王道清，殷 濤＊＊，韓張斌，石萬(wàn)銀，楊躍軍，劉源才，陳琪瑤，許夢(mèng)玲

（1.中藥保健食品質(zhì)量與安全湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 大冶 435100；2.湖北省中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心 黃石 435000；3.勁牌生物醫(yī)藥有限公司 黃石 435000）

拳參一名最早出現(xiàn)在宋·蘇頌《圖經(jīng)本草》中，來(lái)源于廖科植物拳參（Polygonum bistorta L.）的干燥根莖[1]，主要功效為清熱解毒，消腫，止血；主治赤痢熱瀉，肺熱咳嗽，癰腫瘰疬，口舌生瘡，血熱吐衄，痔瘡出血，蛇蟲(chóng)咬傷等癥?，F(xiàn)代研究表明，拳參具有抗菌，抗氧化，抗炎，抗癌等藥理作用[2-4]。近年來(lái)，拳參常作為感冒靈退熱顆粒、復(fù)方大青葉、速效止瀉膠囊、蛇傷膠囊等制劑原料中使用的主要藥材，但在前期采購(gòu)回的原料藥拳參中發(fā)現(xiàn)存在著質(zhì)量問(wèn)題。由于受歷史、地域或用藥習(xí)慣等影響，各地中藥材生長(zhǎng)的地理氣候環(huán)境、采收加工方式等方面不同，造成中藥材的外觀性狀和化學(xué)成分不同或含量有明顯差異，給臨床正確規(guī)范化應(yīng)用中藥材帶來(lái)了困難[5-9]。拳參屬拳參組的根莖外觀形狀功效相似，同屬植物拳參（Polygonum bistorta L.）和珠芽蓼（Polygonum viviparum L.）在一些地區(qū)混淆使用[10-12]。

目前針對(duì)拳參研究較多集中在復(fù)方中藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與提高、拳參及其易混淆物之間的比較與鑒別[13,14]。也有對(duì)多種來(lái)源拳參的外觀性狀、顯微、內(nèi)在化學(xué)成分含量等方面進(jìn)行研究，但是難以綜合性評(píng)價(jià)不同來(lái)源的拳參質(zhì)量的優(yōu)劣。拳參作為中藥飲片的配方藥，又作為復(fù)方制劑的原料藥，明析基源并且控制質(zhì)量極為重要。因此本研究對(duì)拳參主產(chǎn)區(qū)的資源進(jìn)行了實(shí)地調(diào)查，并參考《中華人民共和國(guó)藥典》對(duì)收集的拳參樣品進(jìn)行系統(tǒng)性的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，揭示不同產(chǎn)地間藥材存在著質(zhì)量差異，為拳參的藥材資源的合理開(kāi)發(fā)及臨床應(yīng)用提供科學(xué)理論依據(jù)和借鑒。

1 材料與方法

1.1 樣品材料

本次實(shí)驗(yàn)收集到拳參及其混淆品共計(jì)18個(gè)樣品，來(lái)源于安徽亳州、湖北黃岡、云南大理、貴州畢節(jié)、遼寧鐵嶺、遼寧丹東、甘肅岷縣、四川眉山、吉林延吉、甘肅宕昌、山東威海、山東日照12 個(gè)地區(qū)。信息來(lái)源見(jiàn)表1。

表1 樣品信息來(lái)源

經(jīng)遵義醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室吳發(fā)明博士鑒定，3號(hào)、10 號(hào)、11 號(hào)、12 號(hào) 樣 品 為 蓼 科 拳 參 屬 珠 芽 蓼（Polygonum viviparum L.）的干燥根莖，其它樣品皆為蓼科拳參屬拳參（Polygonum bistorta L.）的干燥根莖。

1.2 儀器與試劑

儀器：KSW-6-16高溫電爐溫度控制器（北京中興偉業(yè)儀器有限公司），RATANKVN1 超純水儀（上海樂(lè)楓生物科技有限公司），Agilent 1260 高效液相色譜儀（美國(guó)），KQ-500DV型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），F(xiàn)A2004N 電子天平（上海菁海儀器有限公司）

試劑：沒(méi)食子酸對(duì)照品，乙醇（分析純），甲醇（色譜純），實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 調(diào)查方法

