沈秀敏 王莉 劉偉 王雨艷 黃鑫

(錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧 錦州 121000)

老年宮頸鱗癌與機(jī)體基因表達(dá)失常相關(guān)〔1，2〕。ARM重復(fù)X連鎖蛋白(ARMCX)1是ARM重復(fù)蛋白家族中的重要成員〔3〕，在損傷后處于修復(fù)期的上皮中表達(dá)升高，對細(xì)胞增殖有一定的調(diào)控作用。對細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜有較強(qiáng)的降解作用，對細(xì)胞的遷移有促進(jìn)作用的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2是MMPs家族中的重要的成員，也稱明膠酶A〔4，5〕。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)半定量檢測宮頸鱗癌老年患者術(shù)后組織中ARMCX1和MMP-2的表達(dá)差別，探討其對腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要預(yù)測價(jià)值。

1 材料和方法

1.1臨床資料 選擇2016年1月至2017年12月錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院確診為宮頸鱗癌的老年女性患者67例作為觀察組，年齡60～86歲，平均68.1歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合宮頸鱗狀細(xì)胞癌的病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②宮頸為腫瘤原發(fā)部位。排除標(biāo)準(zhǔn)：①轉(zhuǎn)移性鱗癌；②合并其他器官惡性腫瘤；③有先天發(fā)育異常；④術(shù)前行放、化療的患者。選取因子宮脫垂行子宮全切的非腫瘤性宮頸組織20例作為對照組，年齡60～78歲，平均69.2歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2ARMCX1和MMP-2的檢測 均留取兩組的新鮮標(biāo)本，當(dāng)時(shí)取材，75%酒精中固定備用，已剪碎標(biāo)本組織在不銹鋼網(wǎng)上過濾，2 500 r/min離心10 min后，取沉淀物，制備成單細(xì)胞懸液(1×106/ml)，取1 ml，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟加入一抗(ARMCX1或MMP-2)、磷酸鹽緩沖液(PBS)及熒光二抗后上機(jī)檢測，對結(jié)果進(jìn)行分析。

1.3結(jié)果的計(jì)算及判定 應(yīng)用熒光指數(shù)(FI)判斷結(jié)果，并進(jìn)行計(jì)算。FI=腫瘤中蛋白表達(dá)的熒光強(qiáng)度-對照樣品平均熒光強(qiáng)度/正常對照樣品平均熒光強(qiáng)度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組ARMCX1和MMP-2蛋白表達(dá)量比較 觀察組ARMCX1和MMP-2的表達(dá)量均顯著高于對照組(P<0.01)。見表1。

表1 兩組ARMCX1和MMP-2蛋白表達(dá)量比較

2.2觀察組不同臨床病理特征中ARMCX1和MMP-2表達(dá)量比較 觀察組ARMCX1表達(dá)量與腫瘤組織學(xué)分型、脈管累犯、增殖指數(shù)及淋巴轉(zhuǎn)移情況顯著相關(guān)(P<0.05)。MMP-2表達(dá)量與腫瘤組織學(xué)分型、脈管累犯及淋巴轉(zhuǎn)移情況顯著相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 觀察組不同臨床病理特征中ARMCX1和MMP-2表達(dá)量的比較

2.3觀察組中ARMCX1和MMP-2表達(dá)的相關(guān)性分析 觀察組中ARMCX1和MMP-2的表達(dá)具有顯著正相關(guān)性(r=0.38，P=0.037 0)。

