)，131.0(C-9′)，120.3(C-14′)，119.9(C-14)，116.4(C-13)，115.8(C-13′)，115.7(C-10′)，115.5(C-10)，106.6(C-8′)，104.1(C-4α)，102.9(C-4′α)，100.4(C-2)，98.3(C-6)，96.5(C-8)，96.3(C-6′)，83.9(C-2′)，68.4(C-3′)，67.7(C-3)，29.3(C-4)，28.8(C-4′)。以上數據與文獻[8]報道一致，故鑒定為proanthocyanidin A-1。

化合物3黃色粉末，mp:273 ℃，分子式為C30H24O12，ESI-MSm/z577[M+H]+。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.15(2H，d，J=2.1 Hz，H-10，10′)，7.04(1H，d，J=8.3，2.1 Hz，H-14)，6.98(1H，dd，J=8.2，1.6 Hz，H-14′)，6.83(1H，d，J=8.1 Hz，H-13)，6.82(1H，d，J=8.4 Hz，H-13′)，6.10(1H，s，H-6′)，6.08(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.01(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，4.93(1H，br.s，H-2′)，4.41(1H，d，J=3.4 Hz，H-4)，4.25(1H，m，H-3′)，4.07(1H，d，J=3.5 Hz，H-3)，2.95(1H，dd，J=16.3，5.4 Hz，H-4′b)，2.74(1H，dd，J=16.3，8.7 Hz，H-4′a)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：158.1(C-7)，156.9(C-5)，156.5(C-5′)，154.2(C-8α)，152.2(C-7′)，152.1(C-8′α)，146.8(C-11′)，146.3(C-11)，146.3(C-12′)，145.7(C-12)，132.4(C-9)，131.2(C-9′)，120.5(C-14)，119.7(C-14′)，116.1(C-13)，116.0(C-13′)，115.7(C-10，10′)，107.2(C-8′)，104.3(C-4α)，102.5(C-4′α)，100.2(C-2)，98.3(C-6)，96.9(C-8)，96.5(C-6′)，81.8(C-2′)，68.2(C-3)，66.9(C-3′)，30.0(C-4′)，29.2(C-4)。以上數據與文獻[8]報道一致，故鑒定為proanthocyanidin A-2。

化合物4白色粉末，mp:240 ℃，分子式為C15H14O6，EI-MSm/z291[M+H]+。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：6.98(1H，d，J=1.9 Hz，H-10)，6.81(1H，dd，J=8.3，1.9 Hz，H-14)，6.76(1H，d，J=8.2 Hz，H-13)，5.95(1H，d，J=2.2 Hz，H-8)，5.93(1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，4.82(1H，s，H-2)，4.17(1H，m，H-3)，2.86(1H，dd，J=16.8，4.7 Hz，H-4)，2.75(1H，dd，J=16.8，2.9 Hz，H-4)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：158.0(C-7)，157.9(C-8α)，157.6(C-5)，145.9(C-12)，145.8(C-11)，132.3(C-9)，119.4(C-14)，115.9(C-13)，115.3(C-10)，100.1(C-4α)，95.9(C-8)，96.5(C-6)，79.9(C-2)，67.5(C-3)，29.3(C-4)。以上數據與文獻[9]報道一致，故鑒定為表兒茶素(epicatechin)。

化合物5白色針狀結晶，mp:113～114 ℃，分子式為C21H24O10，ESI-MSm/z437[M+H]+。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.06(1H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.68(1H，d，J=8.5 Hz，H-3，5)，6.18(1H，d，J=2.2 Hz，H-5′)，5.04(1H，d，J=7.2 Hz，H-1′′)，2.88(2H，t，J=7.7 Hz，H-β)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：206.6(C=O)，167.5(C-4′)，165.9(C-2′)，162.3(C-6′)，156.4(C-4)，133.9(C-1)，130.4(C-2，6)，116.1(C-3，5)，106.9(C-1′)，102.1(C-1′′)，98.4(C-3′)，95.5(C-5′)，78.5(5′′)，78.4(C-3′′)，74.7(C-2′′)，71.2(C-4′′)，62.5(C-6′′)，46.9(C-α)，30.8(C-β)。以上數據與文獻[10]報道一致，故鑒定為phlorizin。

