林元清 ， 沈德貴 ， 都占林 ， 劉海珍 ， 張正英 ， 李 靜 ， 郝云晴 ， 趙維章 ， 尼瑪扎西 ， 楊毅青 ， 蔡金山 ， 王謝忠

(1.青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 ， 青海 西寧 810001 ； 2.青海省共和縣倒淌河鎮(zhèn)獸醫(yī)站 ， 青海 共和 813000)

氟中毒又稱氟病，是動(dòng)物長(zhǎng)期連續(xù)攝入超過(guò)安全限量的少量無(wú)機(jī)氟化物引起的一種以骨、牙病變?yōu)樘卣鞯闹卸静?，常呈地方性群發(fā)[1]。牛羊慢性氟中毒是青海省部分地區(qū)主要流行的地方病之一。2017年春，青海省共和縣倒淌河鎮(zhèn)部分地區(qū)牧民反映：羊發(fā)生牙齒脫落、磨損嚴(yán)重及不明原因跛行。2017年3至9月，省政府組織獸醫(yī)、環(huán)保、衛(wèi)生等部門聯(lián)合調(diào)查。我們通過(guò)對(duì)發(fā)病牛、羊的臨床檢查、病羊?qū)φ掌蕶z、尿樣、血樣和組織樣品的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查分析等手段，對(duì)共和縣倒淌河鎮(zhèn)部分地區(qū)牛、羊牙齒脫落疾病開(kāi)展了病因調(diào)查。

1 對(duì)象與內(nèi)容

1.1 調(diào)查對(duì)象 在共和縣倒淌河鎮(zhèn)蒙古村、東衛(wèi)村和黑科村以及以共和縣倒淌河鎮(zhèn)方圓10 km為中心，沿100 km區(qū)域內(nèi)群眾反映和基層防疫部門報(bào)告的鄉(xiāng)鎮(zhèn)為重點(diǎn)，兼顧既往病史區(qū)，對(duì)牛、羊牙齒脫落疾病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。

1.2 調(diào)查內(nèi)容

1.2.1 發(fā)病情況調(diào)查 在調(diào)查點(diǎn)調(diào)查養(yǎng)殖戶牛、羊養(yǎng)殖情況，牛、羊牙齒磨損和脫落等發(fā)病情況，發(fā)病區(qū)域和范圍，牛、羊引進(jìn)情況，草場(chǎng)分布，放牧和飲水情況等暴露因素以及養(yǎng)殖戶人患病情況。

1.2.2 氟含量測(cè)定 在調(diào)查點(diǎn)養(yǎng)殖戶發(fā)病羊群中選擇牙齒磨損和脫落等發(fā)病嚴(yán)重的羊作為試驗(yàn)組，在氣候、海拔和地貌等自然條件相似地區(qū)的健康羊群中選擇未發(fā)病羊作為對(duì)照組，進(jìn)行氟含量測(cè)定，開(kāi)展病例對(duì)照分析。

1.2.3 微量元素測(cè)定 對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組羊群測(cè)量血和組織中氟、鈣、磷、銅、鐵、鋁、鋅、錳、鉻、砷、鉛、硒等微量元素含量，以及測(cè)定堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、三磷酸腺苷酶活性等生化指標(biāo)變化，開(kāi)展代謝分析及病因調(diào)查，并進(jìn)行血象分析。

1.2.4 病因調(diào)查 運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行單因素方差分析，用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行差異性顯著試驗(yàn)，分析發(fā)病和調(diào)查情況及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，驗(yàn)證病因及評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)。

2 方法

2.1 問(wèn)卷調(diào)查 流行嚴(yán)重的蒙古村、東衛(wèi)村和黑科村約766戶養(yǎng)殖戶，以及周邊未發(fā)病戶中通過(guò)入戶調(diào)查和現(xiàn)場(chǎng)詢問(wèn)的方式進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查。調(diào)查養(yǎng)殖戶的養(yǎng)殖及發(fā)病情況、掌握發(fā)病區(qū)域和范圍以及流行情況。共調(diào)查180戶養(yǎng)殖戶。

2.2 現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查 通過(guò)臨床診斷調(diào)查發(fā)病情況。選擇牙齒脫落、磨損等較嚴(yán)重的羊群作為試驗(yàn)組，每村選擇30只發(fā)病羊，其中羔羊、周歲羊、育成羊各10只，3個(gè)村共選擇90只。并選擇30只健康羊作為對(duì)照組。對(duì)選定的對(duì)照組和試驗(yàn)組共120只羊隨即佩戴耳標(biāo)備查。

2.3 樣品采集

2.3.1 尿樣和血樣采集 結(jié)合現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查，選擇與發(fā)病區(qū)地理?xiàng)l件相似、未發(fā)病地區(qū)的臨床健康羊30只為對(duì)照組；選擇發(fā)病區(qū)臨床癥狀嚴(yán)重的羊30只為重癥組；選擇發(fā)病區(qū)臨床癥狀較輕、癥狀不明顯的羊30只為輕癥組。采集3個(gè)組羊全血樣本90份和尿樣本90份。