3 討 論

老年人由于退行性變化及激素下降，常伴有宮頸上皮的萎縮，而萎縮上皮正常的細(xì)胞增殖能力下，但是在腫瘤性因素引發(fā)的異型增生時(shí)，其細(xì)胞的增殖程度高。老年人宮頸鱗癌常以非角化多見，腫瘤形成后浸潤能力強(qiáng)，細(xì)胞的異型程度大，轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)，預(yù)后較差〔6〕。研究顯示，與宮頸癌相關(guān)的轉(zhuǎn)移蛋白的異常表達(dá)，對腫瘤進(jìn)展有明顯促進(jìn)作用〔7〕。ARM家族蛋白均含有Armadillo repeat結(jié)構(gòu)，首次在果蠅極性基因中發(fā)現(xiàn)，是生物大分子蛋白，其作用方式與其三維結(jié)構(gòu)有關(guān)〔8〕。Armadillo repeat的特征是具有保守的結(jié)構(gòu)，前后兩個(gè)Armadillo repeat結(jié)構(gòu)有折疊，形成右手螺旋的結(jié)構(gòu)，基因全長4.2 kb，含有4個(gè)外顯子，其編碼區(qū)在第4個(gè)外顯子上，編碼區(qū)有453個(gè)氨基酸，分子量為46 kD〔9〕。Cartoni等〔10〕認(rèn)為線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)是神經(jīng)和軸突生理的關(guān)鍵，這個(gè)過程影響神經(jīng)元損傷反應(yīng)，而ARMCX1可以調(diào)節(jié)此過程，并發(fā)現(xiàn)在高再生條件下，哺乳動(dòng)物特有的編碼線粒體定位蛋白基因在軸突切斷后被激活，ARMCX1過表達(dá)能增強(qiáng)神經(jīng)節(jié)的線粒體運(yùn)輸，提高細(xì)胞的增殖能力。ARMCX1具有N端的細(xì)胞分裂周期因子(CDC)25結(jié)構(gòu)域，能通過催化4，5-二磷酸鹽進(jìn)行水解，產(chǎn)生二酯酰甘油，激發(fā)蛋白激酶C的過表達(dá)〔11，12〕。MMP-2在腫瘤進(jìn)展時(shí)腫瘤細(xì)胞可以高度分泌。MMP-2的作用底物是Ⅳ型和Ⅴ型膠原，它能直接分解基底膜中的纖維連接蛋白，并能對層黏連蛋白起到一定的降解作用〔13〕。目前認(rèn)為MMP-2還具有其他的作用，如對凋亡的抑制、對增殖的影響。有研究認(rèn)為MMP-2對腫瘤間質(zhì)的血管生成有促進(jìn)作用〔14〕。蘇敏等〔15〕通過觀察MMP-2在卵巢癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)MMP-2表達(dá)升高，可以促進(jìn)間質(zhì)中血管內(nèi)皮細(xì)胞的新生，相對于缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，MMP-2是相對晚期的血管生成因子，即在腫瘤進(jìn)展中MMP-2對血管生成的作用更明顯。MMP-2通過其受體MMP-2R2發(fā)揮作用，引發(fā)腫瘤間質(zhì)的血管生成，并能有效促進(jìn)CD31、CD34等陽性血管內(nèi)皮的生成〔16，17〕。

本研究發(fā)現(xiàn)宮頸鱗癌老年患者術(shù)后組織中ARMCX1和MMP-2的表達(dá)明顯高于正?；颊撸崾径吒弑磉_(dá)可以促進(jìn)宮頸鱗癌的形成過程，二者具有癌基因樣的生物學(xué)作用；觀察組中ARMCX1和MMP-2的表達(dá)量與病變的脈管累犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示二者在脈管播散過程中有一定作用，也是判定腫瘤轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)因子；二者的表達(dá)與病變分型相關(guān)，提示二者可能是臨床病理分型的標(biāo)記蛋白，而非角化型的預(yù)后較差，提示二者可能與預(yù)后有一定的關(guān)聯(lián)；ARMCX1的表達(dá)與腫瘤的增殖指數(shù)密切相關(guān)，提示ARMCX1是增殖相關(guān)蛋白，其高表達(dá)時(shí)可以引起腫瘤細(xì)胞的生長；相關(guān)分析顯示觀察組中ARMCX1和MMP-2的表達(dá)具有正相關(guān)性。二者對腫瘤進(jìn)展的作用可能是相關(guān)性的依據(jù)，但其機(jī)制可能完全不同，也不完全在同一通路上。ARMCX1的作用路徑可能較少，對血管的調(diào)控可能是間接的，被認(rèn)為是與機(jī)體中其他蛋白(VEGF)協(xié)同作用后，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖〔18，19〕。ARMCX1分泌增加，引起腫瘤細(xì)胞生長和分化，具有調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖的作用。但是它可以通過調(diào)控P53和ras等基因，引起腫瘤的形成〔20〕。MMP-2可以有多種生物學(xué)功能，可以通過識別細(xì)胞黏附分子(ECM)及細(xì)胞膜上免疫蛋白超家族黏附分子、細(xì)胞間黏附分子等介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的黏附作用，并引起細(xì)胞信號傳導(dǎo)異常及調(diào)節(jié)細(xì)胞生存和增殖。有研究認(rèn)為整合素αvβ3上調(diào)后激活MMP-2，同時(shí)能增強(qiáng)其配體，更有效地促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的有效溶解，引發(fā)腫瘤細(xì)胞的遷移〔21〕。

綜上，ARMCX1和MMP-2在老年宮頸鱗癌術(shù)后組織中表達(dá)明顯升高，且具有協(xié)同作用，對腫瘤的形成和發(fā)展有一定的調(diào)節(jié)作用。