化合物6黃色粉末，mp:270 ℃，分子式為C15H12O6，ESI-MSm/z289[M+H]+。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：6.92(1H，br.s，H-2′)，6.79(2H，br.s，H-5′，6′)，5.88(2H，d，J=8.3 Hz，H-6，8)，5.29(1H，dd，J=12.7，2.9 Hz，H-2)，3.06(1H，m，J=12.7 Hz，H-3a)，2.70(1H，dd，J=17.1，2.9 Hz，H-3b)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：197.7(C-4)，168.4(C-7)，165.5(C-5)，164.9(C-9)，146.9(C-4′)，146.5(C-3′)，131.8(C-1′)，119.2(C-6′)，116.3(C-5′)，114.7(C-2′)，103.4(C-10)，97.1(C-6)，96.2(C-8)，80.5(C-2)，44.1(C-3)。以上數據與文獻[11]報道一致，故鑒定為圣草酚(eriodictyol)。

化合物7淡黃色油狀固體，分子式為C20H24O7，ESI-MSm/z377[M+H]+。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.02(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，7.00(1H，m，H-2)，6.87(2H，m，H-5，5′)，6.83(1H，dd，J=1.7 Hz，H-6′)，6.74(1H，d，J=8.1 Hz，H-6)，6.50(1H，d，J=15.8 Hz，H-7′)，6.24(1H，m，J=15.9，5.8 Hz，H-8′)，4.84(1H，d，J=5.7 Hz，H-7)，4.35(1H，d，J=3.9 Hz，H-8)，4.23(2H，m，H-9′)，3.85(1H，dd，J=11.9，5.0 Hz，H-9a)，3.80(3H，s，3-OCH3)，3.79(3H，s，3′-OCH3)，3.77(1H，dd，J=12.0，3.9 Hz，H-9b)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：151.9(C-3′)，149.0(C-3)，148.7(C-4′)，147.1(C-4)，134.1(C-1)，133.2(C-1′)，131.5(C-8′)，128.6(C-7′)，121.0(C-6)，120.7(C-6)，119.0(C-5′)，115.7(C-5)，111.5(C-2)，112.0(C-2′)，86.2(C-8)，74.2(C-7)，63.3(C-9′)，62.2(C-9)，56.6(3-OCH3)，56.4(3′-OCH3)。以上數據與文獻[12]報道一致，故鑒定為erythro-guaiacylglycerol-8-O-4′(coniferyl alcohol) ether。

化合物8淡黃色油狀固體，分子式為C20H24O7，ESI-MSm/z377[M+H]+。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.05(1H，d，J=1.3 Hz，H-2′)，7.03(1H，d，J=1.4 Hz，H-2)，7.00(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，6.91(1H，d，J=9.8 Hz，H-6′)，6.86(1H，d，J=8.5 Hz，H-6)，6.75(1H，d，J=8.1 Hz，H-5)，6.53(1H，d，J=15.8 Hz，H-7′)，6.26(1H，dd，J=15.8，5.8 Hz，H-8′)，4.88(1H，d，J=5.7 Hz，H-9′)，4.30(1H，dt，H-8)，4.20(2H，d，J=5.6 Hz，H-9′)，3.88(3H，s，3-OCH3)，3.82(3H，s，3′-OCH3)，3.73(1H，dd，J=11.9，4.1 Hz，H-9a)，3.48(1H，dd，J=11.9，5.4 Hz，H-9b)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：151.8(C-3′)，149.3(C-3)，148.9(C-4′)，147.1(C-4)，133.8(C-1)，133.1(C-1′)，131.4(C-8′)，128.7(C-7′)，120.8(C-6，6′)，118，9(C-5′)，115.9(C-5)，111.8(C-2′)，111.4(C-2)，87.2(C-8)，74.1(C-7)，63.7(C-9′)，62.0(C-9)，56.6(3-OCH3)，56.4(3′-OCH3)。以上數據與文獻[12]報道一致，故鑒定為threo-guaiacylglycerol-8-O-4′-(coniferyl alcohol) ether，即化合7和8為對映異構體。