對(duì)山東威海、日照和吉林延吉的拳參進(jìn)行實(shí)地調(diào)查，向當(dāng)?shù)厮幉墓炯八庌r(nóng)了解當(dāng)?shù)厝瓍⒌脑耘鄽v史、產(chǎn)量、產(chǎn)銷情況、加工方法等，并收集拳參樣品、拍照記錄。

1.3.2 質(zhì)量評(píng)價(jià)方法

參照2015 年版《中國(guó)藥典》一部拳參項(xiàng)下性狀描述、顯微鑒定內(nèi)容對(duì)拳參藥材進(jìn)行比較并拍照。

水分測(cè)定：取樣品2 g，平鋪于干燥恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過(guò)10 mm，精密稱定，開(kāi)啟瓶蓋在100-105℃干燥5 小時(shí)，蓋好瓶蓋并移置干燥器中，放冷30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1 h，放冷，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5 mg為止。根據(jù)減少的重量，計(jì)算樣品中含水量（%）。

表2 梯度洗脫

總灰分測(cè)定：測(cè)定所用的供試品粉碎，過(guò)2 號(hào)篩，均勻混合后，取樣品粉末2 g（精確至0.01 g），置熾灼至恒重的坩堝中，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至600℃，使完全灰化至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算樣品中總灰分的含量（%）。

醇溶性浸出物測(cè)定：精密稱定供試品粉末4 g，置250 mL 的錐形瓶中，加入乙醇100 mL，密塞，冷浸，時(shí)時(shí)振搖6 h，再靜置18 h，用干燥濾器迅速濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，放置烘箱中105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。以干燥品重量計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量（%）。

1.3.3 沒(méi)食子酸含量測(cè)定

對(duì)照品溶液制備：取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，精密稱定，加30%甲醇制成每1 mL含20μg的溶液，即得。

供試品溶液制備：取本品粉末（過(guò)5 號(hào)篩）精密稱定0.25 g，置50 mL具塞錐形瓶中，加入30%甲醇25 mL，密塞，稱定重量，浸泡1 h，超聲處理（功率250W，頻率45 kHz）20 min，取出放冷，再稱定重量，加30%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為0.05%磷酸甲醇溶液（A）—0.05%磷酸溶液（B），梯度洗脫（表2）；檢測(cè)波長(zhǎng)272 nm，進(jìn)樣量為20μL，柱溫：25 溫。理論板數(shù)按沒(méi)食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。

圖1 珠芽蓼根莖及原植物圖（1.吉林延吉產(chǎn)根莖，2.吉林產(chǎn)原植物）

圖2 拳參藥材及其切面性狀（1.山東產(chǎn)拳參藥材，2.山東產(chǎn)拳參切面）

圖3 珠芽蓼與拳參藥材對(duì)比圖（1.珠芽蓼，2.拳參）

2 結(jié)果與分析

2.1 資源調(diào)查結(jié)果與分析

我國(guó)拳參分布較為廣泛，在古本草中記載的有山西（蒲州）、陜西（河西）及山東（淄州、冤句）、西藏（藏地）。目前拳參除山東、東北量產(chǎn)之外，在其他省份亦有分布。如江西、安徽、河南、內(nèi)蒙等地均有分布，但產(chǎn)量均不大，未形成市場(chǎng)。珠芽蓼在我國(guó)主要分布在長(zhǎng)江以北，分布極為廣泛，主要分布在青藏高原（西藏、青海、四川）、云貴高原（云南、貴州）和黃土高原（甘肅、寧夏、青海、內(nèi)蒙）以及東北地區(qū)，野生資源極為豐富。

在對(duì)吉林延吉產(chǎn)拳參進(jìn)行實(shí)地考察過(guò)程中，得知拳參集中生長(zhǎng)于二道白河地區(qū)，年產(chǎn)量約6噸，野生資源。采收時(shí)間不固定，一般為隨機(jī)采挖，采挖后清水沖洗，自然曬干即可。在本次收集的樣品中發(fā)現(xiàn)，東北產(chǎn)“拳參”個(gè)體較小，側(cè)根較多，通過(guò)原植物對(duì)比并且查閱《東北草本植物志》，認(rèn)為其是蓼科蓼屬拳參組植物珠芽蓼（Polygonum viviparum L.）。珠芽蓼藥材與原植物圖如圖1。

