張玉潔 王禎元 韋繼雯 陳中堅(jiān)

（1文山學(xué)院三七研究院，云南文山663099；2文山州食品藥品檢驗(yàn)研究院，云南文山663099）

白參菌（Schizophyllum commune Fr.）別名樹(shù)花、裂褶菌、白花、八擔(dān)柴、雞毛菌子、雞冠菌[1]。白參菌子實(shí)體秀雅、味道馨香爽口，其作為一種食藥兼用菌，含5種常量元素和26種微量元素，并富含硒[2-3]。云南民間將其用于治療胃腸道疾病及產(chǎn)后補(bǔ)品。研究表明其細(xì)胞壁多糖具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎、抗癌作用[4]。

三七是云南大宗中藥材，文山是三七之鄉(xiāng)。采挖過(guò)三七后的土壤中均遺留大量的三七殘根。三七的晾曬、剪切和加工過(guò)程也會(huì)抖落大量的三七絨根。這些三七毛狀根中含有2%～5%三七皂苷[5]，其藥用價(jià)值研究和新食品開(kāi)發(fā)是三七產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個(gè)重要方向。試驗(yàn)用三七殘根栽培白參菌，探索白參菌對(duì)三七殘根的分解利用情況，并跟蹤監(jiān)測(cè)白參菌對(duì)殘根中皂苷成分的吸收利用和轉(zhuǎn)化情況。

1 材料與方法

1.1 原材料和試劑

三七殘根由文山苗鄉(xiāng)三七農(nóng)業(yè)科技有限公司提供。白參菌菌種由文山學(xué)院環(huán)境資源學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室野外分離得到，保存于文山學(xué)院三七研究院。麩皮、小麥、石膏粉、木屑、馬鈴薯、甘蔗渣等從文山市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)；耐高溫栽培袋、蓋、塞為訂購(gòu)。三七總皂苷、薄層層析板和分析試劑購(gòu)自深圳市商祺檢測(cè)器材有限公司。

1.2 母種擴(kuò)繁和栽培種制作

用PDA培養(yǎng)基活化并擴(kuò)繁母種。用小麥粒培養(yǎng)基擴(kuò)繁栽培種[6]。

1.3 供試配方

以三七殘根部分替代對(duì)照配方中甘蔗渣為試驗(yàn)配方。具體配方如下。對(duì)照組：甘蔗渣69%，麩皮20%，玉米粉10%，石膏1%；配方1，配方2，配方3，配方4，分別用25%，20%，15%，10%三七殘根替代對(duì)照配方中甘蔗渣。

1.4 栽培方法

三七根和甘蔗渣粉碎稱重后分別浸泡。裝袋前撒入輔料拌勻調(diào)料含水量至60%。用17 cm×55 cm×0.0015 cm聚丙烯耐高溫袋裝料，每袋裝料600 g（濕料）。每個(gè)配方20袋，共100袋。料袋121℃滅菌2.5 h，降溫至適宜后，移至無(wú)菌操作臺(tái)接種。

菌絲培養(yǎng)：菌絲生長(zhǎng)保持溫度15～26℃，出菇溫度控制在16～23℃。溫度適宜接種后20 d左右開(kāi)始出菇[7]。在現(xiàn)蕾處開(kāi)口出菇。出菇期噴水保濕并保持通風(fēng)良好。待子實(shí)體葉片長(zhǎng)到將要平展時(shí)采收。共采收2潮菇。

測(cè)定供試配方白參菌菌絲生長(zhǎng)速度（菌絲長(zhǎng)滿菌袋所需時(shí)間），統(tǒng)計(jì)子實(shí)體的平均產(chǎn)量。采用SPSS 17.0軟件和Microsoft Excel 2003對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.5 培養(yǎng)料中三七皂苷類(lèi)成分的跟蹤檢測(cè)

樣品處理：取各配方栽培白參菌子實(shí)體，菌渣干燥、研磨，粉碎備用。

皂苷提?。翰捎贸暢樘岱╗8]。

三七總皂苷標(biāo)準(zhǔn)品：含三七皂苷R1 6.9%，人參皂苷Rg1 28.0%，人參皂苷Rb1 29.7%，人參皂苷Rd 7.3%為主，少量其他稀有皂苷。加甲醇制成1 mL總量含5 mg的混合溶液。另取三七粉0.5 g，與供試樣品一起處理，抽提皂苷成分作為陽(yáng)性對(duì)照。

利用高效硅膠60預(yù)制板（Merck）為層析板，以氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）為展開(kāi)劑，進(jìn)行層析。噴硫酸乙醇液，進(jìn)行顯色。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試配方栽培白參菌結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，少量的三七殘根對(duì)白參菌菌絲生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，而添加15%以上三七殘根顯著抑制菌絲生長(zhǎng)，并可降低子實(shí)體產(chǎn)量；三七殘根用量超過(guò)20%時(shí)，菌絲生長(zhǎng)稀疏、只產(chǎn)生很少的子實(shí)體。三七殘根用量25%，白參菌菌絲不生長(zhǎng)，不出菇。詳見(jiàn)表1，表2。

2.2 皂苷成分的跟蹤檢測(cè)結(jié)果

將從各級(jí)樣品中抽提的皂苷類(lèi)生物堿用甲醇溶解，利用薄層色譜法進(jìn)行展層和染色得到皂苷色譜圖3。

由圖3可見(jiàn)，三七粉抽提所得三七皂苷和皂苷標(biāo)準(zhǔn)品主條帶基本一致。白參菌出菇后的菌渣中皂苷成分與標(biāo)準(zhǔn)品相比條帶都有所變化，表現(xiàn)為層析版下層極性較小的兩個(gè)三七皂苷成分有所減少，層析版上層極性較大、分子量較小的皂苷成分含量有所增加。

圖1 對(duì)照組培養(yǎng)料栽培的白參菌

圖2 添加三七殘根培養(yǎng)料栽培的白參菌（配方3，4）

表1 供試配方白參菌菌絲生長(zhǎng)情況

表2 供試配方白參菌子實(shí)體產(chǎn)量及生物轉(zhuǎn)化率

圖3 白參菌菌渣及子實(shí)體中皂苷含量層析色譜

對(duì)子實(shí)體中皂苷類(lèi)物質(zhì)成分層析檢測(cè)的結(jié)果表明，有些三七皂苷成分或其降解產(chǎn)物被成功轉(zhuǎn)移到白參菌子實(shí)體中。說(shuō)明有些小分子三七皂苷及三七皂苷降解物可以被白參菌菌絲吸收或轉(zhuǎn)化。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)表明，白參菌培養(yǎng)料中添加少量的三七殘根可以促進(jìn)其菌絲生長(zhǎng)并可顯著提高白參菌產(chǎn)量。培養(yǎng)料中添加15%以上的三七殘根會(huì)逐漸抑制白參菌菌絲生長(zhǎng)，并大幅度降低其子實(shí)體產(chǎn)量。利用三七殘根所培養(yǎng)的白參菌子實(shí)體中檢測(cè)到三七粉和三七皂苷標(biāo)準(zhǔn)品中的某些成分相對(duì)應(yīng)的三七苷植物堿的染色點(diǎn)，說(shuō)明白參菌菌絲體可以吸收培養(yǎng)料中的某些小分子皂苷成分或三七皂苷的降解產(chǎn)物。