宋伶俐，李勇霖，王 強(qiáng)，趙 征，沈元朝，王廣澤，張 玥，許小琴

（揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州225009）

七子白組方始載于《太平圣惠方》[1]中，后見(jiàn)于《御藥院方》[2]，在古代深得后宮佳麗的喜愛(ài)，用此方來(lái)美膚養(yǎng)顏，可使面色光悅、膚若凝脂；時(shí)至今日，七子白仍被廣大女性喜愛(ài)，也不斷地被人們進(jìn)行創(chuàng)新[3]，各種中藥美白配方中也能見(jiàn)到此方中的中藥。王冬艷[4]等人用改良七白膏進(jìn)行美白功效探究，發(fā)現(xiàn)七白膏能降低血清中酪氨酸酶含量；在臨床上治療女性黃褐斑的臨床觀察中[5]，七子白治療有效率高達(dá)91.67%，梁偉等人也研究發(fā)現(xiàn)，七白顆粒對(duì)女性氣滯淤血型黃褐斑有明顯的療效[6]。

為了正確地評(píng)價(jià)七子白的安全性，本試驗(yàn)選取了白色大鼠作為研究對(duì)象，進(jìn)行了皮膚急性毒性試驗(yàn)、刺激試驗(yàn)和過(guò)敏試驗(yàn)，為臨床提供一些理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 受試藥物：白術(shù)、白芷、白茯苓、白芍、白僵蠶、白蘞、白芨（均采購(gòu)于毫州市伯世信主藥飲片有限公司），經(jīng)揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院中獸醫(yī)教研室許小琴教授鑒定。所有藥物一起粉碎成粉末，過(guò)180 目篩子，備用。

1.2 主要試劑：2，4-二硝基氯代苯（上海化成工業(yè)發(fā)展有限公司），凡士林。

1.3 主要器材：剃須刀，電子秤，醫(yī)用膠布、紗布。

1.4 受試動(dòng)物：健康Wistar 白色大鼠，雌雄各半，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供。

2 試驗(yàn)前準(zhǔn)備

2.1 藥物準(zhǔn)備：七子白用蒸餾水作為溶劑，將1.1 中的七子白粉末配制成0.5g/ml 的膏狀藥物備用；2，4-二硝基氯代苯配制成1%和0.1%的濃度備用。

2.2 動(dòng)物皮膚準(zhǔn)備 完整皮膚組：于給藥前24 小時(shí)，用剃毛刀將大鼠背肌對(duì)稱(chēng)兩側(cè)去毛，去毛面積約為4×4cm，若在剃毛過(guò)程中皮膚有損傷，則不能參與完整皮膚組。

破損皮膚組：在完整皮膚組的基礎(chǔ)上進(jìn)行操作，剃毛區(qū)用酒精消毒，再用磨砂紙打磨，以滲血為度。

3 試驗(yàn)方法 參考《中藥藥理研究方法學(xué)》[7]第3 版的方法學(xué)，對(duì)七子白進(jìn)行皮膚急性毒性試驗(yàn)、刺激試驗(yàn)和過(guò)敏試驗(yàn)。

3.1 皮膚急性毒性試驗(yàn)

3.1.1 試驗(yàn)分組：將30 只大鼠隨機(jī)分為5 組，每組6 只(雌雄各半)，Ⅰ組為空白組、Ⅱ組為七子白完整皮膚高劑量組，Ⅲ組為七子白完整皮膚低劑量組，Ⅳ組為七子白破損皮膚高劑量組，Ⅴ組為七子白破損皮膚低劑量組。

3.1.2 給藥劑量及方法 給藥劑量Ⅰ組：凡士林；Ⅱ組和Ⅳ組：每只大鼠給予5g 七子白配制成的膏劑，Ⅲ組合Ⅴ組：每只大鼠給予1g 七子白配制的膏劑； 給藥方法為將各組對(duì)應(yīng)藥物涂于剃毛區(qū)，用一層油紙兩層紗布，再用無(wú)刺激的醫(yī)用膠布固定（防止大鼠互相舔食以及讓藥物更好接觸皮膚），給藥24h 后洗去藥物，給藥一次。

3.1.3 觀察指標(biāo)： 于洗去藥物后1h、24h、48h、72h 至第七天，每天仔細(xì)觀察大鼠運(yùn)動(dòng)行為、皮膚情況、有無(wú)死亡及全身毒性反應(yīng)，若有死亡需剖解觀察臟器是否有病理變化。

3.2 皮膚刺激試驗(yàn)

3.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組： 將30 只大鼠隨機(jī)分為5 組，每組6只(雌雄各半)；A 組為空白組，B 組為七子白完整皮膚組，C組為七子白破損皮膚膚，D 組為陽(yáng)性藥物完整皮膚組，E 組為陽(yáng)性藥物破損皮膚組.