化合物9淡黃色油狀固體，分子式為C21H26O8， ESI-MSm/z429[M+Na]+。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.00(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，6.80(1H，d，J=8.2，1.5 Hz，H-6)，6.76(1H，d，H-5)，6.74(2H，s，H-2′，6′)，6.55(1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，6.32(1H，m，J=15.8，5.6 Hz，H-8′)，4.92(1H，d，J=4.9 Hz，H-7)，4.23(2H，d，H-9′)，4.22(1H，d，J=5.4 Hz，H-8)，3.92(9H，s，3，3′，5′-OCH3)，3.88(1H，dd，J=12.0，3.6 Hz，H-9a)，3.57(1H，dd，J=12.0，3.5 Hz，H-9b)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：154.6(C-3′，5′)，148.7(C-8)，146.9(C-3)，136.4(C-4′)，134.8(C-1′)，133.8(C-1)，131.4(C-7′)，129.9(C-8)，120.6(C-6)，115.8(C-5)，111.5(C-2)，105.0(C-2′，6′)，87.6(C-8)，74.1(C-7)，61.5(C-9′)，61.3(C-9)，56.7(3-OCH3)，56.4(3′，5′-OCH3)。以上數據與文獻[12]報道一致，故鑒定為erythro-guaiacylglycerol-8-O-4′-(sinapyl alcohol) ether。

化合物10黃色油狀固體，分子式為C22H28O9，ESI-MSm/z475[M+K]+。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：6.74(2H，s，H-2′，6′)，6.68(2H，s，H-2，6)，6.55(1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，6.32(1H，m，J=15.8，5.6 Hz，H-8′)，4.92(1H，d，J=1.6 Hz，H-7)，4.23(2H，d，J=1.4 Hz，H-8)，4.22(1H，d，J=5.8 Hz，H-9b)，3.84(6H，s，3′，5′-OCH3)，3.82(6H，s，3，5-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：154.6(C-3′，5′)，149.0(C-3，5)，136.6(C-4′)，135.9(C-4)，134.8(C-1)，133.1(C-1′)，131.4(C-7′)，129.9(C-8′)，105.3(C-2，6)，105.0(C-2′，6′)，87.6(C-8)，74.3(C-7)，63.6(C-9′)，61.6(C-9)，56.8(3，5-OCH3)，56.7(3′，5′-OCH3)。以上數據與文獻[12]報道一致，故鑒定為化合物threo-syringylglycerol-8-O-4′-(sinapyl alcohol) ether。

化合物11淡黃色粉末，mp 115～117 ℃。分子式為C20H24O6，ESI-MSm/z383[M+Na]+。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：6.74(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.68(1H，d，J=1.6 Hz，H-2)，6.64(1H，s，H-2′)，6.61(1H，dd，J=8.3，1.6 Hz，H-6)，6.19(1H，s，H-5′)，3.81(1H，d，H-7)，3.81(3H，s，3′-OCH3)，3.78(3H，s，3-OCH3)，3.69(2H，m，H-9′)，3.65(1H，dd，H-9b)，3.40(1H，dd，J=11.3，4.2 Hz，H-9a)，2.77(1H，d，J=7.7 Hz，H-7′)，2.00(1H，m，H-8′)，1.77(1H，tt，H-8)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：149.0(C-3)，147.2(C-3′)，146.0(C-4)，145.3(C-4′)，138.6(C-1)，134.2(C-6′)，129.1(C-1′)，123.2(C-6)，117.4(C-5′)，116.0(C-5)，113.9(C-2)，112.5(C-2′)，66.0(C-9′)，62.3(C-9)，56.4(3，3′-OCH3)，48.1(C-7，8)，40.1(C-8′)，33.6(C-7′)。以上數據與文獻[13]報道一致，故鑒定為burselignan。

化合物12白色粉末，mp 205 ℃，分子式為C22H28O9，ESI-MSm/z475[M+H]+。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：6.75(4H，s，H-2，2′，6，6′)，4.96(2H，d，J=8.2 Hz，H-7，7′)，3.87(12H，s，3，3′，5，5′-OCH3)，3.73(2H，dd，J=11.4，3.1 Hz，H-9′)，3.63(2H，dd，J=11.4，4.8 Hz，H-9)，2.32(2H，m，H-8，8′)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：149.3(C-3，3′，5，5′)，136.3(C-4，4′)，134.3(C-1，1′)，105.1(C-2，2′，6，6′)，84.6(C-7，7′)，61.8(C-9，9′)，56.9(3，3′，5，5′-OCH3)，55.2(C-8，8′)。以上數據與文獻[14]報道一致，故鑒定為icariol A2。