曾林峰 ， 張學良 ， 李建喜

(1.江西省南昌市南昌動物園管理處 ， 江西 南昌 330025； 2.江西省南昌市動物疫病預防控制中心 ，江西 南昌 330008； 3.江西省家畜血吸蟲病防治站 ， 江西 南昌 330023)

蒙古野驢為國家一級保護動物，屬瀕危動物。成年體重約250公斤，壽命25-30年。分布于中蒙邊界的高海拔地區(qū)。肝片吸蟲主要感染牛羊駱駝等反芻動物，蟲體寄生于膽管，引起急性或慢性肝炎和膽管炎，并伴發(fā)全身性中毒現(xiàn)象和營養(yǎng)障礙，以致死亡。2016年8月12日本園1頭28歲蒙古野驢經(jīng)治療無效死亡，剖檢發(fā)現(xiàn)大量肝片吸蟲。因江西地區(qū)為肝片吸蟲多發(fā)地，綜合發(fā)病經(jīng)過流行病學和剖檢結果診斷為感染肝片吸蟲致死。報告如下。

1 發(fā)病經(jīng)過

該蒙古野驢為雌性，老齡，未生育，自1歲時從外地引進，6年前搬遷至新園。在本園共生活27年，體況健康，未曾出現(xiàn)任何疾病。平時以青草、苜蓿草、水果、精料為食。每年2次常規(guī)驅蟲。發(fā)病約半月，體重從260 kg急速下降至200 kg，出現(xiàn)不明原因消瘦。

2 臨床癥狀

發(fā)病期間精神食欲無異常，大小便正常，未見其他明顯臨床癥狀。曾給予消炎藥、營養(yǎng)物質等，未有起色。死亡前1天突然不能站立，強行抬起后，勉強行走兩步，后肢無力支撐，又跌倒在地。立即給予氨基比林、維生素B1、B12等藥物。第2天早晨發(fā)現(xiàn)死亡。

3 剖檢

肝臟外觀大理石樣，腫大，硬化。肝臟膽管內有大量肝片吸蟲，幾乎將膽管堵死。膽管壁紅腫增厚。膽囊內有肝片吸蟲，膽汁紅褐色。膽總管出現(xiàn)3處囊腫，內有肝片吸蟲，幾乎堵死十二指腸開口處。十二指腸空虛擴張菲薄。共計有肝片吸蟲300余條。成蟲長30～40 mm，寬10～15 mm，褐色，呈扁平葉片狀，表面覆有細刺。前端伸展呈圓錐狀突出，基部擴展猶如一對寬肩，前部寬于后部，有口吸盤和腹吸盤。

4 防治措施

場地內室和用具使用燒堿消毒，后灑布生石灰。其余動物口服肝蛭凈2～3 mg/kg·bw，2周1次，連用3個月。

表1 儀器及其功能

表2 供血犬的選擇標準

6 常用血液制劑分類

人類臨床上血液制劑種類比較豐富，但寵物臨床上受技術手段、成本、人員培訓等因素所限，主要血液制劑為全血、紅細胞懸液、新鮮冰凍血漿、冰凍血漿等。

7 血液的采集

輸注用的血液制劑，必須用含有抗凝劑的專用的一次性使用塑料血袋采集血液。用于制備全血制劑的血袋為單袋。用于制備成分血制劑的血袋為帶有衛(wèi)星袋的多聯(lián)袋。衛(wèi)星袋為血漿轉移帶和紅細胞保存液袋，各個衛(wèi)星袋與血袋之間通過導管形成一個密閉系統(tǒng)，減少了血液制劑制備過程中的暴露幾率。采血時需要4～5人，1人負責采血，1人為助手并負責記錄信息，2～3人負責安撫、保定供血犬。