3.2.2 給藥劑量及方法：A 組：給與凡士林，B 組和C 組：給予1g 七子白粉制成的膏劑，D 組和E 組：給予1%的2，4-二硝基氯代苯0.5ml。

給藥方法 單次刺激試驗(yàn)：給藥一次，給藥后用一層油紙和兩層紗布膠帶固定，給藥24h 后用溫水洗去藥物，觀察記錄給藥后1、24、48、72h 小時(shí)至第7 天。

多次刺激：按單次刺激試驗(yàn)方法給藥，連續(xù)給藥7d，末次給藥后洗去藥物并觀察7d。

3.2.3 觀察指標(biāo)：?jiǎn)未未碳ず投啻未碳そo藥后，記錄大鼠背部皮膚每日的紅斑及水腫情況，記錄紅斑水腫發(fā)生時(shí)間大鼠數(shù)量及消退時(shí)間。按表3-1進(jìn)行皮膚刺激評(píng)分，計(jì)算給組大鼠的刺激平均值，按表3-2評(píng)價(jià)各組藥物對(duì)皮膚的刺激強(qiáng)度。并仔細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)期間的大鼠運(yùn)動(dòng)行為、皮膚情況、有無(wú)死亡及全身毒性反應(yīng)，若有死亡需剖解觀察臟器是否有病理變化。

3.3 皮膚過(guò)敏試驗(yàn)

3.3.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組： 將18 只大鼠隨機(jī)分為3 組，每組6只（雌雄各半），M 組為空白組、N 組為七子白組、L 組為陽(yáng)性藥物組。

表3-1 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)表

表3-2 皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)

3.3.2 給藥劑量及方法：M 組： 給予凡士林，N 組： 給予1g七子白粉配制成的膏劑，L 組： 給予1%的2，4-二硝基氯代苯0.5ml。

給藥方法：按給組對(duì)應(yīng)藥物涂于剃毛區(qū)，用一層油紙兩層紗布以及無(wú)刺激醫(yī)用膠布固定，持續(xù)6h，在第7 天、第14 天分別用同樣方法重復(fù)一次，于末次致敏14 天后進(jìn)行激發(fā)接觸(M 組和N 組同3.3.2，L 組為0.1%的2，4-二硝基氯代苯0.5ml)，6h 后洗去藥物。

3.3.3 觀察指標(biāo)：觀察大鼠是否有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身過(guò)敏反應(yīng)，按表3-3記錄給皮膚過(guò)敏反應(yīng)并計(jì)算反應(yīng)平均值，根據(jù)表3-4計(jì)算各組藥物致敏率并判斷致敏強(qiáng)度

3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，采用F 檢驗(yàn)對(duì)正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行差異顯著分析，P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。

表3-3 皮膚過(guò)敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

平均反應(yīng)值=紅斑形成總分+水腫形成總分/合計(jì)動(dòng)物數(shù)

表3-4 皮膚致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

4 試驗(yàn)結(jié)果

4.1 皮膚急性毒性試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果顯示，在洗去藥物后至藥后7 天內(nèi)各組皮膚未出現(xiàn)紅斑、水腫等毒性反應(yīng)，大鼠精神狀態(tài)、行為活動(dòng)、飲食、呼吸、眼和黏膜、糞便及分泌物均正常，大鼠無(wú)死亡，各組大鼠體重也無(wú)明顯變化。各組大鼠體重變化見(jiàn)表4-1。

表4-1 急性毒性試驗(yàn)體重變化情況 g

4.2 皮膚刺激試驗(yàn)