山東產(chǎn)拳參主要分布于威海市下的縣級(jí)市文登市及日照市周邊地區(qū)，分布范圍比較狹窄，年產(chǎn)量約12噸，野生資源。采收時(shí)間不固定，隨采隨收，產(chǎn)地加工方式主要為陰干，通過(guò)摩擦撞擊的形式去除須根，除去泥沙，曬干即得。

本次主要對(duì)山東威海、日照和吉林延吉產(chǎn)拳參進(jìn)行了產(chǎn)地資源考察工作，通過(guò)走訪得知拳參在山東威海、日照這兩個(gè)地方的使用歷史和認(rèn)識(shí)時(shí)間較長(zhǎng)，拳參在東北的使用歷史及認(rèn)識(shí)度較短，且在吉林延吉地區(qū)拳參與珠芽蓼混淆使用。暫時(shí)未發(fā)現(xiàn)人工種植，市場(chǎng)上流通的為野生資源。按照《中國(guó)藥典》的要求，拳參應(yīng)春初發(fā)芽時(shí)或秋季莖葉將枯萎時(shí)采挖，除去泥沙，曬干，去須根即得。實(shí)地調(diào)查的拳參產(chǎn)地中，都沒(méi)有按照此標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，采挖時(shí)間隨機(jī)，加工方式多樣。

2.2 質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果

2.2.1 性狀顯微鑒別

性狀鑒別：經(jīng)檢測(cè)，收集到的18 份樣品包括拳參和珠芽蓼兩個(gè)品種，不同產(chǎn)地拳參植物之間外觀上無(wú)明顯區(qū)別，混淆品種珠芽蓼之間也無(wú)差異，但不同品種之間差異較大。對(duì)比圖如圖3。

拳參性狀：呈扁長(zhǎng)條形或扁圓柱形，彎曲，有的對(duì)卷彎曲，兩端略尖，或一端漸細(xì)，長(zhǎng)6-13 cm，直徑1-2.5 cm。表面紫褐色或紫黑色，粗糙，一面隆起，一面稍平坦或略具凹槽，全體密具粗環(huán)紋，有殘留須根或根痕。質(zhì)硬，斷面淺棕紅色或棕紅色，維管束呈黃白色點(diǎn)狀，排列成環(huán)。

珠芽蓼性狀：呈扁圓柱形或團(tuán)塊狀，常彎曲成蝦狀，長(zhǎng)2-5 cm，直徑0.3-1.5 cm；表面呈棕褐色,稍粗糙,可見(jiàn)較密的環(huán)節(jié)及根痕；一面隆起，另一面較平坦或略具凹槽；有時(shí)先端具棕褐色葉鞘殘基。質(zhì)較硬，折斷面平坦，灰棕色或紫紅色；白色點(diǎn)狀的維管束排列成斷續(xù)的環(huán)狀。

顯微鑒別：18 個(gè)樣品的顯微特征相似。本品粉末淡棕紅色。木栓細(xì)胞多角形，含棕紅色物。草酸鈣簇晶甚多，直徑15-65 um。具緣紋孔導(dǎo)管直徑20-55 um，亦有網(wǎng)紋導(dǎo)管和螺紋導(dǎo)管。纖維長(zhǎng)梭形，直徑10-20 um，壁較厚，木化，孔溝明顯。淀粉粒單粒橢圓形、卵形或類圓形，直徑5-12 um。

圖4 拳參顯微特征（1.草酸鈣簇晶，2、5.導(dǎo)管，4.淀粉粒，3.橫切面，6.縱切面）

2.3 內(nèi)在質(zhì)量比較評(píng)價(jià)研究

表3 為18 個(gè)拳參樣品的水分、灰分、浸出物以及沒(méi)食子酸的含量測(cè)定結(jié)果。18 批樣品水分含量最低為9.2%，最高為13.5%，都符合2015 版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定（不得超過(guò)15.0%）。

不同產(chǎn)地的拳參及其混淆品灰分含量在4.4%-18.0%之間，其中3 號(hào)湖北黃岡產(chǎn)拳參混淆品種珠芽蓼最高為18.0%，平均含量為9.84%。