8 血液制劑的制備

8.1 全血制劑 血液采集完成后，將血袋的采血導管熱合成段，以備配血、復檢使用，標記相關信息，4 ℃儲存，等待檢測結果決定是否放行。

8.2 成分血制劑的制備 血液采集完成后，將聯(lián)袋中采血袋的采血導管熱合成段。將聯(lián)袋放入離心機離心，離心力5 000 g，離心5 min。而后利用血液分漿夾分離血漿與紅細胞。分離完成后，將衛(wèi)星袋中的紅細胞保存液與紅細胞混勻即為紅細胞懸液，標記紅細胞懸液和血漿的相關信息。將血漿放入-50 ℃以下的環(huán)境中速凍，完成后即為新鮮冰凍血漿。在規(guī)定條件下儲存紅細胞懸液和新鮮冰凍血漿，等待檢測結果決定是否放行。采血后6-8 h內分離的血漿速凍后為新鮮冰凍血漿；超過6-8 h分離的血漿速凍后為冰凍血漿。新鮮冰凍血漿儲存1年后，即作為冰凍血漿使用。見中插彩版圖1。

9 血液制劑的儲存

犬紅細胞制劑(犬全血、紅細胞懸液)應放入專用的儲血冰柜，儲藏溫度1～6 ℃。犬血漿制劑(犬新鮮冰凍血漿、犬冰凍血漿)儲藏溫度為-20 ℃以下(表3)。新鮮冰凍血漿有效期滿后即為冰凍血漿，有效期在原有基礎上增加4年。

10 血液制劑的運輸

運輸容器應有保溫和密封性，并能夠阻擋內部泄漏和外部壓力。我們經(jīng)實踐后發(fā)現(xiàn)，厚度為35～40 mm高密度泡沫保溫箱即可達到以上要求。通過查閱文獻[14]并結合實際進行調整，運輸容器內部構造從底層開始依次為：蓄冷劑、吸水紙、緩沖帶、血液制劑、緩沖帶、吸水紙、蓄冷劑、容器蓋。

用于運輸犬紅細胞制劑的蓄冷劑為化學冰袋。用于運輸犬血漿制劑的蓄冷劑為干冰和化學冰袋，其中化學冰袋放置于血漿袋之間的間隙中。

表3 血液制劑保質期

吸水紙是為了吸收運輸容器內的滲漏與水汽。材質可為紙巾、報紙或一次性尿布，以一次性尿布效果最佳。盛有血液制劑的血袋，應單獨包裝在一個封閉的塑料袋中，以防止意外導致的泄露。

11 血液制劑管理

11.1 供血犬與血液制劑信息登記 供血犬要做好檔案以備查驗，檔案包括出生日期、血型、體重、臨床健康狀況、免疫記錄、驅蟲記錄、病原檢測記錄、體溫檢測記錄、血常規(guī)檢測記錄、采血記錄等。血液制劑制備完成后，登記血液制劑編號、采血日期、供血犬耳號、血傳病原與無菌檢測結果、儲存記錄、銷毀或出庫記錄，每一袋血液制劑都有清楚的來源與去處。

11.2 血液制劑生物安全檢測 對血液制劑進行血傳病原檢測、無菌檢測。根據(jù)檢測結果，剔除不合格的血液制劑。

11.3 血液制劑分區(qū)儲存與放行 應設立物理隔離的合格品區(qū)、待檢區(qū)和不合格品區(qū)，并有明顯標識。進出不同儲存區(qū)的血液制劑應做好記錄，至少包括編號、血型、數(shù)量、時間、交接人等。對檢測不合格、外觀不合格、異常采集等的血液制劑進行標識，移入不合格品區(qū)，統(tǒng)一按醫(yī)療廢棄物處理。將尚無最終檢測結果的血液制劑，繼續(xù)儲存在待檢區(qū)，并做好標識。檢測合格的全血制劑或成分血制劑，都應有唯一編碼，確?？勺匪菪?。只有外包裝、內容物及儲存過程完全合格，標識清楚，可追溯到相應供血犬的產(chǎn)品，才可放行。

12 實驗室檢測

12.1 常規(guī)檢測 檢測供血犬的血常規(guī)，并抽檢血傳病原及抗體滴度，抽檢合格后方可進行血液制劑制備。供血犬采血時，需同步留樣，用以檢測血液中可能攜帶的病原，合格后放行。