2.3.2 剖檢及組織樣品采集 隨機(jī)選擇對(duì)照組羊5只、重癥組羊10只和輕癥組羊5只進(jìn)行剖檢，采集肺、腎、肝、腦、骨骼、牙齒等組織器官樣本320份。

2.4 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

2.4.1 檢測(cè)方法 血清中氟用WS/T 30-1996血清中氟化物的測(cè)定離子選擇電極法；尿中氟用WS/T 30-1996尿中氟的離子選擇電極測(cè)定法；血清總鈣用火焰原子吸收分光光度測(cè)定法；血清磷用還原鉬藍(lán)法測(cè)定。

2.4.2 主要儀器設(shè)備 原子吸收分光光度計(jì)、紫外分光光度計(jì)、酸度計(jì)、氟離子選擇電機(jī)等。

2.4.3 化學(xué)試劑 氟化鈉、氯化鈉、氫氧化鈉、冰乙酸、氧化鑭、氯仿、三氯醋酸、鉬酸銨、鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液等。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 調(diào)查和檢測(cè)結(jié)果用Excel表格創(chuàng)建數(shù)據(jù)庫(kù)，輸入SPSS Statistics 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)原理進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

3 結(jié)果

3.1 臨床癥狀 患病牛、羊牙齒無(wú)光澤，齒釉質(zhì)部分呈淡黃色或黑色；臼齒過(guò)早磨損；牙齒脫落；有波狀齒、銳齒；個(gè)別羊有齒齦炎、齒槽膿腫。通過(guò)收集牧民自食后留下的牛、羊骨標(biāo)本，羊頭骨標(biāo)本除周歲內(nèi)羊牙齒無(wú)變化外，其余年齡段羊頭骨標(biāo)本明顯出現(xiàn)上下門齒、臼齒磨損嚴(yán)重，呈典型的波狀齒、銳齒形態(tài)，齒釉質(zhì)部分呈黑黃色(見(jiàn)中插彩版圖1～5)。

圖1 發(fā)病羊下頜骨

圖2 發(fā)病羊下頜骨頭

圖3 發(fā)病牛門齒

圖4 發(fā)病羊門齒

圖5 發(fā)病羊臼齒

3.2 調(diào)查結(jié)果 通過(guò)對(duì)共和縣倒淌河鎮(zhèn)及周邊的龍羊峽鎮(zhèn)、江西溝鄉(xiāng)的初步調(diào)查，發(fā)病范圍主要在倒淌河鎮(zhèn)的蒙古村、東衛(wèi)村和黑科村3個(gè)村，3個(gè)村共有12個(gè)社863戶3 296人，牲畜存欄88 895頭(只匹)(羊78 790只、牛9 916頭、馬189匹)。

對(duì)東衛(wèi)、黑科、蒙古和哈乙亥4個(gè)村102戶牧戶進(jìn)行實(shí)地調(diào)查，隨機(jī)抽樣檢查了牛、羊17 282頭(只)，其中牛2 130頭、羊15 152只。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牛、羊發(fā)病時(shí)間集中在2015年至2017年，該地區(qū)有94戶牧戶家中養(yǎng)殖的牛、羊均有牙齒異常磨損、脫落癥狀，?？傮w發(fā)病率為10.09%(215/2 130)，羊總體發(fā)病率為30.41%(4 607/15 152)，其中成年牛發(fā)病率為12.30%(195/1 585)，幼年牛發(fā)病率為3.67%(20/545)；育成羊發(fā)病率52.09%(4 472/8 585)，周歲羊發(fā)病率7.68%(135/1 757)，當(dāng)年羔羊未發(fā)病。通過(guò)調(diào)查，牛、羊發(fā)病區(qū)集中分布在日月山以西東衛(wèi)村至哈乙亥村東約20～30 km范圍內(nèi)。 4個(gè)村中東衛(wèi)村、蒙古村、黑科村羊的發(fā)病率顯著高于哈乙亥村。發(fā)病程度呈沿109國(guó)道南北兩側(cè)15～20 km范圍內(nèi)自東向西逐漸降低的趨勢(shì)。發(fā)病牲畜主要以羊?yàn)橹?，尤?歲以上的育成羊發(fā)病率較高(見(jiàn)表1)。

表1 共和縣倒淌河鎮(zhèn)牛、羊牙齒脫落磨損情況調(diào)查結(jié)果統(tǒng)計(jì) (只)

