王金生,黃光墉

(廣東省深圳市寶安區(qū)福永人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東深圳 518103)

宮頸癌發(fā)病率正呈逐年升高趨勢(shì)，已成為嚴(yán)重影響我國(guó)女性生命健康安全的重要疾病之一[1]。有報(bào)道顯示，宮頸癌與宮頸病變患者的細(xì)胞免疫功能存在不同程度的抑制，機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)上皮突變細(xì)胞的識(shí)別與殺傷能力明顯降低，對(duì)于腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移具有異化作用[2]。越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為細(xì)胞免疫功能可能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展存在密切相關(guān)，其中T淋巴細(xì)胞是機(jī)體細(xì)胞免疫系統(tǒng)中最為重要的細(xì)胞群之一，具有介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)，殺傷腫瘤細(xì)胞及維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等作用。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞主要是指一類具有免疫負(fù)調(diào)控功能的T淋巴細(xì)胞亞群[3]，其可通過(guò)和多種免疫細(xì)胞相互作用，從而對(duì)一系列免疫細(xì)胞的活化產(chǎn)生抑制作用。本文研究不同宮頸病變患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)，旨在為早期宮頸癌患者防治提供循證依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 以2017年5月至2018年7月在本院接受陰道鏡檢查與液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查的健康女性50例為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡≥18周歲；(2)臨床病歷資料完整。另取同期于本院接受陰道鏡檢查與液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查的宮頸病變患者90例為觀察對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均經(jīng)組織病理活檢確診；(2)入院前均未接受任何相關(guān)治療者；(3)年齡≥18周歲；(4)臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)入院前4周內(nèi)接受過(guò)免疫抑制劑或皮質(zhì)類固醇激素治療者；(2)合并心、肝、腎等臟器功能?chē)?yán)重障礙者；(3)合并感染性疾病或免疫系統(tǒng)疾病者；(4)妊娠期或哺乳期女性；(5)存在交流溝通障礙或精神疾病者。將其按照宮頸活檢病理結(jié)果分為慢性宮頸炎+CIN1組30例，CIN2～3組30例，宮頸癌組30例。所有患者已知情同意，且醫(yī)院倫理委員會(huì)予以批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本檢測(cè)方法 (1)各組人員入院后均由本院醫(yī)護(hù)人員對(duì)其臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、記錄，主要內(nèi)容包括年齡、聯(lián)系方式、家庭住址及人乳頭瘤病毒(HPV)感染情況等。(2)標(biāo)本采集：所有人員入院后均采集清晨空腹靜脈血10 mL，保存于-80 ℃冰箱中待檢。(3)T淋巴細(xì)胞亞群與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測(cè)：應(yīng)用美國(guó)BD公司FACS Canto Ⅱ型流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。將上述外周血標(biāo)本予以肝素鈉抗凝，隨后加入5 mL流式管底，分別加入CD3、CD4、CD8抗體10 μL進(jìn)行混勻，放置于室溫條件下避光孵育20 min，然后加入2 mL 1×紅細(xì)胞裂解液混勻，避光放置10 min，溶解紅細(xì)胞，將樣品管以1 500 r/min離心10 min，除去上清，并加入2 mL PBS洗液重懸細(xì)胞后流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3+、CD4+及CD8+亞群數(shù)目及比例。按照上述方式檢測(cè)外周血CD4+CD25+CD127-水平。其中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+CD127-試劑盒均購(gòu)自德國(guó)Partec公司。

1.2.2觀察指標(biāo) 分別比較各組年齡、HPV感染情況，外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD4+CD25+CD127-表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1各組年齡、HPV感染情況對(duì)比 對(duì)照組、慢性宮頸炎+CIN1組、CIN2～3組、宮頸癌組年齡、HPV感染率均呈逐漸升高趨勢(shì)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組年齡、HPV感染情況對(duì)比

注：與對(duì)照組相比，aP<0.05；與慢性宮頸炎+CIN1組相比，bP<0.05；與CIN2～3組相比，cP<0.05

2.2各組間HPV感染的型別對(duì)比 對(duì)照組、慢性宮頸炎+CIN1組、CIN2～3組、宮頸癌組HPV單純感染及多重感染(兩個(gè)以上HPV型)的比例均依次增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3各組外周血T淋巴細(xì)胞亞群對(duì)比 對(duì)照組、慢性宮頸炎+CIN1組、CIN2～3組、宮頸癌組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平呈逐漸降低趨勢(shì)，而CD8+水平呈逐漸升高趨勢(shì)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

2.4各組外周血CD4+CD25+CD127-水平對(duì)比 對(duì)照組、慢性宮頸炎+CIN1組、CIN2～3組、宮頸癌組外周血CD4+CD25+CD127-水平呈逐漸升高趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

2.5宮頸病變嚴(yán)重程度與外周血T淋巴細(xì)胞亞群、CD4+CD25+CD127-水平的相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析可得：宮頸病變嚴(yán)重程度與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05)，而與CD8+、CD4+CD25+CD127-呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)，見(jiàn)表5。