12.2 血傳病原的檢測 輸血過程中，絕對的安全是無法保證的。除輸血反應外，血傳病原可引起受血犬發(fā)病，因此所有供血犬都應該進行血傳病原檢測。根據(jù)美國獸醫(yī)內科學學會關于供血犬傳染病篩查的共識聲明[15-16]，需要檢測的病原至少符合以下標準中的4個：(1)病原被證實能通過血液傳播而導致受血犬臨床感染；(2)病原能引起犬的亞臨床感染，導致臨床人員將其誤認為健康供血犬；(3)被感染動物的血液，可以分離培養(yǎng)出病原，或可以用分子生物學方法檢出病原；(4)受血犬感染病原后，發(fā)生危及生命的疾病，且用抗菌藥物難以治愈。

結合國內犬病流行情況，血傳病原檢測至少應包括以下內容：無形體屬(Anaplasmaspp)，巴貝蟲屬(Babesiaspp)，巴爾通體屬(Bartonellaspp)，埃立克體屬(Ehrlichiaspp)，嗜血支原體(Hemoplasmas)，利什曼原蟲屬(Leishmaniaspp)，犬布魯菌(Brucellacanis)。檢測頻率半年1次，并不定時抽檢。利什曼原蟲屬，在感染風險低的地區(qū)不需要檢測。

犬心絲蟲(Heartworm)不符合通過輸血傳播病原的標準，不在篩查范圍內。因為供血犬血液中的微絲蚴輸入受血犬后，并不會導致受血犬發(fā)生心絲蟲病[15]，但美國獸醫(yī)內科學學會2015年更新了這一說法，因為存在微絲蚴攜帶沃爾巴克(氏)體屬(Wolbachiaspp)的情況，遂建議在其流行地區(qū)進行病原篩查[16]。

13 討論

人類臨床與國外寵物臨床更多地用成分血制劑替代全血制劑，不但節(jié)約了血液資源，還降低了輸血風險。成分血制劑是在一定條件下，用物理方法分離出全血內的一種或幾種血液成分而制成的血液制劑。

目前國內寵物臨床過多使用全血制劑由兩個方面造成：首先是由于專業(yè)血站的缺乏，寵物臨床上很難獲得合格的成分血制劑；其次是臨床醫(yī)師輸血知識欠缺。輸血時輸注的血液成分并不是“越全越好”，正確使用血液成分進行治療，可達到更好的療效，同時可避免多余成分帶來的危害[17]。解決問題的關鍵，即在于建立專業(yè)血站，生產(chǎn)保障質量與生物安全的血液制劑，同時提供臨床輸血相關資料，規(guī)范血液制劑用法。

國外動物血站供血犬的來源主要為2個：血站自行飼養(yǎng)的小規(guī)模種群和向社會征集供血犬。就目前國內寵物業(yè)現(xiàn)狀來看，我們認為，維持一個穩(wěn)定的供血犬種群是更好的選擇。首先，國內寵物主人對寵物獻血認可度低下，寵物醫(yī)師缺乏制備血液制劑的知識，限制了向社會廣泛征集供血犬的可行性；其次，用目前社會上現(xiàn)存供血犬制備的血液制劑，質量無保障，特別是存在巨大生物安全風險。

以保障動物福利為根本，以提供優(yōu)質的血液制劑為目的，專業(yè)化犬血站可以維持一個較大規(guī)模、隔離飼養(yǎng)的供血犬群，隨時監(jiān)測犬的健康狀態(tài)，杜絕血傳病原的傳播；血液制劑的采集、制備、儲存和運輸均符合相關標準，這是目前的個體散戶不可能做到的。

經(jīng)過長期努力，我們已初步建立了專業(yè)的犬血站及相關企業(yè)標準，測定了供血犬種群的紅細胞生理值與脆性，調查了比格犬DEA1血型的遺傳規(guī)律，檢測了健康比格犬凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ含量及其在犬新鮮冰凍血漿儲存過程中的穩(wěn)定性，檢測了犬新鮮冰凍血漿總蛋白、白蛋白含量及CPV、CDV、CAV的抗體滴度，建立了犬血液采集及血液制劑制備的操作流程，制定了犬血站運行的一些標準和規(guī)范，并對犬新鮮冰凍血漿進行了較大規(guī)模的臨床試驗等。

專業(yè)化犬血站建設在我國才剛剛開始，需要更多專家與同行投入資源，積累經(jīng)驗。相信不久的將來，專業(yè)化、標準化血站會成為寵物臨床供血的主體，這不僅有利于寵物的健康，同時對保障社會公共安全也有重要意義。