3.3 檢測(cè)結(jié)果

3.3.1 氟元素檢測(cè) 對(duì)照組、重癥組和輕癥組3組各采集尿樣30份、血樣30份，對(duì)共90份尿樣和90份血樣進(jìn)行氟含量檢測(cè)。尿液氟含量數(shù)平均值分別為對(duì)照組4.32 mg/L、重癥組11.11 mg/L和輕癥組9.36 mg/L；血液氟含量數(shù)平均值分別對(duì)照組0.06 mg/L、重癥組0.18 mg/L和輕癥組0.16 mg/L。通過(guò)對(duì)檢測(cè)結(jié)果平均值的事后檢驗(yàn)，顯示尿氟含量對(duì)照組與重癥組、輕癥組差異極顯著(P<0.01)；重癥組與輕癥組差異不顯著(P>0.05)。血氟含量對(duì)照組與重癥組、輕癥組差異極顯著(P<0.01)；重癥組與輕癥組差異不顯著(P>0.05)(見(jiàn)表2)。

3.3.2 鈣、磷元素檢測(cè) 血清鈣含量數(shù)學(xué)平均值分別為對(duì)照組176.10 mg/kg·bw、重癥組151.84 mg/kg·bw和輕癥組162.11 mg/kg·bw。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析血清鈣含量對(duì)照組與重癥組差異極顯著(P<0.01)；對(duì)照組與輕癥組差異顯著(P<0.05)；重癥組與輕癥組差異不顯著(P>0.05)。血清磷含量數(shù)平均值分別為對(duì)照組1.64 mg/kg·bw、重癥組1.90 mg/kg·bw和輕癥組1.85 mg/kg·bw。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析血清磷含量對(duì)照組與輕癥組、重癥組差異不顯著(P>0.05)；重癥組和輕癥組差異不顯著(P<0.05) (見(jiàn)表3)。

表2 尿氟、血氟含量檢測(cè)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果

表3 血清鈣、血清磷含量檢測(cè)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果

4 討論

發(fā)病地區(qū)羊體內(nèi)氟含量顯著高于對(duì)照組健康羊，同時(shí)，發(fā)病區(qū)羊血清中鈣水平顯著低于未發(fā)病地區(qū)健康羊。體內(nèi)氟含量蓄積過(guò)量時(shí)，可影響細(xì)胞酶系統(tǒng)的功能，破壞鈣磷代謝平衡，造成骨組織鈣鹽的吸收和蓄積障礙[2-3]。血鈣水平下降可引起甲狀旁腺分泌增加，導(dǎo)致溶骨作用加強(qiáng)而骨質(zhì)疏松[4]。牙齒等部位鈣含量的降低導(dǎo)致牙齒磨損加快，形成參差不齊鋸齒狀磨損[5]。過(guò)量的氟在牙齒表現(xiàn)出氟斑釉齒。發(fā)病牲畜主要以羊?yàn)橹?，尤?歲以上的育成羊發(fā)病率較高，癥狀較嚴(yán)重，羔羊和犢牛未見(jiàn)發(fā)病癥狀，大牛發(fā)病率較低。表明隨著年齡增加，體內(nèi)氟含量蓄積遞增，發(fā)病癥狀加重。造成死亡原因多為病羊采食困難而瘦弱、虛弱所致。大部分牧戶在羊未表現(xiàn)嚴(yán)重癥狀前將其出售。從外地調(diào)入羊發(fā)病率和癥狀均較低。

從目前已有數(shù)據(jù)分析，導(dǎo)致倒淌河鎮(zhèn)家畜牙齒脫落疾病與羊體內(nèi)氟含量超標(biāo)有關(guān)，初步診斷為牛、羊氟慢性中毒病，但還有待其他試驗(yàn)作為依據(jù)。另外還需要環(huán)保部門調(diào)查發(fā)病區(qū)及周邊環(huán)境的檢測(cè)數(shù)據(jù)，以便于做進(jìn)一步的分析。下一步將繼續(xù)開(kāi)展肺、腎、肝、腦、骨骼、牙齒和股骨肌、背長(zhǎng)肌等組織器官中氟、鈣、磷、銅、鐵、鋁、鋅、錳、鉻、砷、鉛、硒等其他元素含量的檢測(cè)。進(jìn)行血象分析，進(jìn)行性磷酸酶、酸性磷酸酶、三磷酸腺苷酶活性以及堿生化指標(biāo)等生理生化指標(biāo)檢測(cè)，開(kāi)展代謝分析及病因調(diào)查。

5 結(jié)論

根據(jù)對(duì)尿、血清和組織器官中氟檢測(cè)和分析，發(fā)病區(qū)羊體內(nèi)氟元素含量顯著高于未發(fā)病地區(qū)健康羊，結(jié)合血清中鈣磷含量檢測(cè)和分析，及發(fā)病區(qū)羊、牛的臨床癥狀和流行病學(xué)調(diào)查，分析導(dǎo)致倒淌河地區(qū)牛、羊牙齒脫落疾病病因與牛羊體內(nèi)氟含量超標(biāo)有關(guān)，初步診斷為牛、羊慢性氟中毒。