表2 各組間HPV型別對(duì)比[n(%)]

表3 各組外周血T淋巴細(xì)胞亞群對(duì)比

注：與對(duì)照組相比，aP<0.05；與慢性宮頸炎+CIN1組相比，bP<0.05；與CIN2～3組相比，cP<0.05

表4 各組外周血CD4+CD25+CD127-水平對(duì)比

注：與對(duì)照組相比，aP<0.05；與慢性宮頸炎+CIN1組相比，bP<0.05；與CIN2～3組相比，cP<0.05

表5 宮頸病變嚴(yán)重程度與外周血T淋巴細(xì)胞亞群、CD4+CD25+CD127-水平的相關(guān)性分析

3 討 論

按照宮頸病變的嚴(yán)重程度分為慢性宮頸炎與CIN1、CIN2、CIN3及宮頸癌[4]。隨著對(duì)宮頸癌的病因?qū)W與癌前病變研究不斷深入發(fā)現(xiàn)[5]：年齡、未保護(hù)的高危性行為、免疫功能低下及多孕多產(chǎn)均為宮頸病變發(fā)生的高危因素，其中HPV感染是最重要的宮頸病變高危因素。然而，有報(bào)道證實(shí)，90%以上的免疫功能正常女性患者在發(fā)生HPV感染后均可在2年內(nèi)自然痊愈，由此可知，免疫功能正常女性極少會(huì)發(fā)生HPV持續(xù)感染及持續(xù)加重宮頸病變，從而降低了宮頸病變發(fā)展成宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)[6]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可通過(guò)下調(diào)CD4+與CD8+亞群增殖反應(yīng)，對(duì)NK細(xì)胞的免疫效應(yīng)產(chǎn)生負(fù)性功能等途徑促使腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視，從而發(fā)生免疫逃逸，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展[7]。

本研究中對(duì)照組、慢性宮頸炎+CIN1組、CIN2～3組、宮頸癌組年齡、HPV感染率均呈逐漸升高趨勢(shì)。其中主要原因在于：隨著年齡的不斷增加，患者機(jī)體免疫功能隨之下降，從而促進(jìn)了宮頸病變的發(fā)生、發(fā)展。而HPV感染不但會(huì)激發(fā)宿主的非特異性細(xì)胞免疫及體液免疫，同時(shí)還會(huì)對(duì)特異性免疫反應(yīng)的形成產(chǎn)生抑制效應(yīng)[8]。對(duì)照組、慢性宮頸炎+CIN1組、CIN2～3組、宮頸癌組HPV單純感染及多重感染(兩個(gè)以上HPV型)的比例均依次增高，提示了宮頸病變程度加重與HPV感染率具有相關(guān)性，HPV感染可能促進(jìn)加重了患者的宮頸病變程度。隨著宮頸病變程度的逐漸加重，患者免疫功能降低越明顯。分析原因，筆者認(rèn)為在正常生理狀況下，T淋巴細(xì)胞總?cè)杭捌鋪喨涸跀?shù)量上維持在正常范圍內(nèi)，而宮頸病變會(huì)導(dǎo)致患者免疫功能受損，從而會(huì)減少T淋巴細(xì)胞總?cè)杭捌鋪喨旱臄?shù)量，且隨著宮頸病變程度的逐漸加重，進(jìn)一步導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)失衡，最終誘發(fā)了宮頸癌[9]。淋巴細(xì)胞按照免疫學(xué)功能的不同分為CD4+與CD8+兩大亞群，正常生理狀況下CD4+與CD8+亞群的比例維持在一定范圍內(nèi)，共同維持機(jī)體免疫系統(tǒng)平衡[10]，而宮頸病變會(huì)導(dǎo)致CD4+與CD8+亞群出現(xiàn)不同程度的改變，且隨著宮頸病變程度的加重，上述變化趨勢(shì)會(huì)持續(xù)保持，最終導(dǎo)致細(xì)胞免疫系統(tǒng)失衡，免疫功能喪失。另外，對(duì)照組、慢性宮頸炎+CIN1組、CIN2～3組、宮頸癌組外周血CD4+CD25+CD127-水平呈逐漸升高趨勢(shì)。究其原因，筆者認(rèn)為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可通過(guò)分泌IL-10與TGF-β等多種抑制性細(xì)胞因子，從而對(duì)CD4+與CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的效應(yīng)產(chǎn)生抑制作用[11]。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析：宮頸病變嚴(yán)重程度與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，而與CD8+、CD4+CD25+CD127-呈正相關(guān)關(guān)系。這提示了T淋巴細(xì)胞亞群與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在宮頸病變中可能存在相互作用。臨床工作中可通過(guò)對(duì)其表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，從而有利于評(píng)估宮頸病變嚴(yán)重程度。

4 結(jié) 論

綜上所述，T淋巴細(xì)胞亞群與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞參與了宮頸病變的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，為臨床宮頸癌的早期診斷、臨床治療及預(yù)后評(píng)估提供了新的靶點(diǎn)和思路，值得臨床重點(diǎn)關(guān)注。