4.2.1 單次刺激試驗(yàn)：由表4-2可見(jiàn)，給藥后7d 內(nèi)，完整皮膚組和破損皮膚組未出現(xiàn)紅斑、 水腫和出血點(diǎn)等異常情況，各組大鼠皮膚健康，刺激反應(yīng)評(píng)分為0，皮膚刺激強(qiáng)度平均分值為0，與空白組比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。陽(yáng)性藥物完整皮膚組和破損皮膚組皮膚出現(xiàn)輕微紅斑，一天后紅斑消失，刺激反應(yīng)評(píng)分為1。

表4-2 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分

4.2.2 多次刺激反應(yīng)大鼠背部皮膚連續(xù)給藥7 天后，七子白完整皮膚組皮膚均無(wú)紅斑水腫等毒性反應(yīng)，且與空白組相比，皮膚比空白組的白；七子白破損皮膚組的皮膚已恢復(fù)至正常；陽(yáng)性藥物完整皮膚和破皮膚組大鼠皮膚嚴(yán)重紅斑，并有結(jié)痂，表明七子白無(wú)明顯刺激。詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 七子白多次刺激試驗(yàn)結(jié)果

4.3 皮膚過(guò)敏反應(yīng)

試驗(yàn)結(jié)果表明，空白組、七子白組大鼠皮膚未見(jiàn)局部和全身過(guò)敏反應(yīng)，與空白組比沒(méi)有差異，陽(yáng)性藥物組給藥6h 洗去藥物后皮膚有輕微的紅斑，但無(wú)水腫，48h 后紅斑消失，此外各組大鼠行為活動(dòng)、精神狀態(tài)等均正常，無(wú)全身過(guò)敏反應(yīng)。大鼠無(wú)死亡。結(jié)果詳見(jiàn)表4-3、

5 分析與討論

本試驗(yàn)中的七子白由白芨、白芷、白術(shù)、白茯苓、白僵蠶、白芍和白蘞七種“白”姓中藥組成，以上每種藥物按等劑量組成[8]，從中醫(yī)形象學(xué)來(lái)說(shuō)，“白”姓藥物一般都具有增白潤(rùn)色的作用，以色治色，借其色白來(lái)治皮膚暗沉等病癥?，F(xiàn)代藥理研究表明： 白芷是一種抗氧化活性很強(qiáng)的中藥，它能抑制酪氨酸酶活性和抗氧化活性[9]，其有效成分香豆素能明顯抑制黑色素瘤B16 細(xì)胞中酪氨酸酶的合成[10]；在對(duì)小鼠四氯化碳（ccl4）誘導(dǎo)的肝臟損傷試驗(yàn)中，白術(shù)多糖能增加超氧化物歧化酶 （SOD） 和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性，降低丙二醛（MDA）和一氧化痰（NO）含量[11]；白芨中有很高的酚類(lèi)化合物，能有效地清除氧自由基，延緩衰老和促進(jìn)創(chuàng)傷愈合等作用[12，13]；白僵蠶水提醇沉法的提取物也能清除氧自由基[14]，所以臨床上常用來(lái)治療黃褐斑等皮膚病[15]；茯苓抗氧化的研究中發(fā)現(xiàn)[16]，茯苓能增強(qiáng)皮膚中羥脯氨酸含量，從而來(lái)延緩皮膚的衰老；在大鼠皮膚燙傷中實(shí)驗(yàn)中，白蘞能更快更有效的傷口愈合活性，刺激肉芽組織增生[17]。從本次試驗(yàn)多次試驗(yàn)結(jié)果中可看出，七子白完整皮膚在連續(xù)給藥7 次后，大鼠皮膚比空白的白嫩，且七子白破損皮膚組的皮膚也愈合，說(shuō)明七子白對(duì)皮膚不僅與美白的功效，還能促進(jìn)傷口的愈合，與前人報(bào)道一致。

表4-3 皮膚過(guò)敏反應(yīng)評(píng)分

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，七子白通過(guò)對(duì)大鼠的皮膚急性毒性試驗(yàn)、刺激試驗(yàn)(單次刺激和多次刺激)和過(guò)敏試驗(yàn)（致敏接觸和激發(fā)接觸），均無(wú)毒性反應(yīng)，無(wú)刺激，也未見(jiàn)明顯過(guò)敏反應(yīng)，因此認(rèn)為七子白是一個(gè)安全的皮膚外用藥方。