對(duì)拳參樣品中的浸出物含量進(jìn)行測(cè)定，由表3 可見(jiàn)，不同產(chǎn)地的拳參浸出物含量在8.8-34.4%之間，平均含量22.56%（2015版藥典規(guī)定浸出物含量不得低于15%），18 個(gè)樣品僅除去1，3，6 號(hào)樣品未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，其他均符合。

沒(méi)食子酸HPLC 測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖5。18 批樣品沒(méi)食子酸的含量在0.01%-0.18%之間，根據(jù)2015版藥典對(duì)拳參沒(méi)食子酸的含量規(guī)定為不得少于0.12%，測(cè)定結(jié)果顯示僅有3、9 號(hào)三個(gè)樣品符合要求，其中3 號(hào)湖北黃岡產(chǎn)拳參混淆品種珠芽蓼沒(méi)食子含量在所有樣品種最高。

根據(jù)《中國(guó)藥典》（2015 版）中拳參的質(zhì)量檢測(cè)要求，18 個(gè)樣品中9 號(hào)安徽亳州產(chǎn)拳參各指標(biāo)均達(dá)到藥典的要求。拳參的品種與產(chǎn)地的不同可能會(huì)對(duì)藥材化學(xué)成分內(nèi)在含量產(chǎn)生一定的影響。

3 討論與結(jié)論

圖5 沒(méi)食子酸HPLC圖譜

表3 拳參及珠芽蓼的水分、灰分、浸出物和沒(méi)食子酸含量測(cè)定結(jié)果

對(duì)樣品內(nèi)在含量分析，所測(cè)樣品中灰分含量大部分超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)范圍。生藥中的灰分，指生藥經(jīng)過(guò)灰化后遺留的不揮發(fā)的無(wú)機(jī)鹽和粘附在生藥表面的泥沙雜質(zhì)，若總灰分含量超過(guò)含量限定范圍，說(shuō)明生藥可能摻雜有泥土、沙石等無(wú)機(jī)雜質(zhì)，可能是加工方法中存在缺陷。另外，沒(méi)食子酸含量是拳參的主要有效成分，測(cè)定結(jié)果中拳參沒(méi)食子酸含量符合規(guī)定的樣品量極少。綜合分析國(guó)內(nèi)各個(gè)產(chǎn)地拳參的質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，前期采購(gòu)和收集的18個(gè)拳參樣品僅有一個(gè)滿足藥典標(biāo)準(zhǔn)，即9 號(hào)安徽亳州產(chǎn)的拳參質(zhì)量符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，其余產(chǎn)地的沒(méi)食子酸的含量甚至和藥典要求相差甚遠(yuǎn)，可能與拳參的采收時(shí)間有很大的關(guān)系。因此結(jié)合調(diào)研情況及質(zhì)量分析情況，初步選定安徽亳州產(chǎn)的拳參作為主要采購(gòu)貨源。

通過(guò)本次對(duì)拳參產(chǎn)地的實(shí)地調(diào)查，初步掌握了調(diào)查地區(qū)的拳參資源概況。拳參作為一個(gè)冷僻藥材的品種，市場(chǎng)對(duì)其認(rèn)知程度比較差，民間中藥材的基源認(rèn)知程度有限，地方習(xí)用混淆品種的混用情況嚴(yán)重，對(duì)易混淆的品種珠芽蓼與原藥材進(jìn)行各方面的對(duì)比分析，可作為藥材正確規(guī)范化辨析的參考，促進(jìn)拳參的藥材的流通和正確使用。經(jīng)調(diào)查拳參目前均為野生資源明顯的不足，同時(shí)產(chǎn)量的銳減速度非?？欤罅康娜瓍o(wú)序亂挖情況極為嚴(yán)重，資源量存在著十分嚴(yán)峻的壓力。為保證資源的有效可持續(xù)利用，合理的處理好利用和保護(hù)的關(guān)系極為重要，可試探性研究拳參的人工栽培種植，推廣規(guī)范化種植技術(shù)，確立合理的采收時(shí)間、加工方式，從而保證拳參原藥材質(zhì)量的穩(wěn)定。